多发性骨髓瘤患者血清miR-193b表达变化及临床意义

苏建友，赵虬旻，申娴娟，鞠少卿

(南通大学附属医院，江苏南通226001)

·临床研究·

多发性骨髓瘤患者血清miR-193b表达变化及临床意义

苏建友，赵虬旻，申娴娟，鞠少卿

(南通大学附属医院，江苏南通226001)

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清miR-193b表达变化及临床意义。方法选取MM患者42例(MM组)，其中IgG型16例、IgA型9例、其他17例，体检健康者35例(对照组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测血清miR-193b相对表达量；采用Spearman相关分析法分析MM患者血清miR-193b表达与β2微球蛋白(β2M)、轻链κ、轻链λ和乳酸脱氢酶(LDH)水平的关系；采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各指标单独及联合检测对MM的诊断效能。结果MM组和对照组血清miR-193b相对表达量分别为6.904±2.782、4.454±2.553，组间比较P<0.01。IgG型MM患者血清miR-193b相对表达量为8.001±2.479，IgA型为5.268±1.849，其他为6.396±3.132；IgG型高于IgA型(P<0.01)，其余各型比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。MM患者血清miR-193b表达与血清β2M、轻链κ、轻链λ和LDH水平均无相关性(P均>0.05)。血清miR-193b诊断MM的敏感性、准确性均高于轻链κ、轻链λ、β2M和LDH，血清miR-193b联合轻链κ、轻链λ、β2M或LDH诊断MM的敏感性、准确性均高于各单项指标。结论MM患者血清miR-193b表达上调;检测血清miR-193b表达变化可用于MM的辅助诊断及临床分型。

多发性骨髓瘤；微小RNA-193b；实时荧光定量PCR；受试者工作特征曲线

多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓中浆细胞克隆性增殖并分泌大量单克隆免疫球蛋白为特征的恶性血液疾病[1]，其发病率约占恶性血液系统肿瘤的13%[2]，患者5年生存率低[3]。MicroRNA(miRNA)是一类长度约为22 nt的非编码小RNA，通过抑制或降解特定靶基因mRNA，在转录后水平调控基因表达，在肿瘤中常发挥癌基因或抑癌基因作用，参与肿瘤的发生、发展及耐药等行为[4,5]；其可作为新的生物标志物，用于疾病的诊断及患者预后判断[6～9]。研究发现，MM发生、发展的不同阶段均伴随miRNA表达变化[10]；miRNA亦可通过调控抑癌基因或促凋亡基因表达而影响MM的病理进程[11]。但目前关于miR-193b与MM发生、发展的关系尚未明确。为此我们进行本研究，现将研究过程及结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年6月～2016年12月南通大学附属医院收治的MM初诊患者42例(MM组)，均符合《血液病诊断及疗效标准》第2版中的诊断标准[12]。患者男22例、女20例，年龄(60±11)岁，IgG型16例、IgA型9例、其他17例，血清轻链κ为(1 209.0±728.1)mg/mL、轻链λ为(1 290.0±876.1)mg/mL、β2微球蛋白(β2M)为(2.4±1.4)μg/mL、乳酸脱氢酶(LDH)为(179.0±84.3)U/L。选取同期体检健康者35例(对照组)，男20例、女15例，年龄(58±9)岁。两组性别、年龄具有可比性。

1.2 血清miR-193b水平检测 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法。采用带有分离胶的真空采集管收集两组血液标本，1 000 r/min离心10 min，将上层血清分装于无酶离心管中，置于-80 ℃冰箱保存备用。采用RNA提取试剂盒(美国Life公司)提取血清总RNA，紫外分光光度计测量浓度和纯度合格后，保存于-80 ℃冰箱。采用逆转录试剂盒将RNA逆转录成互补DNA。收集逆转录产物，采用SYBR GreenⅠ混合液(德国罗氏公司)和7500实时定量PCR扩增仪(美国ABI公司)进行荧光定量PCR检测。miR-193b引物序列：正向：5′-ACACTCCAGCTGGGAACTGGCCCTCAAAGT-3′； 反向：5′-TGGTGTC-GTGGAGTCG-3′。U6(内参)引物序列：正向：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向： 5′-AACGCTTCAC-GAATTTGCGT-3′。反应体系：SYBR Green Ⅰ 混合液 10 μL，互补DNA 6 μL，正反向引物各1 μL，无RNA酶水2 μL。反应条件：95 ℃ 10 min、95 ℃ 15 s、58 ℃ 31 s，共40个循环。每个样本做3个复孔，结果取其均值。以2-ΔΔCt法计算miR-193b相对表达量。

2 结果

2.1 两组血清miR-193b表达比较 MM组和对照组血清miR-193b相对表达量分别为6.904±2.782、4.454±2.553，组间比较P<0.01。IgG型MM患者血清miR-193b相对表达量为8.001±2.479，IgA型为5.268±1.849，其他为6.396±3.132；IgG型高于IgA型(P<0.01)，其余各型比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。

2.2 MM患者血清miR-193b表达与β2M、轻链κ、轻链λ和LDH水平的关系 相关性分析结果显示，MM患者血清miR-193b表达与血清β2M、轻链κ、轻链λ和LDH水平均不相关(P均>0.05)。

2.3 各指标单独及联合检测对MM的诊断效能 ROC曲线结果显示，血清miR-193b诊断MM的敏感性、准确性均高于轻链κ、轻链λ、β2M和LDH，血清miR-193b联合轻链κ、轻链λ、β2M或LDH诊断MM的敏感性、准确性均高于各单项指标，但血清miR-193b单项或联合诊断的特异性低于轻链κ、轻链λ、β2M或LDH。

表1 各指标单独及联合检测对MM的诊断效能(%)

3 讨论

研究发现，miRNA除了通过改变自身表达水平参与MM的发生、发展外，还可通过调控抑癌基因或促凋亡基因表达影响MM的病理进程[15]。本课题组前期通过基因芯片技术对MM患者和健康对照者骨髓miRNA表达水平进行高通量分析。结果显示，相对于健康对照者，MM患者骨髓中有54种miRNA高表达，28种miRNA低表达。根据miRNA表达差异的倍数和P<0.05原则，选取了miR-193b作为本研究目标因子。miR-193b编码基因位于人16p13.12，是一种非编码的小分子，与肿瘤细胞增殖、迁移、血管形成及患者预后等多种生物学行为相关[14]。研究表明，miR-17-92簇的表达和调节与Myc基因相关，沉默Myc基因可诱导MM细胞死亡、抑制细胞生长、增加前凋亡蛋白Bim表达，且miR-17-92簇表达改变与MM患者预后相关[13]。但由于其靶基因众多，在不同类型肿瘤中miR-193b的确切生物学作用及调控机制还有待进一步研究。

本研究我们采用qRT-PCR法检测血清miR-193b，结果显示，MM患者血清miR-193b相对表达量明显高于健康对照者，提示miR-193b在MM中可能发挥癌基因作用，可能用于MM的辅助诊断和疾病监测。IgG型与IgA型MM患者血清miR-193b相对表达量比较差异有统计学意义，提示检测miR-193b水平可在一定程度上协助判断IgG、IgA分型。血清轻链λ、轻链κ、β2M水平与MM患者肿瘤负荷密切相关，血清LDH水平反映肿瘤细胞增殖活性，上述指标对肿瘤疗效及患者预后判断均具有重要价值。但本研究MM患者血清miR-193b相对表达量与血清LDH、β2M、轻链λ和轻链κ水平均不相关，可能与标本量较小，未将MM患者按病情分级有关。

本研究ROC曲线分析发现，血清miR-193b诊断MM的敏感性、准确性均高于血清轻链κ、轻链λ、β2M和LDH；血清miR-193b联合轻链κ、轻链λ、β2M或LDH诊断MM的敏感性、准确性均高于各单项指标检测，其中miR-193b和轻链λ联合检测的诊断敏感性和准确性最高。提示血清miR-193b可能在MM的辅助诊断方面发挥一定作用，与轻链λ等指标进行联合时其诊断敏感性、准确性均提高。但血清miR-193b单项或联合诊断的特异性低于轻链κ、轻链λ、β2M或LDH，后期仍需扩大样本量来进一步验证。

综上所述，MM患者血清miR-193b表达上调，检测血清miR-193b表达变化可用于MM的辅助诊断及临床分型。

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国家自然科学基金面上项目(81672099)；江苏省重点研发专项(BE2015654)；江苏省“科教强卫”工程青年医学人才项目(QNRC2016695)；南通市民生科技创新和示范推广计划项目(MS120170008-6)。

鞠少卿(E-mail: jsq814@hotmail.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.48.015

R733.3

B

1002-266X(2017)48-0046-03

2017-07-19)