广东省中山地区孕中期产前筛查血清标志物中位数方程的建立

梁培松，王结珍，王伟佳，陈 康，卢建强

(中山大学附属中山医院检验医学中心，广东中山 528403)

染色体异常是人类常见的重大出生缺陷，其中以唐氏综合征(又名 21-三体综合征)最为常见，其出生率约占新生儿的1/600～1/800[1]。不仅会给社会、家庭带来沉重的经济负担，还会严重影响到我国的出生人口素质。现今，进行产前筛查和产前诊断是防止染色体异常患儿出生最有效的手段[2]。而产前血清标志物的检测及产前筛查风险评估是最为常用的产前筛查和产前诊断手段，但不同的实验室条件，不同的人群特征都有可能导致产前筛查血清标志物中位数的差异，最终导致孕妇血清标志物中位数倍数值(multiple of median，MOM)以及产前筛查风险评估结果的改变。各地区各实验室应建立自己的血清标志物中位数方程，以提高筛查效率[3～5]。本研究拟对11 779例孕中期孕妇筛查数据进行分析，建立本地区孕妇孕中期产期筛查血清标志物中位数方程及体重校正方程，并研究其与各影响因素的相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2015～2017年临床信息及标本采集均来自中山市各医院产前检查孕妇，纳入标准：①对本研究患者知情同意；②超声影像学检查确定孕龄在105～146天内，单胎，并排除异常胎儿；③排除染色体异常生育史、死胎妊娠史孕妇；④孕妇年龄<35岁；⑤孕妇均追踪随访至确认产下健康婴儿。共纳入11 779例孕中期妇女，孕妇年龄26±3.86岁，体重为53±8.29 kg。

1.2 试剂和仪器 采用德国SIEMENS公司生产的IMMULITE2000全自动化学发光免疫分析系统进行甲胎蛋白 (alpha-fetoprotein，AFP)、人绒毛膜促性腺激素 (human chorionic gonadotropin，HCG) 和游离雌三醇(unconjugated estriol 3，uE3)的检测；所需试剂盒为德国SIEMENS公司的配套试剂；本实验室已经通过了ISO15189认证，所有操作均严格按照本实验室操作规程要求执行。

1.3 方法

1.3.1 标本采集：标本采集前由护士与孕妇核对填写的产前筛查申请单上的信息，包括姓名、出生日期，末次月经、体重、采样日期等，孕龄的确定：月经规律者以末次月经推算，不规律者以双顶径(BPD)测量值为准。空腹采集孕妇非抗凝血3 ml，静止1 h，3 000 r/min离心分离血清，24 h内完成标本检测，检测完毕后-70℃保存3年。

1.3.2 结果分析：本实验室采用Prisca4软件进行产前筛查风险评估，21-三体综合征截断值为1/270，18-三体综合征截断值为1/350，开放性神经管缺陷截断值为2.5MOM。

1.4 统计学分析 使用SPSS 19.0软件进行数据的统计分析，采用spearman相关分析法分析孕龄、体重及年龄与AFP，HCG和uE3浓度的相关性；采用百分位数法确定中位数值；通过加权回归分析法，拟合不同曲线方程模型(指数、抛物线、对数、幂、线性、倒数曲线模型)，建立最佳曲线模型；本地化数据与软件内置数据进行比较采用配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 孕龄、体重及年龄与AFP，HCG，uE3浓度的相关性分析 孕龄与AFP，HCG和uE3中度相关(AFP：r=0.545，P=0.000；HCG：r=-0.515，P=0.000；uE3：r=0.761，P=0.00)；体重与AFP，HCG和uE3低度相关(AFP：r=-0.373，P=0.000；HCG：r=-0.316，P=0.000；uE3：r=-0.206，P=0.00)；年龄与AFP，HCG和uE3相关性极低，基本不相关(AFP：r=-0.050，P=0.000；HCG：r=-0.044，P=0.000；uE3：r=-0.103，P=0.134)。

2.2 建立中山地区AFP，HCG和uE3浓度中位数方程 检测本地孕妇AFP，HCG和uE3浓度值，并通过百分位数法找出不同孕龄的原始AFP，HCG和uE3浓度中位数，通过加权回归分析法拟合曲线模型，分别计算各自的校正决定系数，从中选择最佳拟合曲线方程，见表1；并计算出相应的105～146孕天的本地AFP，HCG和uE3浓度中位数，本地不同孕龄AFP，HCG和uE3浓度中位数与软件内置数据比较差异有统计学意义(AFP：T=17.042，P=0.000；HCG：T=2.217，P=0.032；uE3：T=2.444，P=0.019)。

表1最佳AFP，HCG，uE3浓度中位数曲线拟合方程

项目曲线模型曲线方程决定系数AFPHCGuE3指数曲线抛物线抛物线Y=4.222 9e0.020 8XY=12.613X2-3 659.5X+279 801Y=0.000 25X2-0.026 64X+0.477 870.9830.9760.993

2.3 建立中山地区AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM体重校正曲线方程 将本地孕妇AFP，HCG和uE3浓度换算成MOM值，并通过百分位数法找出各体重相应中位数，通过加权回归分析法拟合不同曲线模型，决定系数最大者即为最佳的体重校正曲线方程，具体见表2；通过校正方程计算出本地AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM相应的35 kg～120 kg体重校正中位数。本地AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM的不同体重校正中位数与软件内置数据比较差异有统计学意义(AFP-MOM：T=-3.907，P=0.000；HCG：T=-312.784，P=0.000；uE3：T=9.915，P=0.000)。

表2体重校正最佳拟合曲线模型

2.4 中山地区人群模型所得AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值与软件内置数据所得比较 分析2015～2017年于我院进行孕中期产前筛查的结果，中山地区人群模型所得AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值分别为：1.00，1.00和0.99；软件内置数据所得AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值分别为：1.07，0.92和1.04。

3 讨论

本研究通过分析年龄、体重和孕龄与血清标志物浓度之间的相关性，发现年龄与AFP，HCG和uE3相关程度弱，基本不相关；体重与AFP，HCG和uE3呈低度相关；孕龄与AFP，HCG和uE3呈中度相关，较龙耀等[4]人研究的结果不同，可能因人群、检测方法不同导致。从研究结果表明，在小于35岁的孕妇内部可以忽略年龄对三种血清标志物的影响，而体重和孕龄与三种血清标志物浓度呈现出低到中度的相关性，因此进行标准化后除去体重和孕龄的影响，更易于检查结果的评估分析。

目前研究发现，产前筛查血清标志物结果的高低不仅与胎儿染色体异常有关，而且与胎儿特纳综合征不良产科结果[6]、孕妇子痫前期的预测[7]、新生儿高胆红素血症的预测[8]等也有一定的相关性。但血清标志物浓度的高低不仅受孕妇体重和孕龄的影响，而且受不同的实验室条件、不同人群特征和仪器试剂等的影响[9～11]。据何法霖等[12]人调查分析显示，2015年全国477家孕中期产前筛查实验室中竟有350家实验室未建立修改过产前筛查风险评估软件参数，严重影响了产前筛查的质量。本研究通过对11 779例孕中期妇女三种血清标志物检测结果的回顾分析，计算出了本地区105～146孕天的原始血清标志物中位数，并建立了本地区最佳的孕中期血清标志物浓度中位数方程。本地区不同孕龄的AFP，HCG和uE3浓度中位数与软件内置数据比较差异有统计学意义。在血清标志物浓度中位数数据库建立的基础上进行体重校正，建立本地区本实验室的AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM体重校正方程，本地区不同体重AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM中位数与软件内置数据比较差异也有统计学意义。

分析表明，软件内置中位数存在一定的偏差，应建立本地区，本实验室的AFP，HCG和uE3浓度中位数方程及体重校正方程。

中位数倍数值中位数(median MOM，mMOM)是指一段时间内筛查指标的所有检测样本MOM值的中位数。长期监测其数值的稳定性可以作为实验室一个重要而又有效的全面产前筛查质量控制手段。一个理想的稳定的指标应该稳定在0.95～1.05范围内[13]。通过分析2015～2017年所有孕妇MOM值，发现内置软件所得的孕妇AFP-mMOM偏离了1.05的高限及0.95的低限，而运用新的数据库所得的AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值分别为1.00，1.00和0.99，结果更接近1.00。分析说明本地区所得的数据更能实现0.95～1.00的长期稳定。

综上所述，建立符合中山地区的孕中期妇女产前筛查标志物中位数方程及其体重校正方程是产前筛查实验室质量控制的保证，势在必行。