三磷酸腺苷二钠氯化镁对宫内窘迫胎鼠肾保护作用的研究

张陈彦，都治香，祁美玉，张铭娜，赵敏英，张立新，安雪丽

(1. 河北省石家庄市第一医院，河北 石家庄 050011；2. 河北医科大学第一医院，河北 石家庄 050000)

三磷酸腺苷二钠氯化镁对心肌、肺脏、肝脏及肠等缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，但对胎儿宫内缺氧缺血是否具有保护作用报道少见。胎儿宫内缺氧缺血多是由子宫胎盘缺血而造成，故本研究通过制作孕鼠的子宫胎盘缺血模型,探讨了三磷酸腺苷二钠氯化镁是否对宫内窘迫胎鼠肾组织具有保护作用，从而为胎儿宫内窘迫的治疗提供新思路及途径。

1 实验资料

1.1动物动物 成年雌性SD大鼠15只，体质量240～270 g，购自河北医科大学动物实验室，动物合格证号：2016-04-009。

1.2实验方法 将SD孕鼠随机分为缺氧缺血再灌注组、假手术组和干预组，每组5只。于妊娠第19天以3.5%水合氯醛(1 mL/100 g)腹腔注射麻醉，缺氧缺血再灌注组和干预组通过无损伤动脉钳钳夹双侧子宫、卵巢动脉建立缺氧缺血宫内窘迫模型，缺氧20 min后拆除动脉夹以恢复血供，并逐层关腹。假手术组只开关腹，不钳夹子宫、卵巢动脉。干预组缺血前30 min给予三磷酸腺苷二钠氯化镁45 mg/kg腹腔注射，缺氧缺血再灌注组、假手术组于相同时间给予同等体积的0.9%氯化钠注射液腹腔注射。

1.3观测指标

1.3.1大体观察 于术后24 h以3.5%水合氯醛对各组孕鼠行腹腔麻醉，开腹并暴露双侧子宫，观察宫腔内的活胎数，剖出胎鼠并观察存活新生鼠皮肤颜色、呼吸、四肢运动等情况，计算胎鼠死亡率。取胎鼠，断头处死，取出完整胎肾脏，于4%多聚甲醛固定48 h，经脱水透明后石蜡包埋切片，备用。

1.3.2肾组织中丙二醛(MDA)含量测定 在每组胎鼠中随机抽取10只取肾脏，滤纸拭干，称质量后，加入4 ℃的HEPES冲液中，其体积是肾组织块质量的9倍，用玻璃匀浆器制成匀浆，匀浆液以3 000 r/min离心15 min，分装于-70 ℃冰箱中保存备用。按试剂盒说明书，利用分光光度计检测胎鼠肾组织中MDA含量。MDA试剂盒购于南京建成科技有限公司。

1.3.3肾组织学观察 固定后的肾组织分置于40 g/L多聚甲醛中4 ℃固定，常规脱水，石蜡包埋后切片，脱蜡，行HE染色，光学显微镜下观察肾组织形态学。

1.4统计学方法 所有数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析。计数资料比较行2检验；计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1各组胎鼠死亡率 假手术组胎鼠57只，均无死亡；缺氧缺血再灌注组胎鼠61只，死亡13只(23.31%)；干预组胎鼠60只，死亡9只(15.00%)。缺氧缺血再灌注组胎鼠死亡率明显高于假手术组(P<0.05) ，干预组胎鼠死亡率明显低于缺氧缺血再灌注组(P<0.05)。

2.2各组胎鼠肾组织中MDA含量 缺氧缺血再灌注组胎鼠肾组织中MDA含量为(7.37±0.92)nmol/mg，假手术组为(3.56±0.56)nmol/mg，干预组为(4.39±0.73)nmol/mg。缺氧缺血再灌注组胎鼠肾组织中MDA含量明显高于假手术组(P<0.05)，干预组胎鼠肾组织中MDA含量明显低于缺氧缺血再灌注组(P<0.05)。

2.3各组胎鼠肾组织病理学表现 假手术组肾组织结构基本正常，间质、微血管内皮细胞形态和结构亦大致正常。缺氧缺血再灌注组炎细胞浸润明显，肾小管上皮细胞明显水肿样变性，肾间质局部充血；干预组仅见部分肾小管上皮细胞轻度水肿样变性。见图1～3。

图1 假手术组肾组织病理学表现

3 讨 论

图2 缺氧缺血再灌注组肾组织病理学表现

图3 干预组肾组织病理学表现

妊娠期缺氧是影响胎儿发育和增加新生儿发病风险的常见原因[1]。而在妊娠期间，因代谢需要，组织氧气消耗增加，加剧组织中的氧化应激和脂质氧化[2]。缺氧是宫内创伤中一种常见形式，如高海拔地区妊娠、妊娠合并贫血、胎盘功能不全、脊髓压迫、先兆子痫、心脏疾病等均可导致宫内缺氧[3]。而缺氧缺血性损伤后磷酸肌酸或以三磷酸腺苷形式储存的能量在几秒钟内耗尽，随后发生的无氧酵解维持主要细胞的功能，但糖酵解不能维持组织的长久生存，代谢废物的积累和细胞内pH值降低，因为缺乏分子氧和NAD+供给不足，线粒体ATP生成受阻，导致三羧酸循环停止功能[4]。而外源性的三磷酸腺苷二钠氯化镁能够激活腺苷受体，减少心肌细胞能源消耗，可以直接对细胞内的Na+，K+-ATP酶以及Ca2+-ATP酶提供能量或能量底物维持细胞外和细胞内的离子平衡，减轻细胞内酸中毒和细胞肿胀[5]；还能够改善微循环，修复膜的电压，恢复正常膜的渗透性和改进细胞功能[6]；能够提高第二信使cAMP和IP3的基础水平，保护各种灌注损伤后细胞和器官的功能，改善器官血流量[7]，减弱线粒体的脂质过氧化损伤，达到清除氧自由基的功能[8]。本实验结果显示，缺氧缺血再灌注组胎鼠死亡率明显高于假手术组，干预组胎鼠死亡率明显低于缺氧缺血再灌注组，证实三磷酸腺苷二钠氯化镁可以降低宫内窘迫胎鼠死亡率；病理组织学结果显示，缺氧缺血再灌注组炎细胞浸润明显，肾小管上皮细胞明显水肿样变性，肾间质局部充血伴水肿；干预组仅见部分肾小管上皮细胞轻度水肿样变性，偶见管型，提示三磷酸腺苷二钠氯化镁对宫内窘迫胎鼠肾组织损伤有明显的保护作用。

动物实验研究证实，自由基参与宫内的急性缺氧缺血及再灌注损伤[9]。而组织中MDA水平是反映自由基损伤程度的重要指标[10]。本实验结果显示，缺氧缺血再灌注组胎鼠肾组织中MDA含量明显高于假手术组，干预组胎鼠肾组织中MDA含量明显低于缺氧缺血再灌注组。提示三磷酸腺苷二钠氯化镁能够减少MDA生成，从而减轻组织的脂质过氧化损伤，减轻宫内窘迫胎鼠肾损伤。

综上所述，宫内缺氧缺血会对胎鼠肾组织产生严重的氧化损伤，而三磷酸腺苷二钠氯化镁能够减轻宫内窘迫胎鼠肾组织的损伤，可增强缺氧缺血胎鼠肾组织清除自由基的能力，对缺氧缺血肾细胞有保护作用，为临床上应用三磷酸腺苷二钠氯化镁防治宫内缺血性肾损伤提供了实验依据。

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