地中海贫血携带（患）者基因型分布及HbA2参数特征

罗茗月， 肖克林， 蓝慧娟， 麦光兴， 熊礼宽

（深圳市宝安区妇幼保健院中心实验室，广东 深圳 518102）

地中海贫血（简称地贫）是以珠蛋白链合成减少或缺失而引起的溶血性疾病，是地中海地区、撒哈拉沙漠以南非洲地区、东南亚国家和中国南部地区重要的公共卫生健康问题[1]。针对高风险育龄人群进行地贫筛查和遗传学分析是控制地贫发生的有效手段。成人血红蛋白（hemoglobin，Hb）主要成分为HbA（α2β2）（96.0%），其次为HbA2（α2δ2）（2.5%～3.5%）和HbF（α2γ2）（＜1.0%）。对Hb组分进行检测是地贫筛查的重要手段，HbA2＞3.5%是β-地贫筛查可靠的指标之一，HbA2＜2.5%则提示有缺铁性贫血或α-地贫的可能[2-4]。虽然HbA2可用于地贫筛查，但在HbA22.5%～3.5%的人群中仍然可检出一定比例的地贫携带（患）者[5]，这与地贫携带（患）者表型的高度异质性有关。本研究回顾分析2 194例α-地贫和970例β-地贫女性携带（患）者的基因型分布以及其中1 438例α-地贫和646例β-地贫携带（患）者HbA2的参数特征，这将有助于临床对HbA2检测结果的理解和判断，并可为遗传咨询提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2 0 1 2年1月—2 0 1 6年6月在深圳市宝安区妇幼保健院进行地贫基因检测的育龄女性4 7 9 3名。按基因型将其分为3组：α-地贫（不合并β-地贫）2 194例，平均年龄（27.2±4.5）岁；β-地贫（不合并α-地贫）970例，平均年龄（27.3±4.5）岁；非地贫健康对照者（不携带地贫基因，Hb≥110 g/L）1 629名，平均年龄（27.3±4.4）岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集研究对象新鲜外周血2 mL，进行抗凝处理。HbA2检测使用乙二胺四乙酸二钾抗凝管，地贫基因检测使用枸橼酸钠抗凝管。

1.2.2 Hb分析 采用VARIANT Ⅱ血红蛋白分析仪（美国Bio-Rad公司）及配套试剂和质控品检测HbA2水平，严格按照说明书要求进行操作，室内质控在控后进行标本检测。

1.2.3 地贫基因检测 使用亚能生物技术（深圳）有限公司试剂进行DNA提取、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）扩增和产物检测。采用裂口聚合酶链反应（gappolymerase chain reaction，Gap-PCR）进行缺失型α-地贫基因检测。采用PCR-反向斑点杂交（reverse dot blot，RDB）进行α-地贫和β-地贫点突变检测。缺失型α-地贫基因型包括右缺失型（-α3.7）、左缺失型（-α4.2）和东南亚型（--SEA）；α-地贫点突变包括Hb Constant Spring （Hb CS）、Hb Quong Sze （Hb QS）和Hb Westmead （Hb WS）；β-地贫点突变包括CD14-15、CD17、CD27-28、CD31、CD41-42、CD43、CD71-72、CD26（βE）、-28、-29、-30、-32、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1和Initiation codon。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 α-地贫组和β-地贫组基因型分布特征

在α-地贫组中，静止型组有5种基因型，以-α3.7/αα和-α4.2/αα为主；标准型组有9种基因型，以--SEA/αα为主；HbH病组有5种基因型，以-α3.7/--SEA为主。在β-地贫组中，β0-地贫组有8种基因型，以βCD41-42/βN和βCD17/βN为主；β+-地贫组有4种基因型，以βIVS-Ⅱ-654/βN和β-28/βN为主；βE-地贫组只有βCD26/βN1种基因型。见表1。

2.2 不同基因型α-地贫组的HbA2结果

α-地贫组中1 438例HbA2数据完整，对照组、静止型组、标准型组和HbH病组的HbA2水平组间差异有统计学意义（F=57.34，P＜0.05）。对照组、静止型组、标准型组和HbH病组HbA2水平依次降低（P＜0.05），但对照组与静止型组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

2.3 不同基因型β-地贫组的HbA2结果

β-地贫组中646例HbA2数据完整，对照组、β0-地贫组、β+-地贫组和βE-地贫组的HbA2水平组间差异有统计学意义（F=18 509.38，P＜0.05）。对照组、β+-地贫组、β0-地贫组和βE-地贫组HbA2水平依次升高（P＜0.05）。见表3。

3 讨论

表1 α-地贫组和β-地贫组基因型分布

表2 对照组和α-地贫组HbA2结果的比较

表3 对照组和β-地贫组HbA2结果的比较

本研究回顾分析了深圳市宝安区妇幼保健院地贫携带（患）者基因型分布情况，2 194例α-地贫携带（患）者中，最常见的是--SEA/αα、-α3.7/αα和-α4.2/αα，单纯点突变中以αCSα/αα比例最高。广东地区和广西地区α-地贫基因型比例最高的3种也是--SEA/、-α3.7/和-α4.2/，但点突变中αWSα/比αCSα/和αQSα/比例更高[6-7]。云南地区α-地贫常见基因型依次为--SEA/、-α3.7/和αCSα/[8]。海南地区黎族人群中则以-α4.2/和-α3.7/最为常见，--SEA/较为少见[9]。本研究结果显示，-α3.7/和--SEA/这2种基因型比例较高，HbH病也是以-α3.7/--SEA为主，其次为αWSα/--SEA和-α4.2/--SEA。在云南地区以及非地贫高发的北方地区，HbH病最常见的基因型也是-α3.7/--SEA，其他几种基因型较为少见[8，10]。本研究970例β-地贫携带（患）者中，最常见的基因型为βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN和β-28/βN。在广东地区，β-地贫基因型比例最高的是βCD41-42/和βIVS-Ⅱ-654/，其次为β-28/和βCD17/[6]，与本研究结果基本一致。然而，云南地区最常见的β-珠蛋白突变型最常见的为βCD26/，其次为βCD17/、βCD41-42/和βIVS-Ⅱ-654/[8]。海南地区黎族人群β-地贫只有βCD41-42/1种基因型，但海南地区汉族人群以βCD41-42/和βIVS-Ⅱ-654/最为常见[9]。

正常情况下球蛋白α链会优先与β链结合形成血液中主要的Hb，即HbA，正常成人Hb主要成分为HbA（α2β2），HbA2（α2δ2）和HbF（α2γ2）水平很低。β-地贫由于β链合成减少，过量的α链会与δ链结合形成HbA2，所以β-地贫会使HbA2水平升高[11]。与β+-地贫组相比，β0-地贫的β链合成量更低，所以理论上β0-地贫过量α链与δ链结合形成的HbA2也更多，但这种差异仅在部分研究中被证实，这可能与不同研究中基因型、人群特征和样本量的不同有关。RUND等[12]的研究结果显示β0-地贫比β+-地贫HbA2水平升高更加明显，STEFANIS等[13]的研究结果显示二者HbA2水平无差异。本研究结果显示，β-地贫组HbA2水平明显高于对照组，β+-地贫组和β0-地贫组的HbA2水平均＞5%，且β0-地贫组HbA2水平高于β+-地贫组，而βE-地贫组HbA2水平x为26.28%，远高于β0-地贫组和β+-地贫组。

α-地贫由于α链合成减少，β链比例相对较高，导致α链和δ链的结合减少，所以α-地贫会使HbA2水平降低。蔡稔等[14]研究结果显示对照组与HbH病组、对照组与标准型组HbA2水平均有显著差异。本研究对照组、静止型组、标准型组和HbH病组HbA2水平是依次降低的。对照组和静止型组HbA2水平差异无统计学意义，x 均为2.60%，标准型组HbA2水平 x为2.47%，HbH病组HbA2水平明显降低，x为1.86%。该研究结果提示除β-地贫外，HbA2对HbH病的筛查参考价值较大，但单一由HbA2来筛查α-地贫会造成部分静止型和标准型的漏筛。此外，由于缺铁性贫血患者HbA2水平也会降低[15]，因此对于HbA2水平降低的患者还应与缺铁性贫血进行鉴别，进行铁代谢相关指标检测和基因检测。

综上所述，不同基因型地贫携带（患）者HbA2水平各有特点，HbA2对β-地贫和HbH病的筛查参考价值更大。HbA2作为筛查指标存在一定的假阴性，所以在临床咨询中应结合血常规结果进行分析。另外，本研究未对α-地贫和β-地贫不同基因型HbA2水平进行分析，所以在后续研究中将继续收集标本，同时将α合并β基因型也纳入比较，以期为地贫筛查和遗传咨询提供更完整的理论依据。