热休克蛋白90在胃癌患者外周血中的表达及其临床意义

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(1.雅安市人民医院肿瘤科，四川 雅安 625000；2.雅安市人民医院消化内科)

胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率排名均位于前列，不仅增加了家庭经济和国家医疗资源负担，更给患者身心造成了严重创伤，严重威胁着无数人的生命[1]。胃癌死亡率非常高，主要原因在于胃癌临床表现比较滞后，一般出现临床特征时已达到中晚期，并且内镜检查、活检等胃癌诊断方法也很难真正做到普及，这都导致胃癌很难能够被及时发现，极大耽误了胃癌患者最佳治疗时间[2]。大量临床实践证明，血清标志物不仅能够有助于早期发现肿瘤，而且还与浸润、转移等恶性肿瘤生物学行为相关，能够对预后情况进行评价[3]。因此，本文旨在探讨血清热休克蛋白90(heat shock protein 90, HSP90)对胃癌诊断的价值，并分析其与肿瘤直径、临床分期、浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移相关等临床病理特征的相关性，评估其对肿瘤生物学行为的评价意义。

1 资料与方法

1.1研究对象选取2014年1月至2017年1月期间我院收治的70例胃癌患者(胃癌组)和70名健康志愿者(对照组)作为研究对象，所有患者均经病理学检查确诊为胃癌。胃癌组男性43例，女性27例，中位数年龄61岁(29～76岁)；对照组男性45例，女性25例，中位数年龄59岁(27～78岁)，两组性别比和年龄均无统计学差异(P>0.05)。本研究已获得所有胃癌患者和志愿者的知情同意。

1.2方法

1.2.1 血样采集与检测 所有研究对象均于清晨空腹抽取静脉血，低温高速离心机4 ℃低温离心，取上层血清保存于-80 ℃冰箱中备用。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清中HSP90含量，试剂盒由武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司提供，严格按照试剂盒进行检测，大致操作步骤如下：将血清样本从冰箱拿出后平衡至室温，酶标板各孔对应加入血清或标准品，恒温孵育箱中37 ℃避光孵育1.5 h，倾去液体后加入生物素化抗体工作液，再次孵育1 h，洗涤后甩板，加入酶结合物工作液，继续孵育0.5 h，再次洗涤后加入底物溶液，待标准品出现明显梯度后加入终止液，测定吸光度并计算HSP90含量。

1.2.2 统计学处理 采用SPSS19.0软件进行统计，所有数据以中位数及四分位数M (P25～P75 )表示，HSP90的胃癌诊断价值通过采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线进行评价，并记录约登指数(Youden index，两组间比较采用Mann-Whitney U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis检验，P<0.05代表有统计学差异。

2 结 果

2.1各组血清热休克蛋白90含量的比较

与对照组比较，胃癌组血清中HSP90含量显著升高，中位数为对照组的1.75倍，差异有统计学意义(P<0.01)，结果见表1。

表1 各组血清热休克蛋白90含量的比较[M(P25～P75)]

2.2血清热休克蛋白90对胃癌的诊断价值分析本研究采用ROC曲线评价血清HSP90对胃癌的临床诊断价值，结果表明，血清HSP90诊断胃癌的ROC曲线下面积为0.754，95%置信区间为(0.673,0.835)，以约登指数作为准确度评价指标，当约登指数取最大值0.429时，灵敏度和特异性分别为80.00%和62.86%，ROC曲线见图1。

图1 血清HSP90诊断胃癌的ROC曲线分析

2.3血清热休克蛋白90表达与胃癌临床病理特征的相关性分析本研究分析结果表明，胃癌患者血清HSP90在不同性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移等分组中均无显著性差异(P>0.05)，结果见表2。

表2 血清HSP90表达与胃癌临床病理特征的相关性分析

3 讨 论

HSP90是指机体在应激原的刺激下，细胞内快速合成的一类蛋白质，广泛存在于原核生物和真核生物中，有研究结果显示HSP90在肿瘤细胞中表达显著高于正常细胞的2～10倍[4]。在正常情况下，HSP90表达相对较低，但当细胞处于应激状态时HSP90表达会升高数倍[5]。HSP90具有高度保守性，属于ATP依赖型的分子伴侣，是细胞内活跃程度最高的分子伴侣之一，介导蛋白质折叠、装配和转运等过程，对于维持蛋白质构象和活性、调控蛋白降解等过程有着重要意义[6]。HSP90作为细胞内重要的调节蛋白，是众多细胞信号通路的关键组成蛋白，广泛参与细胞增殖、机体发育、免疫调控等生理过程，对于维持机体正常运转意义重大[7]。

随着研究的不断深入，研究发现HSP90与肿瘤细胞凋亡、肿瘤免疫、肿瘤发生发展密切相关，HSP90主要负责调节肿瘤细胞所需周期蛋白、激酶等蛋白的活性，介导相关癌蛋白构象成熟、转运和转化等过程[8]。Tas等[9]研究表明，黑色素瘤患者血清HSP90含量显著高于健康人群，具有一定的临床诊断价值，但HSP90表达与患者年龄、性别、病变部位、组织学分级、淋巴结转移、临床分级以及化疗效应均无显著相关性。Sun等[10]在肝细胞癌血清标志物筛选中发现，相对于正常人群，肝细胞癌患者血清HSP90含量异常升高超过6倍，该结果提示血清HSP90很可能成为肝细胞癌诊断的血清学指标。Wang等[11]对322份胃癌组织样本进行研究发现，胃癌组织中HSP90阳性率为69.6%， HSP90表达与浸润深度、淋巴结转移、临床分级等显著相关，并且可作为无复发生存期和总生存期的独立预后因素，表明肿瘤组织HSP90对于胃癌诊断、化疗效果评估、预后判断等具有参考价值。综上所述，血清HSP90可能对于胃癌诊断、肿瘤恶性生物学行为评价等具有重要临床参考价值，并且可行性较高。

本研究结果表明，胃癌患者血清HSP90含量显著高于健康人群。ROC曲线分析结果显示，血清HSP90区别健康人群和胃癌患者的曲线下面积0.754，表明血清HSP90具有中等胃癌诊断价值。准确度评价指标约登指数最大值为0.429，此时对应的灵敏度和特异性分别为80.00%和62.86%，表明血清HSP90用于诊断胃癌具有较高的灵敏度，不易发生漏诊的情况，但特异性较低，易导致误诊的发生，因此，在实际临床工作中，应根据具体情况对诊断结果进行分析。本研究还对血清HSP90表达与性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移等的关系进行了分析，结果表明血清HSP90与临床分级、淋巴结转移等恶性生物学行为无显著相关性，对于评价胃癌患者肿瘤生物学行为无重要价值。HSP90具有提高细胞生存能力，维持蛋白稳定性功能，在胃癌的发育、生长、分化及基因转录过程中均起到十分重要的作用[12]。在各种应急因素刺激下，HSP基因可被异常激活，HSP蛋白表达量增加，有效激活细胞自我防御功能，维持细胞稳定，避免细胞调查，且可有效保护胃癌细胞面授凋亡因素刺激，进而促进胃癌的发生及发展[13]。

综述所述，血清HSP90表达与胃癌诊断关系较大，但与临床病理特征、胃癌患者化疗效果评价、预后判断等的相关性不大，有待进一步探讨。

参考文献：

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[13] 朱琴琴, 费素娟. 热休克蛋白在胃癌诊疗中的价值[J]. 临床误诊误治, 2017, 30(8):109-13.