miR-17与冠心病患者冠状动脉病变程度、侧支循环形成及血清Ox-LDL、25（OH）D3的关系

范迎春 卓著 李潇 赵立飞 卢静海

胜利油田胜利医院1检验科，5心内科（山东东营 257055）；临沂市第三人民医院2心血管内科，3内三科（山东临沂 276023）；4临沂市经济开发区人民医院检验科（山东临沂 276000）

冠心病（coronary heart disease，CHD）是发病率和病死率较高的一种心血管疾病，患者因冠脉狭窄或阻塞导致心肌供血严重不足，从而引发一些列并发症，是严重威胁人类生命健康的慢性疾病之一［1］。冠状动脉侧支循环是冠脉主干严重狭窄或阻塞时，由其分支发出的血流供应，对冠心病临床治疗及预后有重要意义［2］。研究［3］报道，良好的冠脉侧支循环与冠心病患者临床症状及预后直接相关。冠脉侧支循环形成过程复杂，研究影响侧支循环形成的因素将会对冠心病治疗提供思路。近年来研究［4］表明miR-17与冠心病内皮细胞氧化应激反应密切相关，调控miR-17表达有助于改善患者血流供应。因此，本研究通过检测不同冠脉病变程度及不同侧支循环患者血清miR-17、25（OH）D3、Ox-LDL水平，分析miR-17与患者冠脉病变、侧支循环形成及25（OH）D3、Ox-LDL的关系，以期为临床有效治疗冠心病提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2014年3月至2017年10月在心内科确诊的157例稳定性冠心病患者作为研究对象，其中男89例，女68例，年龄53～82岁，平均（68.51±14.36）岁。另选同时期体检健康者100例作为对照组，其中男63例，女37例，年龄51～80岁，平均（66.93±12.84）岁。两组性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。病例组纳入标准：（1）均符合中华医学会心血管病学分会《慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南》中诊断标准［5］；（2）经冠状动脉造影显示至少一支冠状动脉主血管（左主干、左前降支、左回旋支、右冠状动脉）狭窄＞50%；（3）患者及其家属对本研究知情并签署同意书；（4）经医院伦理委员会批准。排除标准：（1）有既往冠状动脉旁路移植术或介入治疗病史；（2）严重心功能不全、心脏瓣膜病等心血管疾病；（3）合并严重肝功能不全、急或慢性感染性及炎症性疾病；（4）合并恶性肿瘤及血液系统疾病；（5）临床资料不全影响临床疾病诊断。

1.2方法

1.2.1病例分组（1）冠状动脉狭窄程度分组：采用SYNTAX评分评估患者冠状动脉狭窄程度，并根据SYNTAX评分将患者分为冠状动脉病变重度组、中度组和轻度组。该评分包括优势类型、累及节段、病变支数及病变不良特征4部分，每部分评分之和为SYNTAX评分，评分标准参考（www.SYNTAXscoe.com），定义＞33分为重度组，23～32分为中度组，0～22分为轻度组。（2）冠状动脉侧支循环分组：采用Rentrop法进行冠状动脉侧支循环情况分级，无侧支循环为0级，侧支血管直径＜1 mm，缓慢充盈为1级，侧支血管显影速度介于缓慢和正常之间为2级，侧支血管直径＞1 mm，迅速显影接近正常为3级。定义0～1级为侧支循环不良组，2～3级为良好组。

1.2.2血清指标检测分别采集患者空腹时肘静脉血5 mL，采用试剂盒法提取血清总RNA，RTPCR检测血清miR-17相对表达量，试剂盒均购于天根生化科技（北京）有限公司。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清25羟基维生素D3［25（OH）D3］水平和氧化修饰低密度脂蛋白（Oxidized lowdensity lipoprotein，Ox-LDL）水平，人25（OH）D3、Ox-LDL ELISA试剂盒均购于森贝伽（南京）生物科技有限公司。

1.3统计学方法统计学软件SPSS 22.0用于本研究数据统计分析，计量资料表示为标准差±均数，单因素方差分析用于多组之间比较，配对t检验用于两两比较，Pearson相关系数法用于相关性分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1对照组和病例组血清指标比较与对照组相比，病例组血清miR-17相对表达量Ox-LDL水平升高，25（OH）D3水平降低，两组血清 miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 对照组和病例组血清指标比较Tab.1 Comparison of serum indexes between control group and case group ± s

表1 对照组和病例组血清指标比较Tab.1 Comparison of serum indexes between control group and case group ± s

组别对照组病例组t值P值例数100 157 miR-17相对表达量0.76±0.24 1.33±0.41 12.591 0.000 Ox-LDL（μg/dL）31.46±9.63 69.83±14.25 23.692 0.000 25（OH）D3（ng/mL）15.62±4.87 6.73±2.13 20.072 0.000

2.2不同冠状动脉狭窄程度组临床资料比较病例组冠心病患者冠状动脉狭窄轻度组、中度组和重度组性别、年龄、体质量、高血压史、糖尿病史及血清总胆固醇、甘油三酯等一般临床资料比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见表2。

表2 不同冠状动脉狭窄程度组一般临床资料比较Tab.2 Comparison of clinical data of different coronary artery stenosis groups ± s

表2 不同冠状动脉狭窄程度组一般临床资料比较Tab.2 Comparison of clinical data of different coronary artery stenosis groups ± s

组别轻度组中度组重度组χ2/F值P值例数52 61 44性别（男/女）27/25 29/32 33/11 1.836 0.399年龄（岁）68.74±14.19 67.93±13.62 69.04±15.08 0.088 0.916体质量（kg）70.32±16.61 69.81±15.39 71.10±17.42 0.079 0.924高血压史［例（%）］41（78.84）49（80.32）36（81.82）0.133 0.936糖尿病史［例（%）］25（48.08）29（47.54）23（52.27）0.258 0.879总胆固醇（mmol/L）3.99±1.15 4.11±1.24 4.18±1.31 0.297 0.743甘油三酯（mmol/L）1.05±0.29 1.10±0.32 1.17±0.37 1.624 0.201

2.3不同冠状动脉侧支循环程度组临床资料比较病例组冠心病患者冠状动脉侧支循环良好组和不良组性别、年龄、体质量、高血压史、糖尿病史及血清总胆固醇、甘油三酯等一般临床资料比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见表3。

表3 不同冠状动脉侧支循环程度组一般临床资料比较Tab.3 Comparison of clinical data of different coronary artery collateral circulation degree groups ± s

表3 不同冠状动脉侧支循环程度组一般临床资料比较Tab.3 Comparison of clinical data of different coronary artery collateral circulation degree groups ± s

组别良好组不良组t值P值例数82 75性别（男/女）42/40 47/28 2.091 0.148年龄（岁）68.14±13.92 68.91±14.23 0.787 0.432体质量（kg）70.28±16.92 70.41±17.33 0.048 0.962高血压史［例（%）］62（75.61）64（85.33）2.337 0.126糖尿病史［例（%）］37（45.12）40（53.33）1.057 0.304总胆固醇（mmol/L）4.03±1.30 4.15±1.36 0.565 0.573甘油三酯（mmol/L）1.07±0.28 1.14±0.33 1.437 0.153

2.4不同冠状动脉狭窄程度组SYNTAX评分和血清指标水平不同冠状动脉狭窄程度组之间血清miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比较差异有统计学意义（P＜0.05）；重度组和中度组血清miR-17、Ox-LDL水平显著高于轻度组（P＜0.05），重度组血清miR-17、Ox-LDL水平显著高于中度组（P＜0.05）；重度组和中度组血清25（OH）D3水平显著低于轻度组（P＜0.05），重度组血清25（OH）D3水平显著低于中度组（P＜0.05）。见表4。

表4 不同冠状动脉狭窄程度组SYNTAX评分和血清指标水平比较Tab.4 Comparison of SYNTAX score and serum index in different degree of coronary artery stenosis ± s

表4 不同冠状动脉狭窄程度组SYNTAX评分和血清指标水平比较Tab.4 Comparison of SYNTAX score and serum index in different degree of coronary artery stenosis ± s

组别轻度组中度组重度组F值P值例数52 61 44 SYNTAX评分20.39±6.65 28.42±9.17 37.67±11.25 43.005 0.000 miR-17相对表达量1.14±0.31 1.29±0.40 1.61±0.52 15.986 0.000 Ox-LDL（μg/dL）58.94±13.22 70.57±15.42 81.67±17.36 26.353 0.000 25（OH）D3（ng/mL）7.39±2.21 6.74±2.05 5.93±1.83 6.064 0.003

2.5不同冠状动脉侧支循环程度组血清指标水平不同冠脉侧支循环程度组血清miR-17、Ox-LDL、25（OH）D3水平比较差异有统计学意义（P＜0.05）；不良组血清miR-17、Ox-LDL水平显著高于良好组（P＜0.05），血清25（OH）D3水平显著低于良好组（P＜0.05）。见表5。

2.6病例组miR-17与SYNTAX评分、Rentrop分级及Ox-LDL、25（OH）D3水平的关系病例组血清miR-17水平与SYNTAX评分呈显著正相关关系（r=0.653，P=0.000），与Rentrop分级呈显著负相关关系（r=-0.624，P=0.000），与Ox-LDL水平呈显著正相关关系（r=0.711，P=0.000），与25（OH）D3水平呈显著负相关关系（r=-0.735，P=0.000）。见表6。

表5 不同冠状动脉侧支循环程度组血清指标水平比较Tab.5 Comparison of serum indexes in different degree of collateral circulation of coronary artery ± s

表5 不同冠状动脉侧支循环程度组血清指标水平比较Tab.5 Comparison of serum indexes in different degree of collateral circulation of coronary artery ± s

组别良好组不良组t值P值例数82 75 miR-17相对表达量1.12±0.33 1.56±0.49 6.649 0.000 Ox-LDL（μg/dL）61.12±13.66 79.35±16.99 7.442 0.000 25（OH）D3（ng/mL）7.42±2.22 5.98±1.83 4.411 0.000

表6 病例组血清指标之间及与SYNTAX评分和Rentrop分级的相关性Tab.6 correlation between serum indexes in case group and SYNTAX score and Rentrop classification

3 讨论

miR-17家族是高度保守的成熟miRNA，研究表明，miR-17大量存在于内皮细胞中，在肿瘤组织中抑制其表达可促进内皮细胞外周血管生成［6］。近年来研究［7］表明，miR-17-5p作为冠脉粥样硬化新的生物标志物，与冠脉粥样硬化严重程度有关。但其冠心病冠脉侧支循环形成之间的关系尚未见报道。本研究结果，病例组血清miR-17水平显著高于对照组，冠脉病变重度组和中度组显著高于轻度组，重度组显著高于中度组，说明随患者冠脉狭窄程度加重血清miR-17水平呈明显升高趋势，与前人研究结果一致。相关性分析结果，病例组血清miR-17水平与SYNTAX评分呈显著正相关关系，说明血清miR-17水平可能是冠脉病变的危险因素。临床研究表明，超过25%患者在冠脉狭窄供血不足的刺激下都会产生周边小血管，代偿性改善缺血区域血流供应［8］。但其血管再生非常缓慢，MEYER等［9］研究表明血管内皮生长因子可作为血管再生的诱导因子，促进血管再生，有效改善局部血流灌注。因此，寻找诱导心肌新生血管生成即冠脉侧支循环形成的潜在靶点，可能对提高冠心病治疗效率具有重要意义。本研究采用Rentrop法将患者冠状动脉侧支循环情况进行分级，结果冠脉侧支循环不良组血清miR-17水平显著高于良好组，相关性分析结果，miR-17水平与Rentrop分呈显著负相关关系，说明血清miR-17水平越高，冠脉侧支循环形成越缓慢或无循环。提示miR-17基因干预治疗可能有助于冠心病患者冠脉侧支循环形成，有助于改善患者心肌缺血状况。

Ox-LDL是机体氧化应激反应过程中的产物，临床研究已证实，Ox-LDL诱发的一系列病理生理变化是导致冠脉粥样硬化形成的关键［10］。同时高表达Ox-LDL能够促进内皮细胞分泌白细胞介素等炎性因子，影响内皮细胞代谢并损伤内皮细胞，加重冠脉病变［11］。本研究结果，病例组血清Ox-LDL水平显著高于对照组，且随冠脉病变程度加重呈升高趋势，与患者侧支不良循环形成有关，相关性分析表明，病例组血清miR-17与Ox-LDL呈显著正相关，间接说明血清miR-17水平与患者冠脉狭窄及内皮功能损伤密切相关。25（OH）D3是维生素D3在体内的活化形式，属于类固醇激素，主要参与调节机体钙磷代谢平衡，近年来研究表明，25（OH）D3还具有延缓大动脉重构与硬化、保护血管内皮功能的作用［12］。VERDOIA等［13］研究表明，维生素D含量与血红蛋白、血小板计数、低密度脂蛋白胆固醇以及甘油三酯直接相关，维生素D缺乏与较高的冠心病患病率和严重冠状动脉病变显著相关，提示25（OH）D3可能通过调节内皮功能、血小板功能，潜在调节动脉血栓形成。国外相关研究［14］表明，与健康者比较，冠心病心肌梗死患者几乎都存在明显25（OH）D3缺乏或不足。国内也有相似研究，如李晖等［15］研究表明，冠状动脉狭窄患者血清25（OH）D3水平显著低于正常者，低水平25（OH）D3与患者冠脉狭窄程度有关。张世袍等［16］分别比较冠脉重度狭窄、中度狭窄和轻度狭窄患者与健康者血清25（OH）D3水平，结果冠脉狭窄患者血清25（OH）D3水平显著低于健康者，且冠脉严重狭窄者血清25（OH）D3水平显著低于中度和轻度狭窄者，低水平25（OH）D3水平与冠脉狭窄程度有明显负相关关系。本研究结果，病例组血清25（OH）D3水平显著低于对照组，冠脉病变重度组和中度组显著低于轻度组，重度组显著低于中度组，说明随患者冠脉狭窄程度加重血清25（OH）D3水平呈明显下降趋势，与李晖等研究结果一致。进一步相关性分析结果，病例组血清miR-17与25（OH）D3水平呈显著负相关关系，提示抑制miR-17表达可能有助于改善患者25（OH）D3缺乏，有助于病情改善。

综上所述，血清miR-17水平与冠脉病变程度、冠脉侧支循环形成及Ox-LDL、25（OH）D3水平密切相关，本研究不足之处在于样本量较小，无法进行进一步的分层分析，下一步将在扩大样本量的基础上继续深入探讨miR-17在改善冠心病冠脉狭窄程度、刺激冠脉侧支循环形成，改善血流供应中的作用机制。