晶粒鬼伞母种培养基的筛选试验

杜忠伟 胡志强 亢学平 王 旭 王 鑫 崔长根



晶粒鬼伞母种培养基的筛选试验

杜忠伟 胡志强 亢学平 王 旭 王 鑫*崔长根

（延边朝鲜族自治州农业科学院，吉林 延边 133000）

通过分别设置不同的氮源（蛋白胨、硝酸铵、谷氨酸、尿素）、碳源（葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉）和pH（5、6、7、8）培养基对晶粒鬼伞子实体组织分离获得的菌种进行培养，测试不同培养基对菌丝生长速度和长势的影响，结果为：适宜的碳源为玉米粉，氮源为硝酸铵，pH为5。

晶粒鬼伞；组织分离；菌丝生长；培养基；碳源；氮源；pH

菌物是生物中的一个庞大的类群，我国已知真菌约14 060种[1]。我国野生大型真菌分布广泛，种类繁多，采集大型真菌标本进行鉴定和研究可以使我们更深入了解不同真菌的特点。

晶粒鬼伞，又称晶粒小鬼伞（），春、秋季丛生或群生于阔叶林地面，分布广泛[2]。据报道，其初期幼嫩时可食，最好不与酒同吃，以免中毒；晶粒鬼伞对小白鼠肉瘤180的抑制率为70%，对艾氏癌的抑制率为80%；其还可产生腺嘌呤、胆碱和色胺等生物碱[3]。

本试验以晶粒鬼伞子实体组织分离获得的菌种作为研究对象，设计制作不同的碳源、氮源、pH培养基，观察菌丝长势并测定平均生长速度，以筛选出晶粒鬼伞适宜的营养组成配方，为驯化栽培提供基础。

1 材料和方法

1.1 试验材料

供试菌种为2015年8月在长白山采集获得的晶粒鬼伞子实体，经组织分离置于PDA培养基斜面试管中，25 ℃恒温箱内培养获得，菌种编号YBC-1。母种培养基配方设置如下。

（1）不同碳源培养基配方。马铃薯200 g（煮汁过滤），琼脂20 g，水1 000 mL。分别用葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉各20 g作为碳源，pH中性。

（2）不同氮源培养基配方。葡萄糖20 g、琼脂20 g、水1 000 mL，分别用蛋白胨、硝酸铵、谷氨酸、尿素各20 g代替PDA培养基中的马铃薯浸汁作为氮源，pH中性。

（3）不同pH培养基配方。马铃薯200 g（煮汁过滤）、葡萄糖20 g、琼脂20 g、水1 000 mL。分别用10%盐酸和10%氢氧化钠调节pH至5、6、7、8。

配制好的培养基分别装入经标记的三角瓶中，与包好的培养皿平板一起121 ℃高压灭菌30 min，灭菌完毕后，快速取出并移入超净工作台中紫外杀菌30 min，然后趁热将培养基倒入平板培养皿中，标记，备用。

1.2 试验方法

（1）菌种提纯。将子实体分离获得的试管菌种，无菌操作接种至PDA平板培养皿中，置于25 ℃恒温培养箱培养至菌丝长满培养皿。

表1 不同碳源、氮源和pH培养基的菌丝生长速度和长势

注：菌丝长速为7天4次重复的平均值；＋＋＋表示菌丝生长势好，＋＋表示菌丝生长势一般，＋表示菌丝生长势差。同列不同小写字母表示差异显著（＜0.05）。

（2）碳氮源、pH试验。将提纯后的菌丝体沿菌落的边缘用5 mm打孔器接种于培养皿平板中央，每个处理4次重复，25 ℃恒温培养。

每天早晚定时观察菌落的生长状况，从接种的第二天开始测量培养皿中的菌落半径，采用十字划线法，分别在早上8时和晚上8时观察菌落并划线，测定时间为7天。以平板中菌落半径日增长量计算菌丝平均生长速度，并观察记录菌丝颜色，气生菌丝量，分析菌丝生长速度的差异性及不同碳氮源、pH对菌丝生长的影响，以判断菌丝对培养基的适应能力[4]。

注：培养皿A～D分别表示在葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉培养基中形成的菌落；培养皿E～H分别表示在蛋白胨、硝酸铵、尿素、谷氨酸培养基中形成的菌落；培养皿I～L分别表示在pH 5、6、7、8的培养基中形成的菌落。

2 结果与分析

2.1 不同碳源培养基菌丝生长情况

根据试验结果，晶粒鬼伞在玉米粉为碳源的培养基上菌丝生长快，长势好，菌落形态好，菌丝洁白；在淀粉和蔗糖培养基中菌丝生长缓慢，但菌落形态较好；在葡萄糖培养基中菌丝生长慢，长势稀疏（表1，图1的ABCD）。分析原因，可能是因为玉米粉营养成分较丰富，而蔗糖为二糖，淀粉为多糖，均好于单糖葡萄糖。碳源种类丰富的培养基，菌丝生长更好。

2.2 不同氮源培养基菌丝生长情况

试验结果显示，以硝酸铵作为氮源，晶粒鬼伞菌丝生长快，长势好，菌落形态好，菌丝洁白；以尿素为氮源菌丝不生长，可能是由于尿素培养基碱性太强，抑制菌丝生长；以蛋白胨和谷氨酸为氮源，菌丝生长速度较慢，长势一般，但蛋白胨作为氮源形成的菌落好于谷氨酸（表1，图1的EFGH）。

2.3 不同pH培养基菌丝生长情况

从试验结果看，晶粒鬼伞菌丝最适pH为5，在酸性培养基中生长快，长势好，菌落形态好；在pH 6和7的培养基中菌丝生长速度一般，菌落形态相当，长势一般；在pH为8时菌丝生长慢，长势差，菌落形态聚集不规则（表1，图1的IJKL），由此可知，碱性条件抑制菌丝生长。

3 小 结

在菌物资源驯化过程中，不同种类对生长条件都有其选择特异性，同一个种的不同菌株也会存在差异。碳源、氮源、酸碱度等是大型真菌生长的必需条件，对其进行试验研究可以为菌株资源的后期利用提供条件。

本研究选择的晶粒鬼伞是野外采集常见的一种大型真菌，通过采用不同碳源、氮源和pH培养基对晶粒鬼伞进行菌丝培养，研究其菌丝生长的适宜条件，结果为，晶粒鬼伞适宜碳源为玉米粉，适宜氮源为硝酸铵，适宜酸碱度为5。

[1] 戴玉成, 庄剑云. 中国菌物已知种数[J]. 菌物学报, 2010, 29(5): 625-628.

[2] 李玉, 李泰辉, 杨祝良, 等. 中国大型菌物资源图鉴[M].郑州: 中原农民出版社, 2015: 772.

[3] 宋刚, 孙丽华, 王黎元. 贺兰山大型真菌图鉴[M]. 银川:黄河出版传媒集团宁夏人民出版社, 2011: 114-145.

[4] 李丹, 戴月婷, 李玉. 对采自黑龙江五个大型真菌菌株最佳培养条件的筛选[J]. 北方园艺, 2014(22): 154-157.

王鑫，女，研究员，从事食药用菌栽培育种研究，E-mail: ybnkysyj@163.com。

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2095-0934（2018）03-181-03