TK1和HIF-1α在甲状腺癌中的表达及其相互关系

郭 晶，赵王成

甲状腺癌为临床常见内分泌肿瘤，其发病率有逐年增长趋势[1]，为全球范围内备受关注的恶性肿瘤之一。其病理类型以甲状腺乳头状癌最为常见，临床多采用病理学联合影像学检查对甲状腺癌进行诊断，但这些检查方法较为繁杂，且缺乏特异性检测指标，因而其早期准确诊断率仍不高[2]。近年来，在恶性肿瘤诊断中，细胞增殖标志物的应用日益增多，胸苷激酶1（TK1）属于一种与细胞增殖紧密相关的细胞质激酶，其水平高低可较好反映多种恶性肿瘤细胞增殖程度[3]。缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是普遍存在于人和哺乳动物细胞内的缺氧应答调控因子[4]，研究证实其在甲状腺肿瘤中存在明显上调[5]。但有关TK1在甲状腺癌中的表达及与HIF-1α的关系研究尚未见报道，为此本课题探讨了TK1在甲状腺癌中的表达及与HIF-1α表达的关系。

1 资料与方法

1.1 病例资料 选取2014年3月～2017年1月医院收治的80例甲状腺癌患者的癌组织（研究组）和同期收治的40例甲状腺肿患者的组织（对照组）为研究样本，均经组织病理活检确诊。研究组中，男47 例，女 33 例，年龄 35～68(51.26±5.33)岁，均于医院肿瘤外科行手术切除术治疗；对照组中，男27例，女 13 例，年龄 38～68(52.58±5.31)岁。两组上述基线资料比较无显著差异（P＞0.05），具有可比性。

1.2 排除标准 合并其他类型恶性肿瘤者；妊娠期和哺乳期妇女；合并严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍。

1.3 主要试剂与设备 TK1诊断试剂盒和CSI-1型化学发光数字成像分析仪（深圳华瑞同康生物技术有限公司）；兔抗人HIF-1α多克隆抗体（Abcam公司），免疫组化试剂盒、DAB试剂盒和二抗（北京中杉金桥公司），RIPA裂解液和cDNA试剂盒、SYBR Green荧光染料（温州长丰生物科技有限公司）。

1.4 标本取材与处理 组织标本用10%甲醛固定、石蜡包埋、切片，行免疫组化检测。

1.5 检测指标

1.5.1 TK1 免疫组化SP法检测标本TK1表达情况，操作严格按试剂盒说明书进行，由医院专业病理医师在高倍镜下观察结果，TK1表达于细胞质中，表现为棕黄色颗粒状物为TK1阳性。

1.5.2 HIF-1α 两组标本蜡块均行4 μm的切片，68℃烤片2 h，二甲苯浸泡，采用PBS洗涤后滴加3%双氧水，EDTA缓冲液95℃煮沸抗原修复，密闭后滴加一抗 50～100 μl(浓度 1：100)4 ℃过夜，37 ℃复温 1 h， 滴加 40～50 μl二抗，37 ℃孵育 1 h，DAB 显色2 min，苏木精复染30 s，梯度乙醇脱水和透明后封片镜检，细胞核或细胞质内有棕黄色细颗粒为HIF-1α阳性表达。

1.6 临床资料收集 采集纳入患者性别、年龄、肿瘤直径、中央区淋巴结转移、临床分期、分化程度等资料。

1.7 统计学方法 应用SPSS19.0软件分析，计数资料以例和百分率表示，采用χ2检验；计量资料以±s表示，行t检验；等级资料比较采用Z检验；相关性采用Spearman法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TK1和HIF-1α阳性率比较 研究组TK1和HIF-1α阳性率均明显高于对照组（P＜0.01，表 1）。

表1两组TK1和HIF-1α阳性率比较

2.2 TK1和HIF-1α阳性表达与甲状腺癌病理因素的关系 TK1阳性表达甲状腺癌者TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、浸润深度为T3+T4的构成比明显高于TK1阴性表达者（P＜0.05），而HIF-1α阳性表达者的淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的构成比明显高于 HIF-1α 阴性表达者（P＜ 0.05），见表 2、3。

2.3 甲状腺癌组织中TK1与HIF-1α的分析 相关性分析显示，甲状腺癌组织中HIF-1α表达与TK1表达呈明显正相关（r=0.451，P＜ 0.01）。

表2TK1阳性表达与甲状腺癌病理因素的关系（例）

3 讨论

甲状腺癌肿瘤病灶生长较为缓慢，但癌瘤早期易发生颈部淋巴结或远处转移，因而患者预后不良，且病死率高，目前其早期准确诊断率不高[6]。相关研究表明，在恶性肿瘤转移中缺氧发挥着重要作用[7]。HIF属于一种有转录活性的核蛋白，有刺激血管生成、肿瘤转移等活性，HIF-1α为最常见类型。既往研究证实，HIF-1α在乳腺癌和宫颈癌等患者中存在高表达[8-9]。TK1是胸苷激酶在细胞质内存在的重要形式之一，在细胞DNA合成以及细胞增殖发挥着重要作用，刘京生等[10]研究表明，TK1在尿路上皮癌组织中存在高表达；薄维波等[11]研究则表明，血清TK1可作为原发性肝癌诊疗和预后效果评估的一项潜在指标。

本研究发现，研究组TK1和HIF-1α阳性率明显高于对照组，表明甲状腺癌组织中，TK1和HIF-1α表达水平升高，与任若冰等[13]和宋秋艳等[14]的结果一致。本研究还发现，TK1阳性表达甲状腺癌者TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、浸润深度为T3+T4的构成比明显高于TK1阴性表达者（P＜0.05），而HIF-1α阳性表达者的淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的构成比明显高于HIF-1α阴性表达者（P＜0.05），提示TK1和HIF-1α阳性表达与甲状腺癌的肿瘤分期和转移有关，与刘艳梅等[15]的结果一致。这是因为在实体瘤发生和发展各个阶段，HIF-1α通过调节不同靶基因发挥重要作用，主要包括血管生成和细胞增殖及肿瘤干细胞分化等多个方面。

表3HIF-1a阳性表达与甲状腺癌病理因素的关系（例）

TK1是嘧啶补救途径中一种细胞周期依赖性酶，与DNA合成有关，在增殖细胞中高表达[12]。本研究进一步分析发现，甲状腺癌组织中HIF-1α表达水平与TK1表达水平呈明显正相关，提示TK1可能对HIF-1α表达有正调控作用，但其机制尚不明确，有待今后进一步深入研究。

综上所述，TK1和HIF-1α在甲状腺癌组织中的表达明显上调，TK1可能对HIF-1α表达有正调控作用，联合检测TK1和HIF-1α对甲状腺癌早期诊治方案的制定有重要临床意义。