微柱凝集法在自身免疫溶血性贫血诊断中的应用价值分析

陈兴英

自身免疫性溶血性贫血（AIHA）是溶血性贫血中较为常见的类型之一，其主要贫血原因是由于体内免疫系统调节功能紊乱，导致产生抗体并破坏自身红细胞［1-5］。抗人球蛋白试验（AT）又称Coombs试验，是检查AIHA最常用的亦最有意义的实验室检查，直接抗人球蛋白试验（DAT）结果呈阳性是确诊AIHA的核心依据之一。传统的Coombs试验主要以试管法为主，其试验结果受检验师操作水平﹑抗体浓度等多方面影响，且检查结果需经显微镜检查；而微柱凝集法操作简单，且结果经肉眼即可辨认，目前已逐渐成为Coombs试验的主要手段。本研究通过探究微柱凝集法在AIHA诊断中的应用价值，旨在为检验工作提供参考依据，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取本院血液科2014年2月至2016年9月收治的疑诊为自身免疫性溶血性贫血患者120例作为观察对象，其中男45例，女75例；年龄17～76岁，平均（42.82±18.77）岁；病程3个月～11年，平均（5.61±3.09）年；合并胆结石17例，糖尿病9例，冠心病6例，脂肪肝10例。纳入标准：（1）符合自身免疫性溶血性贫血的相关临床表现，即出现贫血﹑脾大﹑黄疸等表现者。（2）血象检查发现网织红细胞增多，并有骨髓增生者。（3）无合并严重的肝脏﹑肾脏﹑肺等实质性脏器组织疾病，心脑血管指标检查正常者。（4）对本研究内容知情，自愿参加本项研究并签署知情同意书者。排除标准：（1）经问诊或查体排除贫血可能的患者。（2）近6个月内有任何输血史或服用其他可造成贫血貌药物的患者。（3）患有肺结核﹑乙型肝炎等传染性疾病的患者。（4）患有严重的免疫系统疾病的患者。（5）患有任何系统恶性肿瘤的患者。（6）因为各种原因而拒绝配合本研究完成者。

1.2 方法 （1）器材与药品：低离子强度盐溶液﹑BioVue专用双相电子控制离心机﹑BioVue专用孵育器﹑间接Coombs试验抗-IgG﹑Coombs试验检测卡均购自美国强生公司；直接Coombs实验试剂盒抗-IgG﹑C3d﹑抗-C3d﹑抗D-IgG单克隆抗体均选用江苏力博抗人球蛋白检测卡；试管法所用红细胞表面抗体IgG﹑IgM﹑IgA﹑C3检测试剂盒均购自上海血液生物医药制品有限责任公司。阴性对照配制方法：健康成人3%Rh阳性O型红细胞悬液与AB型血清等量混合，37℃水浴20min后以0.9%氯化钠溶液洗涤，配制成3%的红细胞悬液。阳性对照配制方法：健康成人3%Rh阳性O型红细胞悬液与抗D-IgG等量混合，37℃水浴20min后以0.9%氯化钠溶液洗涤，配制成3%的红细胞悬液。（2）微柱凝集法：微柱凝集法试验均设立阴性﹑阳性对照。直接Coombs试验法：将标本制成3%的红细胞悬液，取10μl置于Coombs试验检测卡孔中，1200r/min离心5min后与对照液比对。间接Coombs试验法：取50μl低离子强度盐溶液置于Coombs试验检测卡孔中，再加上50μl健康成人3%Rh阳性O型红细胞悬液与受检血清按1：4比例配置得液体，1200r/min离心5min后与对照液比对。（3）试管法：试管法试验均设立阴性﹑阳性对照。将受检血清配制为10%压积的细胞悬液。直接Coombs试验法：取0.4ml压积红细胞用生理盐水配制为2%的压积红细胞后置于试管中，将四种抗体试剂加入后37℃水浴20min，再1200r/min离心1min后镜检，并与阴性﹑阳性对照液比对。间接Coombs试验法：取0.4ml压积红细胞与健康成人3%Rh阳性O型红细胞悬液等量混匀，37℃水浴60min后以生理盐水配制为5%的压积红细胞后置于试管中，将四种抗体试剂加入后37℃水浴20min，再1200r/min离心1min后镜检，并与阴性﹑阳性对照液比对。

1.3 观察指标 直接Coombs试验中两种方法的诊断效果的比较；间接Coombs试验中两种方法的诊断效果的比较。

1.4 统计学方法 采用SPSS23.0统计软件。计量资料以（）表示，组间比较采用t检验；计数资料以n（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

120例患者中，共确诊为自身免疫性溶血性贫血者71例，其中，单纯IgG阳性39例，单纯C3d阳性11例，IgG+C3d阳性10例，IgG+C3d+IgM阳性6例，IgG+IgA阳性5例。直接Coombs试验中，微柱凝集法检出阳性者78例。试管法检出阳性者47例，其中单纯IgG阳性34例，单纯C3d阳性7例，IgG+C3d阳性6例。间接Coombs试验中，微柱凝集法检出阳性者22例，试管法检出阳性者14例。

2.1 直接Coombs试验中两种方法的诊断效果比较 见表1。

表1 直接Coombs试验中两种方法的诊断效果比较（%）

2.2 间接Coombs试验中两种方法的诊断效果比较 见表2。

表2 间接Coombs试验中两种方法的诊断效果的比较（%）

3 讨论

Coombs试验属于间接血凝试验，其主要试验原理为：以抗球蛋白抗体作为连接红细胞表面抗原与特异性抗体相结合的第二抗体（亦称为桥梁抗体），使抗红细胞不完全抗体效价增加，从而表现出可观察到的红细胞凝集现象。直接Coombs试验直接检测已经粘附于红细胞表面上的抗体，间接Coombs试验则检测游离于血液中的抗体。Coombs试验呈阳性说明血液中存在抗红细胞不完全抗体，但除了自身免疫性溶血性贫血之外，还应当考虑药物免疫性溶血性贫血及慢性淋巴细胞性白血病。Coombs试验的灵敏度一般较高，但特异度相对较低，故不能完全依赖Coombs试验作为确诊AIHA的金标准，还应当结合其他检查手段联合诊断。

微柱凝集法是近年来逐渐兴起的一种新式检验方法，相比传统的试管法，微柱凝集法的操作较为简单，检验过程中采用的微柱可将红细胞凝聚在其周围，可观察阈值小于试管法，且肉眼即可直接观察到结果，无需经过显微镜检查，阳性标准清晰且受主观影响较小。微柱凝集法在检查过程中无洗涤红细胞的步骤，较大程度上解决了因洗涤导致的假阴性率上升的问题。且微柱凝集法主要过程均由机器完成，无需手工操作，在节约了检验时间的同时亦避免了由于检验师个人经验不足所造成的误差［6］。本资料将试管法和微柱凝集法同时检验标本，比较了两种检验方法的总诊断效果及直接抗人球蛋白试验中对各抗体型患者的阳性检出率。检验结果显示，直接﹑间接Coombs试验中，微柱凝集法的灵敏度﹑特异度以及诊断准确率均明显高于试管法，结果符合试验预期。

综上所述，微柱凝集法相比传统试管法对自身免疫性溶血性贫血的诊断效果更好，且操作方法更加简便易行，因此推荐在检验工作中推广。

［1］ 林嘉,何屹,饶绍琴．微柱凝集技术交叉配血主侧相合、次侧不合的处理流程研究．国际检验医学杂志,2015,36(5):581-582．

［2］ Al MVE．Danazol:An attractive option for the treatment of autoimmune haemolytic anemia．Nucleic Acids Res,2014, 40(19):9513-9521．

［3］ 邹强．不同输血方法在自身免疫性溶血性贫血患者中应用研究．临床医药文献电子杂志,2016,3(29):5811-5811．

［4］ Arndt PA,Leger RM,Garratty G．Serologic characteristics of ceftriaxone antibodies in 25 patients with drug-induced immune hemolytic anemia．Tranfusion,2012,52(3):602-612．

［5］ Abdolhosseini M,Nandula SR,Song J,et al．Lysine substitutions convert a bacterial-agglutinating peptide into a bactericidal peptide that retains anti-lipopolysaccharide activity and low hemolytic activity．Peptides,2012,35(2):231．

［6］ Barcellini W,Fattizzo B．Clinical Applications of Hemolytic Markers in the Differential Diagnosis and Management of Hemolytic Anemia．Dis Markers,2015,2015(3):635-670．