植物多酚类物质的检测研究

刘晓秋，王春燕，黄 博

(吉林工程技术师范学院 食品工程学院,吉林 长春 130052)

1 概述

多酚类物质是在植物性食物中发现的，具有潜在促进健康作用的一种化合物。它存在于一些常见的植物性食物中，具有很强的抗氧化作用，可以清除自由基，具有抗菌、抗心脑血管疾病等生理功能，是一类值得开发的天然抗氧化剂。葡萄籽提取物是从葡萄籽中提取分离得到的一类多酚类物质，主要由原花青素，儿茶素，表儿茶素，没食子酸，表儿茶素没食子酸酯等多酚类物质组成。由于葡萄籽提取物显著的生物活性，如抗氧化性和清除氧自由基等。这些引起了人们研究和开发葡萄籽提取物的兴趣。本文对比香蕉皮、红酒和蓝莓酒中多酚额种类及含量，说明不同植物及其加工产品中多酚的不同。

2 实验部分

2.1 试剂和材料

无水乙醇、福林酚试剂(成都艾科达化学试剂有限公司)、焦性没食子酸、无水碳酸钠、色谱纯级甲醇、色谱纯级标准样品：没食子酸、儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯(北京恒元启天化工技术研究院)；实验样品：葡萄籽、香蕉皮、葡萄酒、蓝莓酒 均为市售。

2.2 实验设备

紫外分光光度计(UVmini-1240)，高效液相色谱(UltiMate-3000)，离心机(TGL-16G)，恒温水浴锅(HH-420)，循环水真空泵(SHZ-DⅢ)，其他辅助设备。

2.3 实验步骤

2.3.1 样品处理

2.3.1.1 葡萄籽多酚的提取和纯化

准确称取葡萄籽粉样品4.000g，在 250mL锥形瓶中加入120mL乙醇(70%)超声提取20min，然后将其提取液进行离心，取上清液备用。

2.3.1.2 香蕉皮中多酚的提取和纯化

称取40.000g香蕉皮，切片，沸水热烫3.0～5.0min，钝化香蕉皮中的多酚氧化酶。然后加入120mL乙醇(80%)，置于60.0℃水浴中浸泡，提取3h。

2.3.1.3 葡萄酒和蓝莓酒样品处理

红酒原液有一定的粘度，不能直接进样，因此，经红酒原液稀释10倍，放在冰箱中备用；蓝莓酒原液的粘度很高，因此必须将其进行稀释。将蓝莓酒稀释125倍，放在冰箱中备用。

2.3.2 总酚的检测

2.3.2．1 标准曲线的建立

称取0.5000g焦性没食子酸，用水溶解并定容于100mL容量瓶中，以此为母液配置质量浓度为0、50、100、150、250、500mg/L的溶液。取6支50mL容量瓶，分别吸取上述溶液1mL，各加20mL水，福林酚试剂5mL，混匀，30s～8min内各加入20%碳酸钠溶液15mL，混合后，用水定容。将上述溶液在20℃下放置2h。然后用分光光度在765nm条件下，测定不同浓度溶液的吸光度，处理数值后，建立标准曲线，见表1、图1。

表1 没食子酸标样浓度与吸光度

图1 总酚测定标准曲线

其标准曲线方程为y=291.79x-4.7341，R2=0.9993。其中y表示没食子酸的浓度，x表示吸光度。

2.3.2．2 样品中总多酚的测定

分别量取制备好的4种样品提取液1mL，按照上述方法测定其吸光度。带入标准曲线，求出样品中的总多酚含量。

2.3.3 植物小分子多酚的检测

2.3.3.1 色谱条件

Ultimate 3000高效液相色谱；色谱柱：C18色谱柱；流动相：0.1%磷酸水溶液∶乙腈=85∶15；流速：1.000mL/min；检测波长：280nm；柱温：25℃；进样量：10uL。

2.3.3.2 标准样品的配置

分别准确称取一定量的没食子酸、儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯标准样品，用甲醇溶液将其溶解并定容至100mL。配置成一定浓度的母液。并将母液进行稀释，配置成不同浓度的标准样品，过滤膜后，即可进样。

2.3.3.3 色谱检测方法验证

以没食子酸标准样品作为液相色谱检测法相对标准偏差的检测。在同一色谱条件下，对同一浓度的没食子酸标准样品溶液进行平行进样，根据检测结果计算相对标准偏差。没食子酸标准样品溶液平行进样5次，检测结果依次是，0.3985mg/L、0.3730mg/L、0.3845mg/L、0.3902mg/L、0.3844mg/L，相对标准偏差(RSD)=2.1551%，符合检测标准。

2.3.3.4 样品中多酚的分析

将4种制备好的样品提取液过滤膜，通过进样针注入样品瓶中，在设定的色谱条件下，对样品中的多酚类物质进行检测。

3 结果与讨论

3.1 4种样品的总酚含量

采用福林酚法，处理4种样品提取液测量其吸光度，以没食子酸为标准品制得的标准曲线，将每种样品的吸光度带入到标准曲线方程中，即可分别计算出4种样品中每种样品的总酚含量。整理得到表2。

表2 样品中总酚含量

根据以上数据，可以对4种样品的总酚含量进行比较，得到图2。

图2 各样品总酚含量比较

测试结果说明，4种物质中均含有多酚类物质，对比可知，蓝莓酒中总酚含量远远高于其他3种，葡萄酒含量次之。可见蓝莓酒是很好的多酚来源。适量饮用蓝莓酒或葡萄酒使机体获得酚类物质。也可适量食用蓝莓或葡萄，以获得多酚，起到对机体的保健作用。

而通常被视为是废弃物的葡萄籽和香蕉皮中同样含有多酚物质，可以进一步研究提取方法，从而采用适当方法对其进行提取，实现多酚类物质的工业制备方法，将这些废弃物变废为宝。

3.2 4种样品中单分子多酚含量

测试样品色谱图见图3。

图3 测试样品色谱图 表3 测试样品中小分子多酚的含量

样品名称多酚蓝莓酒/(mg/L)葡萄酒/(mg/L)香蕉皮/(mg/L)葡萄籽/(mg/L)没食子酸0.07120.14060.09780.1486儿茶素0.00710.17770.08030.5712表儿茶素-0.00740.15660.3162表儿茶素没食子酸酯----

注：- 未检出

表4 测试样品中小分子多酚总量

根据表3、表4，对4种样品小分子多酚总量进行比较，可得下图4。

图4 各种样品中单酚总量比较

检测数据显示，葡萄籽、香蕉皮和红酒中含有3种小分子多酚，分别是没食子酸、儿茶素和表儿茶素。而蓝莓酒中只含有2种小分子多酚，分别为没食子酸和儿茶素，不含有表儿茶素。4种样品中均不含有表儿茶素没食子酸酯。

葡萄籽中小分子多酚总量含量最高，蓝莓酒中小分子多酚总量含量最少，香蕉皮和红酒中小分子多酚总量接近，介于葡萄籽和蓝莓酒之间。

3.5 样品中聚多酚的含量

待测样品中聚多酚的含量可以通过福林酚法测得的总酚含量减去液相色谱检测出的各种小分子多酚的总含量，来计算得出聚多酚含量。这类由多酚单体聚合而成的低聚或多聚体均能形成抗氧化作用的氢自由基，能够保护人体组织免受氧化损害，提高机体免疫、抗癌和抗衰老能力。样品中聚多酚含量越高，说明样品中有效成分越多，对人体有益，该样品越有价值。可进行开发和利用。各样品聚多酚含量统计如表5。

表5 样品中聚多酚的含量

图5 各样品中多酚含量的比较

由图5和表5可知，4种样品中，蓝莓酒聚多酚含量最高，葡萄酒聚多酚含量次之，葡萄籽和香蕉皮中聚多酚含量相近且较少，这印证了长饮这两种酒对身体健康有益的结论。葡萄籽中聚多酚含量并不比其他副产物或废弃物高，但是葡萄籽易于储存和处理，经过处理，得到的葡萄籽提取物浓缩后聚多酚含量增高具有多种应用价值。

4 结论

植物多酚是一类对人类身体健康有很大好处的天然物质。本文通过福林酚法和液相色谱法相结合的方法，对多酚类物质进行分离和检测。选取蓝莓酒、葡萄酒、葡萄籽和香蕉皮进行分析，结论如下:

(1)分析研究发现，4种样品中均未检出表儿茶素没食子酸酯，而且没食子酸、儿茶素和表儿茶素含量相差较大，葡萄籽中小分子多酚物质含量明显高于其他物质。因此，葡萄籽的药用价值与蓝莓和葡萄不同。

(2)分析研究说明，蓝莓酒中聚多酚含量远高于其他样品，根据植物多酚的定义，也可以说蓝莓酒富含植物多酚。所以，蓝莓是很好的植物多酚来源，适量食用蓝莓对身体必然大有益处。