蒲地蓝消炎颗粒的抗菌、解热、抗炎作用研究

邢玉娟，王建国，潘康锁，乔登江，杨彦平，陈玉库

(1.江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300；2.山东省威海市环翠区动物疫病预防控制中心，山东威海 264203；3.陕西省动物疫病预防控制中心，陕西西安 710016；4.内蒙古乌兰察布市兴和县动物疾病预防控制中心，内蒙古乌兰察布市 013650；5.西安雨田农业科技有限责任公司，陕西西安 710086)

蒲地蓝消炎口服液是由蒲公英、黄芩、板蓝根、苦地丁 4 味中药组成，具有清热解毒、抗炎消肿的功效，用于疖肿、腮腺炎、咽炎、淋巴结炎、扁桃体炎等疾病的治疗[1-2]。近年来，我们在蒲地蓝消炎口服液的基础上，将口服液改为颗粒剂，应用在鸡传染性支气管炎的对症治疗，取得了良好的效果。为进一步探讨蒲地蓝消炎颗粒治疗感染性疾病的药理作用机制,开展了以下研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药物 蒲地蓝消炎颗粒，西安雨田农业科技有限责任公司生产，100 g/袋，1.5 g生药/g，批号20120205。用双蒸馏水超声溶解，配成浓度为200 mg/mL的供试品原液，常规消毒后备用；蒲地蓝消炎片，云南白药集团股份有限公司生产，批准文号：国药准字Z20064017。

1.1.2 试验菌株 金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠埃希菌ATCC 25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853、白色念珠菌CMCC (B)10231，由陕西中医药大学医学技术学院医学检验实验中心提供。

1.1.3 主要试剂和器材

1.1.3.1 主要试剂 营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、改良马丁培养基；2,4-二硝基苯酚(化学纯)、二甲苯(分析纯)，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.1.3.2 主要器材 比浊仪，法国生物梅里埃公司产品；超净工作台(SW-CJ-1FD)，苏州净化设备有限公司产品；手提式灭菌锅，河北华泰设备医疗有限公司产品；恒温培养箱、电热恒温干燥箱，上海一恒科技有限公司产品；电子天平(BX320S)，上海精密仪器仪表有限公司产品。

1.1.4 实验动物 ICR小鼠，体重18 g～22 g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物生产许可证号SCXK(陕)2007-001；SD大鼠50只，雄性，体重180 g～220 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物生产许可证号SCXK(陕)2007-001。

1.2 方法

1.2.1 体外抑菌试验

1.2.1.1 菌悬液的制备 无菌条件下，分别用接种环取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌第2代菌悬液，在营养琼脂培养基上划线，35℃培养24 h；取白念珠菌的第2代菌悬液在改良马丁培养基上划线，25℃培养48 h。无菌条件下，用接种环调取单个菌落，置于装有5 mL灭菌生理盐水的试管中，震荡摇匀，校正其浓度为0.5麦氏比浊标准(MCF)约108CFU/ mL 的菌悬液[3]。

1.2.1.2 最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)测定 采用试管二倍稀释法[4]。取灭菌具塞试管10支，编号排列于试管架上。每支试管加入2 mL营养肉汤培养基，于第1支试管中加入2 mL供试品原液，混合均匀，取2 mL加入第2支试管中，振摇混合均匀后，取2 mL加入第3个试管中，依此类推，直到稀释到第8个试管，将第8支试管混合均匀后，从中取出2 mL弃去，得到蒲地蓝消炎颗粒的浓度分别为100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5、0.781 25 mg生药/mL。

取0.5 MCF的菌悬液，用无菌生理盐水稀释10倍，于每支试管分别加入0.1 mL稀释后的菌悬液，作为试验组。第9支试管不加供试药物，加入0.1 mL的供试菌悬液，为阳性对照。第10支试管加入营养肉汤培养基2 mL，再加入供试品原液2 mL不加菌液，为阴性对照。将试验组、阳性对照组、阴性对照组各管置37℃的培养箱中培养24 h，取出，观察。在阳性对照管细菌生长正常阴性对照管无菌生长的条件下，营养肉汤未发现浑浊的最低稀释浓度即为该样品的最低抑菌浓度(MIC)，分别吸取以上各试验管培养物0.1 mL移种在不含药物的琼脂培养基上,经孵育过夜，分别菌落计数，其菌落数少于5个的药物浓度即为最低杀菌浓度(MBC)。试验重复3次。

1.2.2 对腹腔注射金黄色葡萄球菌引起小鼠死亡的保护作用

1.2.2.1 菌液的制备 将浓度为0.5麦氏比浊标准(MCF)约108CFU/ mL 的金黄色葡萄球菌菌悬液，用生理盐水以10倍顺序稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8等不同浓度的菌液，备用。

1.2.2.2 预试验 将不同浓度的菌液分别腹腔注射于体重为18 g～22 g的小鼠，每浓度组5只，每只0.5 mL，观察小鼠在7 d内的死亡情况，选用引起小鼠80%～100%死亡的菌液浓度进行药物防治试验。预试验结果，引起90%的小鼠死亡的浓度为107个/mL，所以防治试验中细菌用量为0.5 mL/只(浓度107个/mL)[5]。

1.2.2.3 感染及给药方法 取18 g～22 g小鼠60只，雌雄各半，按性别、体重随机分为6组，蒲地蓝消炎颗粒高、中、低剂量组含生药分别为9.6、4.8、2.4 g/kg，药物对照组(蒲地蓝消炎片，4.8 g生药/kg)，阳性对照组，阴性对照组。将药物分别溶解于生理盐水0.5 mL，灌胃。各给药组连续灌胃给药3 d，每天1次，每次0.5 mL，阴性对照组灌胃等容量的生理盐水。于末次给药30 min后，1组～5组小鼠腹腔注射107个/mL金黄色葡萄球菌造成感染，每只0.5 mL，阴性对照组腹腔注射0.5 mL生理盐水。观察小鼠的死亡情况，连续7 d，统计各组的死亡率，卡方检验比较各组差异[6]。

1.2.3 对2,4-二硝基苯酚所致大鼠发热的解热作用

1.2.3.1 2,4-二硝基苯酚溶液的配制 精密称取2,4-二硝基苯酚150 mg，置于80 mL生理盐水中，滴加5 mol/L NaOH溶液，不断搅拌，待药液变为亮黄色，再加入生理盐水至100 mL。

1.2.3.2 造模及给药方法 雄性大鼠，试验前以MC-612型电子数字式体温计测定大鼠肛温，每日早晚各测量体温1次，连续3 d，选取肛温波动在0.5℃以内者纳入试验，随机分为5组，每组10只，即蒲地蓝消炎颗粒高剂量组(6.8 g/kg)、中剂量组(3.4 g/kg)、低剂量组(1.7 g/kg)，药物对照组(蒲地蓝消炎片3.4 g/kg)，阳性对照组。试验日各组大鼠灌胃给药，1 mL/100 g，阳性对照组灌胃给予等量的生理盐水，给药后1 h于背部皮下注射2,4-二硝基苯酚1 mL/100 g(15 mg/kg)，每60 min测体温1次，连续测定4 h[7-8]。

1.2.4 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响 小鼠50只，雌雄各半，按体重、性别随机分5组，每组10只，蒲地蓝消炎颗粒高剂量组(9.6 g/kg)、中剂量组(4.8 g/kg)、低剂量组(2.4 g/kg)，药物对照组(蒲地蓝消炎片4.8 g/kg)，阳性对照组。各给药组连续灌胃给药3 d，每天1次，每次0.1 mL/10 g，阳性对照组灌胃等量的生理盐水。于末次给药30 min后，用二甲苯棉球接触小鼠左耳约5 s，15 min后脱颈椎处死，手术剪剪下小鼠双耳，用直径 7 mm打孔器在左右耳相对称部位打下耳片，称重，记录其重量，以左耳重减右耳重为小鼠的耳肿胀度[9-11]。

2 结果

2.1 体外抑菌试验

蒲地蓝消炎颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、白色念珠菌有不同程度的抑制作用，其中，药物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强，MIC为6.25 mg/mL，MBC为12.5 mg/mL(表1)。

2.2 对腹腔注射金黄色葡萄球菌引起小鼠死亡的保护作用

蒲地蓝消炎颗粒高、中、低剂量组和药物对照组小鼠死亡率显著低于阳性对照组(P<0.05)，其中蒲地蓝消炎颗粒高剂量组死亡率与阳性对照组相比较，差异极显著(P<0.01)(表2)。

表1 蒲地蓝消炎颗粒的体外抑菌作用

2.3 对2,4-2硝基苯酚所致大鼠发热的解热作用

由表3可见，攻毒后1 h，各给药组体温升高值均低于阳性对照组，但差异不显著(P>0.05)。攻毒后2 h～4 h，各给药组体温升高值均极显著低于阳性对照组(P<0.01)。在攻毒后2 h～3 h的蒲地蓝消炎颗粒高、中剂量组，体温升高值低于药物对照组，但差异不显著(P>0.05)。攻毒后4 h，蒲地蓝消炎颗粒和药物对照组的体温升高值相当。结果表明，蒲地蓝消炎颗粒和药物对照组对2,4-二硝基苯酚引起的大鼠体温升高具有良好的解热作用，蒲地蓝消炎颗粒的效果优于药物对照组。

2.4 对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

蒲地蓝消炎颗粒高、中、低剂量组和药物对照组均能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，与空白对照组相比差异显著(P<0.05)，其中，蒲地蓝消炎颗粒高剂量组效果最好，与阳性对照组比较差异极显著(P<0.01)(表4)。

3 讨论

体外抗菌试验显示，蒲地蓝消炎颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌有不同程度的抑制作用，其中，药物对G+菌(金黄色葡萄球菌)的抑菌作用最强，MIC为6.25 mg/mL，对铜绿假单胞菌抑菌作用较弱，MIC为100 mg/mL。这与庞载元等研究结果一致[4]。

外科感染性疾病其发病多责之为“热毒”、“火毒”,《医宗金鉴》指出,“痈疽原是火毒生”。急性感染期多以清热解毒、消肿散结为治疗原则。本研究结果表明，蒲地蓝消炎颗粒高、中、低剂量组和药物对照组小鼠死亡率显著低于阳性对照组(P<0.05)，其中蒲地蓝消炎颗粒高剂量组死亡率与阳性对照组相比较，差异极显著(P<0.01)，对金黄色葡萄球菌感染小鼠有一定的保护作用。

表2 蒲地蓝消炎颗粒对小鼠体内感染金黄色葡萄球菌的作用

注：与阳性对照组比较,*P<0.05，**P<0.01。

Notes:Compared with the positive control group,*P<0.05,**P<0.01.

表3 蒲地蓝消炎颗粒对大鼠体温的影响

注：与阳性对照组比较,*P<0.05，**P<0.01。

Notes:Compared with the positive control group,*P<0.05,**P<0.01.

表4 蒲地蓝消炎颗粒对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

注：与阳性对照组比较,*P<0.05，**P<0.01。

Notes:Compared with the positive control group,*P<0.05,**P<0.01.

2,4-二硝基苯酚是一种代谢刺激剂，注入大鼠体内可引起产热增加，造成机体发热[7]。本试验结果显示，攻毒后1 h，各给药组体温升高值均低于阳性对照组，表明中药的解热作用虽已显现，但差异不显著(P>0.05)；攻毒后2～4 h，蒲地蓝消炎颗粒高、中、低剂量组对2,4-二硝基苯酚引起的大鼠体温升高具有良好的解热作用，与阳性对照组比较差异极显著(P<0.01)，且蒲地蓝消炎颗粒的效果优于药物对照组，提示颗粒剂有较强的解热作用，其解热作用的具体环节，有待于进一步研究证实。

二甲苯作为一种化学致炎剂，因操作简便常被选择作为药理试验抗炎作用的造模致炎剂[10]。试验结果显示，与阳性对照组相比，蒲地蓝消炎颗粒高、中、低剂量组均能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀(P<0.05)，蒲地蓝消炎颗粒高剂量组效果最好，与阳性对照组比较差异极显著(P<0.01)。

蒲地蓝消炎颗粒是由蒲公英、黄芩、板蓝根、苦地丁 4 味中药组成，具有清热解毒、抗炎消肿的功效。现代研究证明，蒲公英具有良好的广谱抗菌、抗自由基、抗病毒、抗感染、抗肿瘤作用[12]。黄芩及其有效成分具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤和抗菌等多重药理作用，尤其显著的抗细菌抗真菌活性对于治疗日渐增多的耐药性细菌/真菌感染有重要意义[13]。板蓝根的不同提取部位均具有抗炎、镇痛活性[14]。苦地丁具有抗炎、镇静催眠等功效[15]，诸药相合，共凑抗菌消炎、解热镇痛之功。

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