低氧诱导因子-1α联合p53蛋白在宫颈癌患者中的表达及对预后的影响

马园园 孙延霞 李艳菊

宫颈癌是现代妇科疾病中的高发肿瘤，目前临床医学中尚未清楚该病的发生机制，有学者认为其的出现与细胞凋亡异常有密切的相关性[1-3]。细胞凋亡受多种抑癌基因和癌基因的调控，因此低氧诱导因子-1α联合p53蛋白基因成为研究热点。有关低氧诱导因子-1α联合p53蛋白基因对宫颈癌关系的国外研究报道比较多，国内研究报道尚不够多[4-5]。笔者将根据相关工作经验，综合分析低氧诱导因子-1α联合p53蛋白在宫颈癌患者中的表达及对预后的影响展开分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

在2012年1月至2016年12月，对手术切除的宫颈组织石蜡包埋标本(宫颈上皮内瘤样变组、宫颈癌组)，采用免疫组化SP法，检测91例宫颈癌患者(宫颈癌组)、91例宫颈上皮内瘤样变者(宫颈上皮内瘤样变组)、91例宫颈鳞状上皮组织者(对照组)中低氧诱导因子-1α、p53蛋白的表达情况。对照组标本来源于子宫肌瘤切除术后的标本。宫颈上皮内瘤样变组中有30例CINⅠ、31例CINⅡ、30例CINⅢ，宫颈癌组中有50例宫颈鳞癌者、41例宫颈腺癌者。CINⅠ组平均年龄为(44.26±10.28)岁，平均体重为(58.58±12.26)kg；CINⅡ组平均年龄为(44.35±10.25)岁，平均体重为(58.51±12.38)kg；CINⅢ组平均年龄为(43.99±10.34)岁，平均体重为(58.57±12.31)kg。

1.2 试剂和方法

试剂：①羊抗人多克隆低氧诱导因子-1α、羊抗人多克隆p53蛋白；②兔抗羊低氧诱导因子-1α、兔抗羊p53蛋白；③HIGH-SABC免疫组织化学试剂盒；④DAB显色试剂盒；⑤二甲苯；⑥无水乙醇；⑦3%H2O2。所有标本均经过常规石蜡包埋，进行免疫组织化学染色处理。实验过程严格按照相关试剂盒说明书来进行[6,7]。

1.3 阳性结果判定标准

低氧诱导因子-1α存在于细胞质中，呈现黄色颗粒；p53蛋白主要存在于细胞核中，呈现棕黄色颗粒。

低氧诱导因子-1α判断标准：阳性细胞数≤10%为1分、11%～50%为2分、51%～80%为3分、>80%为4分；再按照阳性细胞染色强度计分： 3分为强、2分为中、1分为弱；上述两者之和最终判定结果为：“-”为阳性细胞数小于20%、“+”为2分～3分、“++”为4～5分、“+++”为6～7分。

p53蛋白判断标准：阴性为无阳性细胞，阳性细胞率<10%为弱阳性；阳性细胞率为10%～60%为中度阳性“++”，阳性细胞率>60%为强阳性“+++”。

1.4 统计学方法

应用SPSS 12.0统计学软件进行统计学分析，计量资料用(±s)表示，组间差异、组内差异采用t检验，计数资料比较采用χ2检验 ，P<0.05时为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患者的低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率比较

对照组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率分别为0(0/91，91例-、0例+、0例++、0例+++)、0(0/91，91例-、0例+、0例++、0例+++),宫颈上皮内瘤样变组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率分别为36.26%(33/91，33例-、32例+、18例++、8例+++)、36.26%(33/91，33例-、28例+、26例++、4例+++),宫颈癌组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率分别为68.13%(62/91，62例-、6例+、9例++、14例+++)、68.13%(62/91，62例-、12例+、10例++、7例+++),宫颈癌组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率显著高于宫颈上皮内瘤样变组和对照组(P<0.05)，见表1。

表1 3组患者的低氧诱导因子-1α、p53蛋白阳性表达情况比较/例

2.2 宫颈上皮内瘤样变组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率

宫颈上皮内瘤样变组CINⅠ者低氧诱导因子-1α阳性率为0(0/30)、p53蛋白阳性率为0(0/30)，CINⅡ者低氧诱导因子-1α阳性率为35.48%(11/31)、p53蛋白阳性率为38.71%(12/31)，CINⅢ者低氧诱导因子-1α阳性率为63.33%(19/30)、p53蛋白阳性率为56.67%(17/30)，CINI者低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率显著低于CINII和CINIII者(P<0.05)。

2.3 宫颈鳞癌组p53蛋白阳性率比较

宫颈鳞癌p53蛋白阳性率为76.00%(38/50)，宫颈腺癌p53蛋白阳性率为75.61%(31/41)，两者p53蛋白阳性率比较无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

随着生活节奏的加速以及工作压力的增加，现代女性癌症发生率呈增长的趋势。宫颈癌是1种常见的妇科肿瘤，对女性的正常工作和生活造成严重影响[8-9]。因此，有效的筛查是尽早发现宫颈癌的重要渠道。相关研究指出[10-11]，低氧诱导因子在宫颈癌患者中多出现异常表达的现象，证实其与宫颈癌的出现有密切的相关性。p53蛋白基因是1种关键的抑癌基因，能够有效抑制肿瘤的发生。已有资料表明，p53蛋白基因结构或者表达异常时人类各种恶性肿瘤中最为常见的基因改变，其中有51%左右的人类中，恶性肿瘤有p53蛋白基因突变。免疫组化可以有效检测到p53蛋白基因，且具有癌基因的功能。应用免疫组织化学方法检测低氧诱导因子-1α、p53蛋白在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤样变、宫颈鳞状上皮组织的表达，继而探讨出低氧诱导因子-1α、p53蛋白在宫颈癌发生以及发展中的相互关系[11-13]。

低氧诱导因子-1α是低氧诱导结合蛋白，主要由α和β两个亚基构成。低氧诱导因子-1α是诱导低氧基因和修复细胞氧内环境的核心调节因子，是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物体内的1种转录因子，其生物学效应主要由低氧诱导因子-1α亚基实现的。低氧诱导因子-1α在维持细胞能量代谢、肿瘤血管形成和细胞增殖等方面有着重要的价值和作用，低氧诱导因子-1α尤其在宫颈癌患者的发生发展过程中以及预后等有着重要的作用。本文研究结果显示宫颈癌组低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率显著高于宫颈上皮内瘤样变组和对照组(P<0.05)。从上述研究数据不难看出，低氧诱导因子-1α在恶性进展过程中起着关键的作用，正常对照组人群中无低氧诱导因子-1α和p53蛋白表达，宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的低氧诱导因子-1α阳性表达率和p53蛋白阳性表达率呈现显著上升趋势。本文结果还显示CINⅠ低氧诱导因子-1α阳性率、p53蛋白阳性率显著低于CINⅡ和CINⅢ者阳性率(P<0.05)。低氧诱导因子-1α、p53蛋白的阳性率表达在正常宫颈组织中无表达，在宫颈上皮内瘤样变组患者中的阳性表达和淋巴结转移以及肿瘤的临床分期密切相关，与组织类型无关。在宫颈癌的癌前病变阶段中，低氧诱导因子-1α、p53蛋白阳性表达率呈现升高趋势，指导宫颈癌中低氧诱导因子-1α、p53蛋白异常表达提示其是癌变过程的早期行为，在宫颈癌的发生和发展过程中有着重要的作用。随着肿瘤逐渐往深层发展， 所以其低糖状态逐渐加重，继而导致低氧诱导因子-1α、p53蛋白过度表达。本文研究结果还显示宫颈鳞癌、宫颈腺癌p53蛋白阳性率比较无统计学意义(P>0.05)。上述研究数据说明宫颈鳞癌组患者p53蛋白与宫颈癌的发生相关，是发生宫颈鳞癌的早期现象，p53蛋白的过度表达可以作为早期诊断宫颈癌的客观指标[14-15]。

综上所述，低氧诱导因子-1α联合p53蛋白在宫颈癌患者中的表达发挥着重要作用，低氧诱导因子-1α和p53蛋白能够作为宫颈癌诊疗的靶点。

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