环状RNA与心血管疾病

，，2*

(1.中南大学湘雅药学院药理学系，湖南 长沙410078；2.心血管研究湖南省重点实验室)

1976年首次发现，一些植物的类病毒由单链共价闭合的RNA分子构成[1]，提示存在环状RNA(circular RNA，circRNA)。随后Hsu等[2]在电子显微镜下观察到人HeLa细胞质中也存在circRNA。由于circRNA的表达量很低，一度被视为是RNA异常剪接的产物，没有受到重视。直到陆续发现circRNA广泛存在于各种不同的后生动物(例如人、小鼠、斑马鱼、线虫、果蝇以及植物)[3]，才逐渐意识到其可能具有重要的生理功能。circRNA在不同的组织器官中均有分布，十分稳定，不易降解，在进化过程中保守性强[4]。circRNA在基因表达调控方面发挥着重要作用，也是人类疾病的重要标志物。

1 circRNA概述

circRNA是一类不具有5′末端帽子和3′末端poly(A)尾巴，由共价键形成闭环结构的RNA分子[5]。经典的RNA检测方法只能分离具有多聚腺苷酸尾(polyA)结构的线性RNA分子[6]。不同于线性RNA分子，circRNA不具有poly(A)尾巴，长久以来大多数circRNA都隐藏在转录组多聚腺苷酸化RNA分析的“雷达侦测”之下[7]。近来，为了在基因组水平鉴定circRNA，研究者提取总RNA之后，同时去除核糖体RNA和线性RNA，富集circRNA进行测序，从而检测到更多种类的circRNA。circRNA的调控作用贯穿基因调控的全过程，从mRNA转录、剪接到RNA降解和翻译。目前应用最广泛的筛选circRNA的方法主要有2种，包括高通量测序和芯片分析。

2 circRNA的生物合成与分类

circRNA由线性RNA反向剪接而来，主要来自蛋白质编码基因的外显子，也可由内含子区、非翻译区、基因间的基因座和已知转录本的反义序列得来[7]。

根据其来源主要分为3类：

(1)外显子环状RNA(Exonic circRNAs，ecircRNA)。Jeck等人[4]提出ecircRNA主要通过两种模式形成：第1种是套索驱动环化，通过外显子跳读所介导。第2种是内含子配对驱动环化，直接反向剪接而来。在此机制中，外显子上下游的侧翼内含子序列中包含反向重复ALU元件，介导ecircRNA的形成[8]。除了ALU元件之外，成环外显子侧翼内含子序列中还富集着反向互补配对序列(reverse complementary matches,RCMs)，影响circRNA的产生，双链RNA蛋白酶参与该过程，并且敲低基因编辑基因ADAR(adenosine deaminases acting on RNA)1后，ecircRNA的表达显著增加[5]。

此外，RNA结合蛋白也可介导ecircRNA的形成。 RBM20是一种RNA结合蛋白，可涉及多种心脏特异性基因的编辑过程，包括Titin基因。Titin基因的I-band区可形成许多ecircRNA，其中一些ecircRNA可以动态调控扩张型心肌病， RBM20突变会影响该区域ecircRNA的形成，诱导心肌病的发生[9]。 RNA结合蛋白FUS参与RNA的许多生物合成过程，可以与ecircRNA反向剪接位点两侧的内含子结合，调控ecircRNA的产生[10]。

(2)外显子-内含子环状RNA(exonic-introniccircRNA，EIcircRNA)。EIcircRNA与ecircRNA的形成机制相同，外显子成环后，还有内含子保留在外显子之间，这样的circRNA被称为 EIcircRNA。 EIcircRNA主要在细胞核内与U1snRNP相互作用，顺式调控其亲本基因的转录[11]。

(3)内含子环状RNA (circular intronic RNA，ciRNA)。CiRNA仅仅由内含子组成，其生物合成依赖于一个共有基序，该基序包括5′剪接位点附近的一个7nt的富含GU的元件和分支点附近的一个11nt的富含C端的元件。大多数ciRNA存在于细胞核内，与细胞质circRNA有不同的作用方式。CiRNA不与miRNA结合发挥“海绵作用”，但也会影响基因的转录过程。如基因ankrd52的内含子形成ci-ankrd52，大量富集于ankrd52的转录起始位点，正向调控RNA聚合酶II的功能，有效促进ankrd52的转录[12]。

3 circRNAs的作用机制

3.1充当“miRNA海绵” microRNAs(miRNA)是小非编码RNA分子，一般长度为20～25 nt，通过介导靶基因降解或限制靶基因翻译，从而抑制靶蛋白的表达[13]。circRNA可发挥竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA，CeRNA)作用，竞争性结合miRNA，解除miRNA对其靶基因的抑制作用，反过来促进靶基因的表达[14-15]。因此，miRNA分子海绵作用是circRNA最重要的作用机制之一[16-19]。circRNA与mRNA在细胞质中竞争性与miRNA结合，影响基因的调控[4]。

CiRS-7/CDR1as是小脑退行性相关肽(CDR1)基因的反义转录本[20]，与miR-7(包括miR-7a和miR-7b)有超过70个保守结合位点，可作为分子海绵有效抑制miR-7活性。CiRS-7/CDR1as稳定富集在细胞质中，导致miR-7不能作用于靶基因，使靶基因表达水平增高[17]。除了ciRS-7，还有一些circRNA可作为有效的“miRNA海绵”，如circ-SRY与miR-138在小鼠有18个结合位点，可是两者在人体中却不结合[16]。此外，在食管鳞癌组织中，circ-ITCH可以与亲本基因ITCH竞争性结合miR-214、miR-7和miR-20a，促进其靶基因ITCH的表达[21]。circ-HIPK3来源于HIPK3基因的2号外显子，与9个不同的miRNA共有18个结合位点，能抑制多个miRNA的活性来调控细胞增殖[22]。

3.2调控基因转录尽管大多数circRNA存在于细胞质，部分circRNA在细胞核内也能检测到。RNA ciankrd52，ci-mcm5和ci-sirt7在细胞核内聚集不含有miRNA反应元件。敲低丰度最高的ci-ankrd52导致线性mRNA ankrd52显著下调，但对其他上游和下游基因没有影响，表明ciRNA顺式调控其亲本基因的表达。CiRNAs和Pol II的延伸复合物之间存在相互作用，这可能是ciRNAs调控基因转录的潜在机制[12]。

circRNA调控基因转录的另一个机制是与U1snRNP直接且稳定地相互作用[23]。在EIciRNA中，保存的内含子有一个U1snRNP结合位点。使用RNA-DNA双荧光原位杂交发现EIciRNA，U1 snRNP，Pol II和宿主基因启动子之间存在多重相互作用。尽管circRNA会干扰其同源线性mRNA的形成，一旦生成EIciRNA，它们可以反过来增加自身以及相应线性转录本的表达[11]。

3.3调控蛋白质生成circRNA可以与Pol II和AGO蛋白相互作用，充当蛋白调控者，影响蛋白质的定位、种类和储存RNA结合蛋白(RNA binding proteins， RBP)[24]。circMbl拥有剪切因子muscleblind(MBL)结合位点，通过与MBL结合反过来调控circMbl的形成，这是一种复杂的蛋白质自身调节机制[25]。circ-Foxo3能与蛋白质CDK2 和P21结合，形成三元复合体，调控细胞周期进程[26]。

3.4翻译蛋白质circRNA自被发现以来一直被定义为非编码RNA。事实上，大多数circRNA来源于蛋白编码序列和开放阅读框，并且存在于细胞质中，因此早有研究者怀疑circRNA可能翻译蛋白质。1995年就有文献报道，某些circRNA拥有内部核糖体插入位点(internal ribosome entry site，IRES)，可以进行翻译[27]。构建一个包含IRES的circRNA转染到细胞中，可以翻译出功能性蛋白质[28]。circ-FBXW7是抑癌基因FBXW7的第 3、4 外显子环化形成的一个circRNA，可翻译一个185氨基酸大小的蛋白质-FBXW7-185aa。FBXW7通过泛素化途径调控原癌基因c-Myc的稳定性，而FBXW7-185aa可以协同母基因FBXW7，降低c-Myc的蛋白表达，促进c-Myc的泛素化降解，从而抑制胶质瘤的发生[29]。这些研究打破了“circRNA属于非编码RNA”的传统认识。

最近有研究表明，circRNA即使没有IRES和翻译时所需的特定序列(“帽子”结构和poly-A“尾巴”)，也能翻译成蛋白质[30]。然而，外源性circRNA可以进行翻译，却还没有证据表明内源性circRNA也能进行翻译。

3.5调控蛋白质翻译一些ecircRNA有翻译起始密码子序列，使得线性转录本不能产生蛋白质，导致终产物表达下调。这种调控作用成为“基因陷阱”(mRNA traps)，即circRNA调控蛋白质的翻译不是通过自身翻译蛋白质，而是经由阻断其他蛋白质的形成。在人成纤维细胞中，34%单个环状外显子包含起始密码子，表明circRNA作为“基因陷阱”的广泛作用[24]。

4 circRNA与心血管疾病

心血管疾病时circRNA变化情况如表1所示。对circRNA在心血管疾病中的作用的了解还很有限，研究其在心血管疾病中的作用可能揭示新的发病机制，继而发现治疗心血管疾病的新策略。

Wilson等[39]对14例人类心脏组织，25例小鼠心脏组织以及28天时间序列跨度的人类胚胎干细胞分化的心肌组织中的circRNA进行了RNA深度测序，分别在人和小鼠中发现了15 318个和3 017个心脏circRNA。这些circRNA的表达量与其同源线性RNA的表达量一致，含量最高的circRNA所对应的基因也是心肌组织特异性的基因，比如titin，RYR2和DMD基因。含量最丰富的circRNA为circSLC8A1-1。Titin基因对应高达402种不同的circRNA。心血管系统中的circRNA及其功能如表2所示。

表1 心血管疾病时环状RNA变化情况

4.1 circRNA与心肌梗死在心肌梗死小鼠心肌或低氧处理的心肌细胞中， Cdr1as和miR-7a均上调[40]。 Cdr1a在小鼠心肌细胞中过表达促进细胞凋亡，然而miR-7a过表达可逆转此过程[40]。特异性蛋白1(Specific protein 1，SP1)和聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase，PARP)都是miR-7a的靶点，而PARP和SP1过表达可以抑制缺氧条件下miR-7a诱导的细胞凋亡减少[40]。此外，Cdr1as在体内过表达增加了心肌梗死面积，PARP和SP1的表达也上调，然而miR-7a过表达能逆转这些变化[40]。

表2 心血管系统中的circRNA及其功能

circRNA是共价闭合环状结构，比其线性转录本更加稳定。由于缺乏自由端，circRNA能抵抗RNA核酸外切酶和RNase R，不易降解，可作为疾病诊断的标志物。Vausort等[41]检测了急性心肌梗死患者和健康人外周血中circRNA，通过生物信息学分析，确定了一种心肌梗死相关的circRNA-MICRA(myocardial infarction-associated circular RNA)。MICAR主要由染色体15q22上的锌指蛋白609(ZNF609)基因的外显子1形成，长874 nt。心肌梗死患者外周血中MICRA的表达水平比健康人明显要低。MICRA水平较低的患者发生左心室功能障碍的风险比较高，提示MICRA是左心室功能障碍有力的预测指标。

4.2 circRNA与心衰miR-223是心肌肥大的阳性调节因子。含胱冬肽酶富集功能域的凋亡抑制因子(apoptosis repressor with CARD，ARC)是miR-223的下游靶点；ARC转基因小鼠心肌肥大反应降低。心脏相关环状RNA(heart related circular RNA，HRCR)是最近报道的一种心脏circRNA，充当miR-223“海绵”，直接结合miR-223，抑制miR-223活性，从而增加ARC表达[43]。HRCR在心肌细胞和小鼠过表达均呈现减弱的心肌肥大反应。这些发现揭示了一个由circHRCR、miR-223和ARC组成的新的心脏肥大/心衰调控通路和治疗靶标[43]。

Werfel等[55]用去除核糖体RNA的方法建库进行RNA测序，分析了人、小鼠和大鼠不同发育阶段或生理病理状态下心脏circRNA的表达情况，发现人类心肌组织中circRNA的总体表达量要比大鼠和小鼠高。大鼠分为新出生大鼠组和成年大鼠组，两组间Slc8a1、Ttn、Eya3、Scmh1等基因对应的circRNA表达有显著差异。人和小鼠分为心衰组和非心衰组，研究发现两物种心衰组circRNA的数目与种类均高于非心衰组，例如Slc8a1和Ttn基因对应的circRNA在心衰组表达显著增加。特别地，兰尼碱受体2(ryanodine receptor 2，RYR2)基因存在于人的心脏组织中，对应的circRNA亚型超过100种。总之，circRNA与心脏生理病理过程密切相关，尤其是几个差异表达的circRNA分子对应的基因如Slc8a1、Ttn、RYR2、Eya3等，可作为进一步研究心衰的理想候选基因。

4.3 circRNA与动脉粥样硬化动脉粥样硬化的易感性与INK4/ARF基因座附近的染色体9p21.3 单核苷酸多态性相关，而 INK4/ARF基因的表达能够被多梳家族蛋白(Polycomb-group proteins，PcG)所抑制。cANRIL是INK4/ARF的环状反义转录物，染色体 9p21.3 对动脉粥样硬化易感性的影响主要通过cANRIL对PcG特异性的募集所实现[44]。

长链非编码RNA(lncRNA)ANRIL(CDKN2B-AS1)位于9号染色体短臂p21区域(9p21)，这个区域是人类动脉粥样硬化疾病相关的重要基因座[56]。LncANRIL表达增加导致动脉粥样硬化易感[57]，而线性linANRIL可以形成circRNA。进一步研究发现ANRIL基因外显子形成的circRNA形式多样，其中外显子5、6、7所形成的circRNA表达量最高，研究者将该circRNA定义为cANRIL[45]。核糖体生物合成因子PES1(pescadillo homologue 1)在核仁中参与60S核糖体亚基的组装合成过程[58]。cANRIL结合PES1的C-末端富含赖氨酸的结构域，从而损害血管平滑肌细胞和巨噬细胞中核酸外切酶介导的前体rRNA加工和核糖体生物发生。circANRIL诱导核仁应激和p53激活，导致人血管平滑肌细胞凋亡，抑制细胞增殖，这是动脉粥样硬化的关键细胞功能。这些发现表明，circANRIL参与调控核糖体的生物合成，在动脉粥样硬化中起关键作用[45]。

4.4 circRNA与冠心病赵振舟等[34]芯片筛选冠心病患者和健康人外周血中差异表达的circRNA，发现两组共有22个circRNA有差异性表达，其中在冠心病患者血液中表达上调的有12个，表达下调的有10个。进一步研究发现hsa_circ_0124644在冠心病患者外周血中特异性和敏感度相对较高，可作为冠心病的诊断标志物。

4.5 circRNA与糖尿病心肌病糖尿病引起心肌结构和功能改变，心脏肥大和心肌纤维化[59-60]。唐春梅等[32]用circRNA芯片检测糖尿病小鼠心肌组织中circRNA的表达谱，共发现76个circRNAs表达有显著差异，其中45个表达上调，31个表达下调。研究者选取了表达显著上调的circRNA_000203进行研究，发现circRNA_000203与miR-26b-5p有两个结合位点，在心肌成纤维细胞中过表达circRNA_000203，引起miR-26b-5p的下游靶点纤维化相关基因Col1a2和CTGF的表达上调，纤维细胞标志物α-SMA的表达也增加，提示circRNA_000203能促进心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。因此，circRNA_000203也许是糖尿病心肌病心肌纤维化的治疗新靶点。

5 展 望

心血管疾病是全球死亡率最高的疾病，其治疗与预后是一个重大难题。除了常规的治疗方式，目前基于基因的诊疗技术为治疗心血管疾病提供了新视角。采用疾病特异性相关的反义miRNA分子来抑制疾病，已进入临床试验阶段。在分子水平上，对miRNA的反义核苷酸链进行化学修饰可提高miRNA与细胞的亲和力，使其更有效地到达治疗靶点。而LNA-GapmeRs技术直接靶向lncRNA，与目标lncRNA结合后可迅速激活核糖核酸内切酶(RNase H)，降解lncRNA。

不同于miRNA和lncRNA，circRNA能抗核酸外切酶从而可在体内稳定存在，因此更具有潜力成为基因治疗的新工具。circRNA可充当“分子海绵”，与某个特定的miRNA结合，从而抑制靶基因的表达。已有报道证实在体外人工合成的circRNA分子可靶向与丙型肝炎病毒密切相关的miR-122，进而抑制丙型肝炎病毒复制和病毒蛋白的形成，缓解疾病进展[61]。circRNA还可通过调控基因表达，蛋白质翻译和生成等机制发挥作用。因此人工合成的circRNA也可能以靶基因或蛋白质为靶点，直接作用于疾病。近年来亦有研究发现一些circRNA可通过不同途径调控心血管疾病的相关信号通路，还有许多circRNA在心血管疾病的血浆、组织与细胞中表达差异较大，这些circRNA也可能参与疾病的发生发展过程。然而，现在对circRNA生物学功能的研究还有待深入，对其生物合成和降解过程也了解有限。进一步理解circRNA在心血管疾病发生发展中的作用机制，有助于人们更好地开发出基于circRNA的诊断和治疗工具。

参考文献：

[1] SANGER HL, KLOTZ G, RIESNER D, et al. Viroids are single-stranded covalently closed circular RNA molecules existing as highly base-paired rod-like structures[J]. Proc Natl Acad Sci U S A， 1976, 73(11):3852-6.

[2] HSU MT, COCAPRADOS M. Electron microscopic evidence for the circular form of RNA in the cytoplasm of eukaryotic cells[J]. Nature，1979, 280(5720):339-40.

[3] WANG PL, BAO Y, YEE MC, et al. Circular RNA is expressed across the eukaryotic tree of life[J]. Plos One， 2014, 9(6):e90859.

[4] JECK WR, SORRENTINO JA, WANG K, et al. Circular RNAs are abundant, conserved, and associated with ALU repeats[J]. RNA， 2013,19(2):141-57.

[5] IVANOV A, MEMCZAK S, WYLER E, et al. Analysis of intron sequences reveals hallmarks of circular RNA biogenesis in animals[J].Cell Rep， 2015, 10(2):170-7.

[6] LI JB, LEVANON EY, YOON JK, et al. Genome-wide identification of human RNAediting sites by parallel DNA capturing and sequencing[J].Science，2009, 324(5931):1210-3.

[7] GRAVELEY BR. Molecular Biology: power sequencing[J]. Nature，2008, 453(7199):1197-8.

[8] ZHANG XO, WANG HB, ZHANG Y, et al. Complementary sequence-mediated exon circularization[J]. Cell，2014,159(1):134-47.

[9] KHAN MA, RECKMAN YJ, AUFIERO S, et al. RBM20 regulates circular RNA production from the titin gene[J]. Circ Res，2016, 119(9):996-1003.

[10] ERRICHELLI L, DINI M S, LANEVE P, et al. FUS affects circular RNA expression in murine embryonic stem cell-derived motor neurons[J]. Nat Commun，2017,8:14741.

[11] LI Z, HUANG C, BAO C, et al. Corrigendum: exon-intron circular RNAs regulate transcription in the nucleus[J]. Nat StructMolBiol，2017, 24 (2):256-64.

[12] ZHANG Y, ZHANG XO, CHEN T, et al. Circular intronic long noncoding RNAs[J]. Mol Cell，2013, 51(6):792-806.

[13] FABIAN M R, SONENBERG N, FILIPOWICZ W. Regulation of mRNA translation and stability by microRNAs[J]. Annu Rev Biochem，2010, 79(1):351-79.

[14] CESANA M, CACCHIARELLI D, LEGNINI I, et al. A long noncoding RNA controls muscle differentiation by functioning as a competing endogenous RNA[J]. Cell，2011, 47(2):358-69.

[15] EBERT MS, NEILSON JR, SHARP PA. MicroRNA sponges: competitive inhibitors of small RNAs in mammalian cells[J]. Nat Methods，2007, 4(9):721-6.

[16] HANSEN TB, JENSEN TI, CLAUSEN BH, et al. Natural RNA circles function as efficient microRNA sponges[J]. Nature，2013,495(7441):384-8.

[17] MEMCZAK S, JENS M, ELEFSINIOTI A, et al. Circular RNAs are a large class of animal RNAs with regulatory potency[J]. Nature，2013, 495(7441):333-8.

[18] LIU Q, ZHANG X, HU X, et al. Circular RNA related to the chondrocyte ECM regulates MMP13 expression by functioning as a mir-136 ‘sponge’ in human cartilage degradation[J]. Sci Rep，2016,6:22572.

[19] LUKIW WJ. Circular RNA (circRNA) in Alzheimer's disease (AD)[J]. Front Genet，2013,4(4):307.

[20] DROPCHO EJ, CHEN YT, POSNER JB,et al.Cloning of a brain protein identified by autoantibodies from a patient with paraneoplastic cerebellar degeneration[J]. Proc Natl Acad Sci U S A，1987, 84(13): 4552-6.

[21] LI F, ZHANG L, LI W, et al. Circular RNA ITCH has inhibitory effect on ESCC by suppressing the Wnt/β-catenin pathway[J]. Oncotarget，2015,6(8):6001-13.

[22] ZHENG Q, BAO C, GUO W, et al. Circular RNA profiling reveals an abundant circHIPK3 that regulates cell growth by sponging multiple miRNAs[J].Nat Commun，2016,7:11215.

[23] HUANG C, SHAN G. What happens at or after transcription: insights into circRNA biogenesis and function[J].Transcription，2015, 6(4):61-4.

[24] JECK WR, SHARPLESS NE.Detecting and characterizing circular RNAs[J]. Nat Biotechnol，2014, 32(5): 453-61.

[25] ASHWAL-FLUSS R, MEYER M, PAMUDURTI NR, et al. CircRNA biogenesis competes with pre-mRNA splicing[J]. Mol Cell，2014, 56(1):55-66.

[26] DU WW, YANG W, LIU E, et al. Foxo3 circular RNA retards cell cycle progression via forming ternary complexes with p21 and CDK2[J]. Nucleic Acids Res，2016, 44(6):2846-58.

[27] CHEN CY, SARNOW P. Initiation of protein synthesis by the eukaryotic translational apparatus on circular RNAs[J]. Science，1995, 268(5209):415-7.

[28] WANG Y, WANG Z. Efficient backsplicing produces translatable circular mRNAs[J]. RNA，2015, 21(2):172-9.

[29] YANGY, GAO X, ZHANG M, et al. Novel role of FBXW7 circular RNA in repressing glioma tumorigenesis[J]. J Natl Cancer Inst，2018,110(3).

[30] ABE N, MATSUMOTO K, NISHIHARA M, et al. Rolling circle translation of circular RNA in living human cells[J]. Sci Rep，2015,5:16435.

[31] DENG YY, ZHANG W, SHE J, et al.Circular RNA related to PPARγ function as ceRNA of microRNA in human acute myocardial infarction[J]. J Am CollCardiol，2016, 68(16):C51-2.

[32] TANG CM, ZHANG M, HUANG L, et al. CircRNA_000203 enhances the expression of fibrosis-associated genes by derepressing targets of miR-26b-5p, Col1a2 and CTGF, in cardiac fibroblasts[J]. Sci Rep，2017, 7:40342.

[33] ZHOU B, YU JW.A novel identified circular RNA, circRNA_010567, promotesmyocardial fibrosis via suppressing miR-141 by targeting TGF-β1[J]. Biochem Biophys Res Commun，2017, 487(4):769-75.

[34] ZHAO Z, LI X, GAO C, et al. Peripheral blood circular RNA hsa_circ_0124644 can be used as a diagnostic biomarker of coronary artery disease[J].Sci Rep， 2017,7:39918.

[35] GU Y, KE G, WANG L, et al. Altered expression profile of circular RNAs in the serum of patients with diabetic retinopathy revealed by microarray[J]. Ophthalmic Res，2017,58(3):176-84.

[36] WU HJ, ZHANG CY, ZHANG S, et al. Microarray expression profile of circular RNAs in heart tissue of mice with myocardial infarction-induced heart failure[J]. Cell Physiol Biochem，2016,39(1):205-16.

[37] WU N, JIN L, CAIJ. Profiling and bioinformatics analyses reveal differential circular RNA expression in hypertensive patients[J]. Clin Exp Hypertens，2017, 39:454-9.

[38] RAN M, YING W, WAN J, et al. Microarray expression profile of circular RNAs in chronic thromboembolic pulmonary hypertension[J]. Medicine，2017, 96(27):e7354.

[39] TAN WL, LIM BT, ANENE-NZELU CG, et al. A landscape of circular RNA expression in the human heart[J]. Cardiovasc Res，2017,113(3):298-309.

[40] GENG HH, RUI L, SU Y M, et al. The circular RNA cdr1as promotes myocardial infarction by mediating the regulation of miR-7a on its target genes expression[J].Plos One，2016, 11(3):e0151753.

[41] VAUSORT M, SALGADOSOMOZA A, ZHANG L, et al. Myocardial infarction-associated circular RNA predicting left ventricular dysfunction[J]. J Am CollCardiol，2016, 68(11):1247-8.

[42] WANG K, GAN TY, LI N, et al. Circular RNA mediates cardiomyocyte death via miRNA-dependent upregulation of MTP18 expression[J].Cell Death Differ，2017,24(6):1111-20.

[43] WANG K, LONG B, LIU F, et al. A circular RNA protects the heart from pathological hypertrophy and heart failure by targeting miR-223[J]. Eur Heart J， 2016,37(33):2602-11.

[44] BURD CE, JECK WR, LIU Y, et al. Expression of linear and novel circular forms of an INK4/ARF-associated non-coding RNA correlates with atherosclerosis risk[J].PLoS Genet，2010,6(12):e1001233.

[45] HOLDT LM, ANIKA S, KRISTINA S, et al. Circular non-coding RNA ANRILmodulates ribosomal RNA maturation and atherosclerosis in humans[J]. Nat Commun，2016,7:12429.

[46] SHAN K, LIU C, LIU BH, et al. Circular non-coding RNA HIPK3 mediates retinal vascular dysfunction in diabetes mellitus[J].Circulation，2017,136(17):1629-42.

[47] CHEN J, CUI L, YUAN J, et al. Circular RNA WDR77 target FGF-2 to regulate vascular smooth muscle cells proliferation and migration by sponging miR-124[J]. Biochem Biophys Res Commun，2017, 494(1-2):126-32.

[48] MCM WE. Smooth muscle differentiation control comes full circle: the circular noncoding RNA, circActa2, functions as a miRNA sponge to fine-tune α-SMA expression[J]. Circ Res，2017,121(6):591-3.

[49] DANG RY, LIU FL, LI Y. Circular RNA hsa_circ_0010729 regulates vascular endothelial cell proliferation and apoptosis by targeting the miR-186/HIF-1α axis[J]. Biochem Biophys Res Commun，2017,490(2):104-10.

[50] BOECKEL JN, JAÉ N, HEUMÜLLER AW, et al.Identification and characterization of hypoxia-regulated endothelial circular RNA novelty and significance[J].Circ Res，2015,117(10): 884-90.

[51] LIU C, YAO MD, LI CP, et al. Silencing of circular RNA-ZNF609 ameliorates vascular endothelial dysfunction[J]. Theranostics， 2017,7(11):2863-77.

[52] LI H, YANG J, WEI X, et al. CircFUT10 reduces proliferation and facilitates differentiation of myoblasts by sponging miR-133a[J]. J Cell Physiol，2018, 233(6):4643-51.

[53] ZENG Y, DU WW, WU Y, et al. A circular RNA binds to and activates akt phosphorylation and nuclear localization reducing apoptosis and enhancing cardiac repair[J]. Theranostics，2017,7(716):3842-55.

[54] DU WW, YANG W, CHEN Y, et al. Foxo3 circular RNA promotes cardiac senescence by modulating multiple factors associated with stress and senescence responses[J]. Eur Heart J，2017,38(18):1402-12.

[55] WERFEL S, NOTHJUNGE S, SCHWARZMAYR T, et al.Characterization of circular RNAs in human, mouse and rat hearts[J]. J Mol Cell Cardiol，2016, 98:103-7.

[56] HOLDT LM, BEUTNER F, SCHOLZ M, et al. ANRIL expression is associated with atherosclerosis risk at chromosome 9p21[J]. Arterioscler Thromb VascBiol，2010,30(3):620-7.

[57] MEHTA NN. Large-scale association analysis identifies 13 new susceptibility loci for coronary artery disease[J]. Circ Cardiovasc Genet，2011,43(4):327-9.

[58] THOMSON E, FERREIRACERCA S, HURT E.Eukaryotic ribosome biogenesis at a glance[J]. J Cell Sci，2013,126(21):4815-21.

[59] DEVEREUX RB, ROMAN MJ, PARANICAS M, et al. Impact of diabetes on cardiac structure and function the strong heart study[J]. Circulation，2000, 101(19):2271-6.

[60] BELLA JN, DEVEREUX RB, ROMAN MJ, et al. Separate and joint effects of systemic hypertension and diabetes mellitus on left ventricular structure and function in American Indians (the Strong Heart Study)[J]. Am J Cardiol， 2001,87(11): 1260-5.

[61] JOST I, SHALAMOVA LA, GERRESHEIM GK, et al.Functional sequestration of microRNA-122 from Hepatitis C Virus by circular RNA sponges[J]. RNA Biol，2018:1-8.