表没食子儿茶素没食子酸酯对慢性间歇性缺氧大鼠心肌cTnT及Ca2+-ATPase的影响

曾闵，易世江

（1.湖南省儿童医院 心血管内科，湖南 长沙 410007；2.广西壮族自治区桂林医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科，广西 桂林 541001）

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS）为临床常见呼吸道疾患，长期间歇性低氧可导致机体靶器官慢性损伤及并发症，如高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）、心律失常及心功能衰竭等。有研究证明中重度OSAHS患者茶多酚血清中的肌钙蛋白水平较正常健康组明显增高，并与缺氧程度有关[1]。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）是茶多酚中主要的活性成分[2]，具有清除自由基、抗脂质过氧化以及保护心脑血管等作用。本研究以EGCG干预来研究其对慢性间歇性缺氧大鼠心肌cTnT及Ca2+-ATPase影响。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

常压间歇缺氧箱（桂林医学院附属医院实验室）、超低温高速离心机（产地：美国；型号：Allegra 64R）和紫外分光光度计（产地：上海；型号：ZF-7）；EGCG（Sigma），cTnT和 Ca2+-ATPase试剂盒均购自南京建成生物研究所。

1.2 实验方法

1.2.1 慢性间歇性缺氧大鼠模型的制作 参照文献[3]建立慢性间歇性缺氧模型。

1.2.2 实验分组 取桂林医学院附属医院实验中心5周龄大鼠（Sprague-Dawley, SD）24只，体重110～120 g，按随机数字表法将其分为4组，具体为：常温常压生理盐水组（A组）、间歇性缺氧生理盐水组（B组）、间歇性缺氧50 mg/（kg·d）EGCG组（C组）和间歇性缺氧100 mg/（kg·d）EGCG组（D组）。

1.2.3 实验方法 ①A组6只，常温常氧下饲养，每日予以3 ml生理盐水灌胃饲养8周。②慢性间歇性缺氧组SD大鼠共18只，分为B、C和D组，每组各6只；每天9:00～17:00共8个小时为慢性间歇性缺氧时间；B组给予SD大鼠3 ml生理盐水，灌胃；C组给予SD大鼠EGCG 50 mg/（kg·d），稀释于3 ml生理盐水，灌胃；D组给予以SD大鼠EGCG 100 mg/（kg·d），稀释于3 ml生理盐水，灌胃。所有研究对象均饲养8周后常氧下拉颈处 死。

1.2.3.1 大鼠心脏指数的检测 用10%的水合氯醛（3 ml/kg）腹腔注射麻醉SD大鼠，分离出腹主动脉取血，取出心脏称重。

1.2.3.2 SD大鼠心肌生化指标的测定 分离出腹主动脉血5 ml，置于普通血清管中，室温下静置4 h后，3 000转/min，离心15 min，吸取上清液（血清）负80℃冰箱保存，上机检测心肌cTnT及Ca2+-ATPase。

1.3 统计学方法

应用SPSS 13.0软件对数据进行统计学处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组计量资料采用单因素方差分析，组间两两数据比较采用SNK-q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组SD大鼠心脏重量情况比较

A、B、C和D组心脏重量分别为（1.07±0.05） g、（1.41±0.13）g、（1.32±0.14）g和（1.26±0.11） g；B、C和D组与A组比较心脏重量均明显增加（P＜0.05）；C、D组与B组比较心脏质量均明显降低（P＜0.01），以D组最明显。

2.2 4组SD大鼠心肌组织cTnT及Ca2+-ATPase情况比较

C、D组与A组cTnT含量、Ca2+-ATPase活性比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；C、D组cTnT含量均明显低于B组（P＜0.01），其中以D组最为明显，表现为一定的剂量依赖性；C、D组Ca2+-ATPase活性均明显高于B组（P＜0.05），D组Ca2+-ATPase活性增高尤为明显。见表1。

表1 4组SD大鼠心肌组织cTnT及Ca2+-ATPase情况比较 （±s, n =6）

表1 4组SD大鼠心肌组织cTnT及Ca2+-ATPase情况比较 （±s, n =6）

注：1）与B组比较，P ＜0.01；2）与B组比较，P ＜0.05。

项目 A组 B组 C组 D组 F值 P值CTnT/(pg/L) 3.34±0.54 5.70±0.51 3.97±0.591） 3.47±0.411） 26.040 0.000 Ca2+-ATPase/(μmol/mg.h) 0.21±0.02 0.08±0.01 0.25±0.022） 0.29±0.032） 86.750 0.000

3 讨论

随着生活水平的提高，阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的发病率呈升高趋势，严重危害人们的身体健康,尤其是心、脑、肾、肺重要器官。有研究发现OSAHS患者早期即存在心肌损伤，损伤水平与病情程度具有相关性[4]。

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是绿茶提取物茶多酚的主要成分，研究发现适量饮茶能降低心血管事件的发生率，对心肌具有明确的保护作用[5]；另有研究发现，儿茶素能通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统的血管紧张素II、醛固酮和心钠肽的浓度来降低大鼠全心和左心重量指数，从而改善心衰大鼠的心功能[6]。本研究结果显示，EGCG能明显降低心脏质量，其中以D组尤为明显，呈现剂量效应，说明EGCG亦可能通过上述机制抑制心肌的肥厚，阻止心脏重塑。

cTnT是心肌损伤的一个敏感性指标，有研究证实，慢性间歇性缺氧条件下，血cTnT含量会升高，其机制可能是：心肌的间歇性缺氧导致心肌细胞膜通透性增加，使胞浆中CTnT漏出；缺氧严重时可导致心肌细胞的坏死心肌收缩蛋白的破坏，其中CTnT会释放出来；动脉压增大以及心肌收缩障碍的情况下导致心室扩大、心肌细胞被机械性牵张、心肌细胞的破坏以及CTnT漏出[7-8]。本研究结果显示，与常温常氧生理盐水组（A组）相比，EGCG组（C、D组）cTnT含量无明显差异；与间歇性慢性缺氧生理盐水组（B组）相比，EGCG组（C、D组）cTnT含量明显降低，其中以EGCG 100 mg/kg组（D组）最为明显，表现为一定的剂量依赖性。

正常生理条件下，心肌细胞外液钙离子浓度是细胞内钙离子浓度的1 000倍，这种浓度差主要依靠Ca2+-ATPase酶。当心肌缺氧或损伤时使心肌细胞内Ca2+-ATPase的活性降低，引起细胞内钙聚集，导致钙超载，使细胞膜的通透性增加，血液中cTnT含量升高[8]。有研究发现，芪丹通脉片通过增加Ca2+-ATPase活性来抑制心肌细胞线粒体中钙超载及保护心肌细胞超微结构，起到心肌的保护作用[9]。本研究结果显示，EGCG组（C、D组）Ca2+-ATPase酶活性明显增高，提示EGCG可能提高Ca2+-ATPase活性，降低胞内钙超载引发的细胞损伤，从而保护心肌组织。

综上所述，在慢性间歇性缺氧大鼠模型中，EGCG能通过提高心肌细胞Ca2+-ATPase活性，减少心肌细胞的破坏，对心肌起保护作用；该实验研究为EGCG在鼾症患者的应用提供理论依据。

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