高效液相色谱法检测果蔬汁中五种添加剂

杨子秋

(云南省大理州食品检验检测院，云南大理 671000)

近年来，在食品工业持续发展的影响下，食品质量安全问题也随之越来越显著，尤其是违规使用或者超量使用食品添加剂的问题频频出现。政府各级食品安全监管部门都引起了高度重视，这同时也使得各级检验机构的检验任务随之加重[1-2]。当前现有的国家检测标准主要采取的是不同的分析测试以及处理技术，通常只能够对1种或者2～3种进行测定，能够实现3种以上添加剂检测的方法相对较少，为了能够更好地提升检验效率，提升食品质量安全，构建多种食品添加剂同时检测的方法成为了关键[3]。本试验在果蔬汁检测中，采用高效液相色谱法进行5种添加剂的同时测定。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1试验材料 从市面上购入7种不同的果蔬汁，分别为胡萝卜汁、番茄汁、石榴汁、杏汁、黑加仑汁、红枣汁、香梨汁。

1.1.2试剂 甲醇(HPLC级)、稀氨水(1+1)(天津精细化工)；山梨酸标准储备液、苯甲酸标准储备液、糖精钠标准储备液、乙酰磺胺酸钾标准储备液(安赛蜜)、脱氢乙酸标准储备液(100%纯度)(中国计量科学研究院)；乙酸铵溶液(精密称量分析纯乙酸铵1.54g自行自备)；混标使用液(分别取5中标准储备液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，离子水稀释定容至10mL刻度，过滤后获得0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL标准系列工作液。)

1.1.3仪器与设备 华志电子天平，HZK-210；高效液相色谱仪，安捷伦1260配紫外检测器；离心机，贝克曼库尔特，Microfuge 20；超声仪，上海生析超声仪器有限公司，FS-750T；紫外可见光分光光度计，岛津，UV2450。

1.2 方法

1.2.1样品处理 从果蔬汁中精确称量10.00g样品，将其置于25mL比色管内(若含有二氧化碳，需通过微温搅拌法将其去除；若含有乙醇，则通过水浴加热法将其去除。)，以稀氨水对pH值进行调节，使其控制在7～8左右，超声条件下持续提取10min，去离子水定容至25mL充分摇匀；以4 500r/min速度进行10min理性处理，取上清液，经过水系0.45μm微孔滤膜进行过滤之后，行高效液相色谱测定。

1.2.2波长选择 因在紫外区域苯甲酸、安赛蜜、脱氢乙酸、糖精钠以及山梨酸均能够得到吸收，为此，采用紫外检测器[4]。经由紫外可见分光光度计在190～400nm范围内对各组标准溶液实施光谱扫描。结合各吸光度图谱分析，苯甲酸的最大吸收波长为216nm，安赛蜜的最大吸收波长为224.0nm，脱氢乙酸的最大吸收波长为235.5nm，糖精钠的最大吸收波长为220.0nm，山梨酸的最大吸收波长为226.5nm。结合各组情况，最终确定检测波长为230nm。

1.2.3流动相比例 在流动相时，主要采取乙酸铵(0.02mol/L)与甲醇溶液来选取相应的流速和比例。在甲醇—乙酸铵溶液体系中，随着甲醇从2%逐渐增加到10%，5种需要检测的添加剂保留时间表现为随之缩短，因脱氢乙酸与糖精钠的出峰时间非常相近，并且非常明显。经过综合分析，在流动相中甲醇为5%时，各种添加剂保留时间、出峰时间、分离效果以及峰型能够达到最佳，最终确定该方法的流动相比例为甲醇与乙酸铵溶液(0.02mol/L)分别为5∶95(V∶V)。

1.2.4流速选择 在确定的流动相体系下，随着流速从1.0mL/min逐渐下降到0.7mL/min，待测添加剂尽管能够实现分离且达到较好峰形，但在流速达到0.9mL/min时，柱效较好的250nm的Kromasil 100-5 C18柱能够实现较好的分离。通过综合分析，最终确定流速为1.0mL/min。

1.2.5色谱条件 色谱柱：Kromasil 100-5 C18(250mm×4.6mm，5μg)；流动相：甲醇：0.02mol/L乙酰胺溶液=5∶95(V∶V)；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；柱温：30℃；检测器：紫外检测器(DAD)，190～600nm；检测波长：230nm(附图)。

2 结果与分析

2.1 线性范围

将苯甲酸、安赛蜜、脱氢乙酸、糖精钠以及山梨酸稀混标使用液稀释成浓度分别为0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL混合标准工作液，分别进样20μL，通过色谱条件来进行测定，以峰面积来作为纵坐标，各组的浓度则设置为横坐标，进行标准曲线绘制。结果显示，苯甲酸在0.00～0.1mg/mL浓度范围内，表现为良好的线性关系，线性方程为Y=49 990.974 1X-240.078 69，r=0.97；安赛蜜在0.00～0.1mg/mL浓度范围内，表现为良好的线性关系，线性方程为Y=44 614.713 3X-79.077 259，r=0.98；脱氢乙酸在0.00～0.1mg/mL浓度范围内，表现为良好的线性关系，线性方程为Y=70 280.006 3X+922.968 52，r=0.96；糖精钠在0.00～0.1mg/mL浓度范围内，表现为良好的线性关系，线性方程为Y=31 900.711 8X-55.758 452，r=0.98；山梨酸在0.00～0.1mg/mL浓度范围内，表现为良好的线性关系，线性方程为Y=85 309.931 6X-190.754 64，r=0.98。

2.2 精密度和重现性试验

进行5份空白样品平行试样，分别向其中加入等量混合标准工作溶液，使得各组溶液浓度能够达到0.06mg/mL，根据试验方法来对其实施处理后，行精密度试验，同时进行标准偏差计算。在对0.06mg/mL空白样品，以峰面积A来对取得的测定值进行表示，彼此接近的程度与实际分析结果的重复性要求非常接近，各组相对标准偏差(RSD%)(表1)。

表1 精密度

2.3 加标回收试验

对购入的7种不同的果蔬汁样品进行加标测定回收率，分别向果蔬汁中加入5种0.04mol/L混合标准工作液，平均回收率见表2。

表2 回收率

3 结论

高效液相色谱法对果蔬汁中苯甲酸、安赛蜜、脱氢乙酸、糖精钠以及山梨酸添加剂进行测定，结果发现，在0.00～0.1mg/mL浓度范围内，均表现为良好的线性关系，加标回收率为98%～99%，RSD为1.01%～1.51%。由此可知，高效液相色谱法是一种操作简单、简便易行，具有一定准确性和灵敏度较高的检测方法，通过采用该方法可较好地实现对果蔬汁产品质量的快速检验。◇

[1]武中庸，赫欣睿，叶永丽，等.高效液相色谱法在食品添加剂检测中的应用[J].西北民族大学学报(自然科学版)，2016，37(2)：65-69.

[2]高文惠，庞军，高林，等.高效液相色谱法同时测定食品中多种添加剂[J].中国食品学报，2014，14(12)：148-153.

[3]陈沛金，张毅，肖锋，等.高效液相色谱法测定糖果、蜜饯和饮料中19种食品添加剂[J].食品安全质量检测学报，2014，5(11)：3487-3494.

[4]林海丹，邹志飞，秦燕，等.高效液相色谱法同时测定食品中18种食品添加剂[J].食品科学，2013，34(8)：228-231.

[5]伍雅婷，郭怡阳，黄常刚，等.HPLC同步测定多种合成色素含量检测结果的不确定度评定[J].中国食物与营养，2016，22(12)：22-26.

[6]王彦蓉，李 强，刘 鹏，等.果蔬汁生产过程主要危害物质控制技术研究进展[J].中国食物与营养，2016，22(11)：13-17.