清远地区育龄人群α地中海贫血筛查及HbA2截断值的确定

刘冬霞 许伟华 龙辉 胡新年

【摘要】 目的：調查清远地区育龄人群α地中海贫血的基因携带率，研究本地区血红蛋白A2（HbA2）对诊断α地贫阳性筛查的截断值。方法：采用法国Sebia Capillarys全自动毛细管电泳仪检测并结合患者临床平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）值，对2016年1-8月基层单位转诊到本院的7 234人次血细胞分析提示夫妇双方或一方疑似为地贫表型阳性的育龄青年进行地贫筛查。把HbA2<2.5%、MCV<82 fL和HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL的标本之间进行比较，同时进行三种常见α缺失和非缺失型地贫基因检测。结果：在7 234例育龄青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL筛查结果中为α地贫表型的1 090例，其中基因检测确诊为α地贫1 073例，符合率为98.4%（1 073/1 090），17例常见α地贫基因型检测结果为阴性，其中5例确诊为罕见α地贫，12例为缺铁性贫血；HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL筛查结果只有血常规提示为α地贫表型的538例，经基因检测确诊为α地贫的411例，检出率为76.4%（411/538），常见α地贫基因检测阴性的127例，其中3例确诊为罕见α地贫，16例为缺铁性贫血，108例为孕期妇女疑为孕期生理性贫血。结论：清远地区育龄人群α地贫基因携带率高，HbA2检测结果的参考值在α地贫的筛查应用中存有区域差异，应重新制定本实验室HbA2的截断值为2.8%，并且要联合血常规的MCV值同时分析，预防出现漏诊、漏防的现象。

【关键词】 α地中海贫血； 毛细管电泳； 基因检测； HbA2截断值

【Abstract】 Objective：To research the α-thalassemia gene carrier rate among reproductive age population in Qingyuan area.Method：By using French Sebia Capillarys-2 automatic capillary electrophoresis combined with the patients mean corpuscular volume（MCV） and mean corpuscular hemoglobin（MCH），we checked 7 234 humans who had high risk of thalassemia sent by the grass-roots hospital from January to August 2016.The research detected the group HbA2<2.5%，MCV<82 fL and the group 2.5%

【Key words】 α-thalassemia； Capillary electrophoresis； Gene detection； Cutoff value of HbA2

First-authors address：Maternal and Child Health Hospital of Qingyuan City，Qingyuan 511500，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.18.022

地中海贫血（简称地贫）是由于合成血红蛋白的珠蛋白链合成不足或结构发生突变，导致人体内α链和β链比例失调，从而不能或者生成无效血红蛋白而导致的单基因溶血性遗传病[1]。目前，由于政府的干预和大力宣传的作用，人们对地贫的了解有了进一步的提升。主要通过婚前或孕期检查对夫妇双方进行地贫血液学筛查，若发现夫妇双方均为同种类型地贫携带者，还需对胎儿进行地贫基因产前诊断[2]。国家卫计委在全国地贫高发区推出了很多优惠政策，并得到地方政府和医院的大力支持。本院从2015年下半年开始免费收取清远市管辖区内的各基层医院符合地贫检测条件的育龄青年进行血红蛋白成分分析，应用血红蛋白电泳法进行筛查和检测，夫妇均为地贫基因携带者可继续免费进行地贫基因检测，地贫基因检测为同型地贫的可免费产前诊断[3]。临床上一般以HbA2>3.5%作为疑似β地贫携带者，HbA2<2.5%为疑似轻型α地贫携带者，出现异常HbH带的为血红蛋白H病（中间型α地贫）[4]。血红蛋白电泳检测对α和β地贫基因携带者的筛查诊断起到了有效的辅助作用，但在实际应用中常因人群特点或地域不同存在一定的差异[5]。本研究采用毛细管电泳的方法检测分析HbA2，联合平均红细胞体积（MCV）值对地贫患者进行初筛，通过两组初筛结果和基因结果进行比对，探讨其结合MCV值对地贫的诊断价值，并重新制定本实验室的截断值。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 7 234例对象来自2016年1-8月由基层单位通过广东省妇幼信息网，对血细胞分析提示夫妇双方或一方地贫表型阳性（MCV<82 fL、MCH<27 pg），符合国家政策免费检测地贫防控项目而转诊到本院地贫防控中心的20～45岁育龄青年。本研究把HbA2<2.5%、MCV<82 fL和HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL的标本作为比较同步进行三种常见α缺失型地贫基因（- -SEA/，-α3.7/，-α4.2/）和我国常见的三种α非缺失型地贫基因（Hb ConstantSprimg、Hb QuongSze、Hb Westmead ）检测。

1.2 方法

1.2.1 检测HbA2的全自动毛细管电泳分析仪 Caplillarys型购自于法国Sebia公司和厂家提供的配套试剂。实验条件电压和缓冲液条件分别为9.8 kV、pH值9.4，并联的8条石英毛细管同步进行血红蛋白电泳，检测HbA2的百分含量[6]。每次检测标本前必须先测定配套的质控品，室内质控检测通过方可进行临床标本HbA2的检测。

1.2.2 基因诊断 由广东凯普生物科技股份有限公司提供的全自动血细胞基因提取仪和地贫基因诊断试剂盒，提取仪HBNP-4801A，扩增仪为BIO RAD T100型，分子杂交仪型号为HB-2012A。采用导流杂交技术检测三种常见的α缺失型地贫基因（- - SEA/，-α3.7/，-α4.2/）和三种α非缺失型地贫基因（Hb ConstantSprimg、Hb QuongSze、Hb Westmead）。

2 结果

2.1 HbA2检测结果 根据广东省地中海贫血防控流程标准制定血红蛋白A2<2.5%、MCV<82 fL为α地贫初筛阳性的標准[7]，在7 234例育龄青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL，血红蛋白电泳和血常规筛查结果都提示为α地贫表型的1 090例；HbA2值介于2.5%～2.8%且MCV<82 fL筛查结果只有血常规提示为α地贫表型的538例。

2.2 基因检测结果 把HbA2<2.5%、MCV<82 fL和HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL的标本为对照比较同步进行三种常见α缺失和非缺失型地贫基因检测。在7 234例育龄青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL筛查结果为α地贫表型的1 090例，其中基因检测确诊为α地贫1 073例，符合率为98.4%（1 073/1 090），17例常见α地贫基因型检测结果为阴性，其中5例确诊为罕见α地贫，12例疑为缺铁性贫血，建议进一步临床检测；虽然筛查结果HbA2值介于2.5%～2.8%，但MCV<82 fL血常规提示为α地贫表型的有538例，基因检测确诊为α地贫的为411例，检出率为76.4%（411/538），常见α地贫基因检测阴性的127例，其中3例确诊为罕见α地贫，16例为缺铁性贫血，108例为孕期妇女疑为孕期生理性贫血。α地贫的总检出率为20.62%[（1 073+5+411+3）/7 234]。

3 讨论

近年来，由于政府的大力宣传和对出生缺陷干预，令人们对地贫的认识和预防有了飞跃性的进步，而做好地贫防控的工作就成为一线医务工作者的首要任务。在广东省α地贫的发生率明显高于β地贫，而对地贫的初筛除了血红蛋白电泳外，最方便有效的筛查指标是血常规中的MCV<82 fL、MCH<27 pg、RDW>14.5%等红细胞参数[8-9]，其检测结果在轻型地贫携带者外周血中出现明显异常时有较高诊断意义[10]，如果RDW明显升高时还需要考虑是否为缺铁性贫血，缺铁性贫血患者会出现红细胞大小不均匀，而地贫患者多为小细胞低色素，红细胞大小均匀的血象[11]。血红蛋白电泳检测对α和β地贫基因携带者的诊断起到了良好的辅助作用，但在实际应用中常因人群特异性或地域不同存在一定的差异，由于清远为粤北偏远地区，存在大量的群居少数民族，故此临床实验室如能结合不同方法和人群特点等因素设定自己的最佳临界值，将更大程度地提高筛查指标的诊断效能[12]。本研究采用毛细管电泳的方法检测HbA2，联合MCV值对地贫患者进行初筛，通过两组初筛结果和基因结果进行比对，探讨其联合MCV值对地贫的诊断价值，并重新制定本实验室的截断值。结果在7 234例育龄青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL筛查结果同时为α地贫表型的1 090例，其中基因检测确诊为α地贫1 073例，符合率为98.4%（1 073/1 090），17例常见α地贫基因型检测结果为阴性，其中5例确诊为罕见α地贫，12例为缺铁性贫血；HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL筛查结果只有血常规提示为α地贫表型的538例，基因检测确诊为α地贫的411例，检出率为76.4%（411/538），常见α地贫基因检测阴性的127例，其中3例确诊为罕见α地贫，16例为缺铁性贫血，108例为孕期妇女，疑为孕期生理性贫血。α地贫的总检出率为20.6%[（1 073+5+411+3）/7 234]与广东省的基线调查数据相符[8]。由两组实验数据表明，如果按照临床标准HbA2<2.5%疑似轻型α地贫的参考范围为诊断依据，将会有414例α地贫携带者漏诊，漏诊率为27.7%，在很大程度上增加了重型地贫新生患者的出生概率。由此可见，HbA2检测结果的参考值在α地贫的筛查应用中存有区域和种族差异[13]。

综上所述本实验室将重新将HbA2的值小于2.8%；血常规MCV<82 fL作为α地中海贫血筛查标准的新截断值，以降低α地贫的漏筛率。目前，地中海贫血基因检测的检测方法较成熟，国内主要以GAP-PCR、PCR-RDB和导流杂交法为主，因其具备快速、敏感、操作方法简单，成本较低等优点，在临床实验室得到了非常广泛的应用[14]。但此方法还尚存在一定的局限性，只能检出常见位点缺失和突变，不能检出未知或稀有的缺失和突变位点[15]。因此，在临床实践中对于HbA2和MCV同时出现地贫筛查阳性表型且未见其他异常血红蛋白带而常见基因检测未检出异常突变的高风险人群，应考虑采用测序或其他方法检测，预防出现漏诊、漏防的现象，将重症地贫儿的出生率降到最低。

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