CK20与宫颈癌病理分型、临床特征及化疗敏感相关性研究

周 波 杨英捷 何丽萍

细胞角蛋白(cytokeratin,CK)是组成细胞骨架系统中间丝的成分之一，分为CK1～CK20等20种。细胞角蛋白主要分布于上层组织细胞中，但是在骨髓、血液、淋巴结等处表达能力较弱，肿瘤细胞能够保留其来源的胚层特性，细胞角蛋白已经成为肿瘤细胞较为敏感和特异的标志物，被用来检测恶性肿瘤细胞[1]。宫颈癌是女性常见的1种恶性肿瘤，发病率仅次于乳腺癌。宫颈癌转移相关标志物的筛选为转移机制的研究提供线索，为乳腺癌的早期治疗提供分子基础，为抗转移治疗提供靶点。大量研究表明，CK20在宫颈癌组织中的表达较良性肿瘤组织上调，与宫颈癌转移具有一定关系[2-3]。本次研究通过对宫颈癌患者采用免疫组化SP法测定肿瘤标本中CK20表达水平，探讨细胞角蛋白20表达与临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 基本资料

选取2014年6月到2016年6月在本院治疗的宫颈癌患者77例，25例宫颈癌良性肿瘤组织作为对照。患者平均年龄(48.42±7.85)岁，年龄21～57岁。根据最新宫颈癌临床治疗指南及国际妇产科联盟(FIGO)宫颈癌临床分期标准[4]，其中ⅠB期16例，ⅠB2期患者28例，ⅡA期20例患者，Ⅲ期患者13例。患者年龄间差异无统计学意义(P>0.05)。本研究获我院伦理委员会批准，患者或近亲属对研究方案签署知情同意书。

1.2 入选及排除标准

入选标准[5]：确诊为宫颈癌且无其他恶性肿瘤患者；手术前未进行辅助放化疗、基因治疗及生物治疗患者；手术前进行血液化验、胸部、胃部及腹部CT等检查，排除内分泌疾病、炎性疾病等对本研究有影响的疾病；患者同意参与本次研究。

排除标准：不满足入选标准的患者；伴有严重免疫缺陷或自身免疫疾病；患者未签署同意书。

1.3 方法

免疫组化SP染色法：将样本组织浸泡在40 g/L多聚甲醛溶液中，用石蜡包埋，然后脱蜡脱水，经H2O2灭活内源酶，PBS漂洗3次。经自来水充分洗涤，然后用苏木精复染。细胞角蛋白20阳性表达位于细胞质内，显现为棕黄色颗粒。根据显色癌细胞比例分为：着色细胞比例>30%为强阳性，着色细胞比例<30%为阳性，着色细胞比例<10%为弱阳性，肿瘤细胞均未着色为阴性。

1.4 试剂及仪器

蒸馏水：中国医学科学院基础所配制；淋巴细胞分离液：上海华精生物技术公司生产；PBS缓冲液：北京协和医院病理科配制；苏木精：北京协和医院病理科配制；无水乙醇：北京中山金桥生物有限公司；多聚甲醛溶液：北京协和医院病理科配制。离心机：美国Beckman公司生产；干燥箱：上海实验仪器总厂生产；低温冰箱：美的公司生产。

1.5 化疗敏感性判断

ⅠB1、ⅠB2、ⅡA期患者采用新辅助化疗，联合化疗后行手术根治治疗；Ⅲ期患者采用化疗后联合放疗治疗，化疗3个周期后为评估时间点。化疗方案采用TP方案(铂类+紫杉醇类)：顺铂75 mg/m2+紫杉醇 175 mg/m2，。根据实体瘤疗效标准(RECIST)评价实体瘤近期疗效：完全缓解(CR)，肿瘤病灶完全消失；部分缓解(RR)，病灶的最长径之和与基线状态相比，至少减少30%以上；病变进展，病灶最长径之和与治疗之后所记录到的最小病灶最长径之和比较，增加20%，或出现一个或以上新的病灶；病变稳定，介于部分缓解和疾病进展之间。定义完全缓解和部分缓解为临床有效，化疗敏感；稳定和进展为无效，定义为化疗耐药(不敏感)。

1.6 统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件进行分析，计量资料采用均值±标准差(±s)；计数资料采用检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CK20阳性表达率比较

CK20在宫颈癌患者外周血中的阳性表达率31.17%(24/77)，明显高于宫颈癌良性肿瘤组织对照组的16.00%(4/25)，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 CK20与宫颈癌临床特征的相关性

HPV感染阳性、淋巴结转移宫颈癌患者CK20水平高于HPV阴性者(P<0.05)。宫颈癌组织学分级越低，CK20表达水平越高(P<0.05)。CK20表达水平宫颈癌患者年龄、临床分期、肿瘤最大直径无明显相关性(P>0.05)。与宫颈癌病理分型、HPV感染、淋巴结转移、组织学分化具有明显相关性(P<0.05)，见表1。

2.3 CK20表达与宫颈癌化疗敏感性的相关性

根据世界卫生组织制定的关于实体肿瘤化疗敏感性标准，完全缓解和部分缓解为临床有效，定义为化疗敏感；稳定和进展为无效，定义为化疗耐药，将患者分为化疗敏感组和不敏感组，其中敏感组44例，不敏感组33例，化疗不敏感组CK20表达水平明显高于化疗敏感组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表1 CK20与宫颈癌临床特征的相关性/例

表2 CK20表达水平与宫颈癌化疗敏感性的相关性/例

3 讨论

细胞角蛋白是中间丝蛋白家族最大、最复杂的亚类，可从增殖或凋亡的细胞中释放，其中CK20是最新发现的细胞角蛋白，含有424个氨基酸残基，具有独特的表达方式和分布特点[6-7]。CK20的合成不仅局限于减数分裂后末端分化的细胞，当细胞侵袭、恶性转化、肿瘤转移及细胞体外培养时都能够继续进行。CK20具有严格的上皮特异性分布，主要分布于泌尿道伞状细胞、舌味蕾细胞、胃十二直肠粘膜等[8-10]。CK蛋白有20多种异构体，在病理诊断学中CK蛋白是肿瘤上皮来源的主要手段之一。其中CK20蛋白常表达在宫颈上皮中，是宫颈癌主要诊断分子之一[11-13]。

本次研究发现，CK20在宫颈癌患者外周血中的阳性表达率明显高于宫颈癌良性肿瘤组织对照组，进行的临床特征比较说明CK20与宫颈癌的临床分期、淋巴结转移、分化程度有一定相关性。对化疗敏感组和不敏感组的研究结果发现，化疗不敏感组CK20表达强度明显高于化疗敏感组，CK20的高表达会导致化疗敏感性降低[14-15]。研究发现，仅上皮细胞可以释放角蛋白，在正常组织上皮细胞、上皮源性癌细胞和转移的肿瘤细胞中都有细胞角蛋白的表达，健康人外周血液种无细胞角蛋白的表达，而肿瘤患者外周血液种有细胞角蛋白的表达，角蛋白可以作为诊断肿瘤的一种方法[16-18]。更深入的研究发现，宫颈癌的临床分期、淋巴结转移、分化程度等与CK20均具有相关性。

综上所述，CK20在宫颈癌组阳性表达率较良性疾病组明显升高，其与宫颈癌的临床分期、淋巴结转移、分化程度有一定相关性，CK20的高表达会导致化疗敏感性降低。

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