肺癌组织标本库的创建与管理

刘得水，岳丽玲，陈德庆，李祖彬，鲍红光，温宪春，刘吉成

1.齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔 161006；2.齐齐哈尔市第一医院，黑龙江齐齐哈尔 161005；3.齐齐哈尔医学院附属第三医院，黑龙江齐齐哈尔 161000；4.齐齐哈尔医学院附属第二医院，黑龙江齐齐哈尔 161000

肺癌组织标本库的创建与管理

刘得水1，岳丽玲1，陈德庆2，李祖彬3，鲍红光4，温宪春1，刘吉成1

1.齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔 161006；2.齐齐哈尔市第一医院，黑龙江齐齐哈尔 161005；3.齐齐哈尔医学院附属第三医院，黑龙江齐齐哈尔 161000；4.齐齐哈尔医学院附属第二医院，黑龙江齐齐哈尔 161000

目的探索肺癌组织标本库的创建和管理措施。方法收集肺癌组织肿瘤、癌旁和切缘远端非肿瘤组织和血液标本，采用统一的采集和标本管理办法，建立肺癌标本库。结果截至2017年1月，该组织标本库共收集肺癌组织标本307例，男性209例，女性98例，右侧171例，左侧136例，其中腺癌119例，鳞癌103例，小细胞癌77例，腺鳞癌8例，其中全套标本219例，经科学管理经6个月存放后，全血和血清存放符合率较高，与存放前差异无统计学意义，血浆和淋巴细胞存6个月后存放差异有统计学意义。结论肺癌组织标本库的创建及系统化管理有助于为肺癌的基础研究和临床研究提供保障。

肺癌；标本库；创建；管理

肺癌是目前危害我国人民生命和健康的最大威胁的恶性肿瘤，肺癌已经成为我国排名首位的恶性肿瘤，其死亡率超过恶性肿瘤死亡率的20%，每年新增病例超过50万，预计未来我国将成为肺癌第一大国[1]。因此，目前大量的肺癌研究集中于临床病例分析、血液学分析和组织病理学分析，不合理的采集和保存管理措施都极大地影响了实验结果[2]。因此，建立合理的数据库和组织标本库的建立，有利于整合各方面资源，能够为肺癌的研究提供及时、快速、准确和高效的组织标本[3]。该研究针对肺癌组织标本库和数据库进行建立，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2013年1月—2016年6月就诊于齐齐医学院三所附属医院以及齐齐哈尔市第一医院的肺癌病例资料。患者的纳入标准为：①经病理学诊断，确诊为肺癌的患者；②经细胞学检测，确诊为肺癌的患者；③所有患者均符合知情同意原则，并签署知情同意书。排除标准：①发生多发肿瘤；②肿瘤发病灶不能明确是来源于肺肿瘤；③其他器官肿瘤转移至肺部者。该研究经齐齐哈尔医学院伦理委员会批准，同意进行该次研究。

1.2 主要设备

电子天平；普通台式低速离心机，-80℃冰箱，-150℃超低温冰箱，恒温水浴箱，低温高速离心机，台式电脑；数码相机等办公器材与设备。

1.3 标本的收集

1.3.1 组织标本的收集 组织标本选取者均经培训合格的临床医生完成，肿瘤组织离体后，按照肿瘤、癌旁和切缘远端非肿瘤组织3部分取材，每部分取材至少1块组织，并且组织大小直径不小于0.5 cm，在组织离体的30 min内，经液氮处理30 min后，切取小块用石蜡包埋，分类存放于-80℃超低温冰箱中储存。

1.3.2 血液标本的收集 采血前先核对患者信息，记录临床数据库，选取肘窝采血部位进行常规采血。取不添加抗凝剂真空采血管收集静脉血和添加EDTA抗凝剂真空采血管收集静脉血10 mL，每份5 mL。血液标本依据患者个人信息，二维码打印机标记，存放于-80℃超低温冰箱储存。

1.4 血清及血细胞标本的保存

1.4.1血清标本的保存 收集不加抗凝剂的血液标本5 mL，室温条件下放置3 h左右，采用普通台式低速离心机离心10 min（2 000 r/min），所得血清标本分为6份保存于200 uL冻存管中，打印二维码放置于-80℃超低温冰箱储存。

1.4.2 血浆、淋巴细胞的保存 收集经EDTA抗凝剂真空采血管中的血液标本5 mL，采用普通台式低速离心机离心10 min（2 000 r/min），所得血浆标本分为6份保存于200 uL冻存管中，打印二维码放置于-80℃超低温冰箱储存。将抗凝剂血浆后剩余血液采用0.01 g/L的PBS溶液稀释2倍后混匀，取等量淋巴细胞分离液平均分配至15 mL离心管中，将稀释血样轻放置分离液上离心20 min（1 500 r/min），收集第二层细胞加入 0.01 g/L的PBS溶液5 mL的离心管中离心10 min（1 500 r/min），去上清液，再加0.01 g/L的PBS冲洗数次后离心10 min（1 500 r/min）后去上清液，最终沉淀物为淋巴细胞。取DMSO、1 640培养液、小牛血清比例为1:4:5配置成冻存液，将淋巴细胞放置于冻存液（3 mL）中，分4份分装，每支0.8 mL[4]。经二维码打印粘贴，放入-4℃0.5 h，再放入-20℃2 h，最后放入-80℃低温保存。

1.5 组织标本与血液标本的质量控制与管理

1.5.1 组织标本的质量控制与管理 所有标本均经过病例技术人员检查，符合肿瘤组织、癌旁组织和切缘远端非肿瘤组织的组织要求，离体时间控制在30 min之内，转运期间符合病理转运要求，转运过程中单独存放3种组织，避免相互污染[5]。

1.5.2 血液标本的质量控制与管理 同一患者血液标本放入同一EP管盒中依据二维码记录。将两份血液标本分别放置于两台-80℃超低温冰箱储存，避免因冰箱故障导致血液标本的损坏。全血标本进行肉眼观察其颜色和外露情况。血清标本入库6个月采用电化学发光法对肿瘤标记物CEA进行检测，观察其变化情况，确保血清标本的存储质量，淋巴细胞在入库时进行染色，计算存活率，在入库后6个月再次染色，计算存活率，检测淋巴细胞保存情况。

2 结果

2.1 组织标本采集情况

截至2017年1月，该组织标本库共收集肺癌组织标本307例，男性209例，女性98例，右侧171例，左侧136例，其中腺癌119例，鳞癌103例，小细胞癌77例，腺鳞癌8例，其中全套标本219例（含所有组织标本和血液标本），占89.58%。详见表1

表1肺癌组织标本库构成

2.2 血液标本采集情况

经6个月存放后，全血和血清存放符合率较高，与存放前差异无统计学意义，血浆和淋巴细胞存放6个月后差异有统计学意义，但经CEA检测，入库前CEA（13.04±0.143），和 6 个月后 CEA（13.56±0.240）差异无统计学意义（t=0.995，P=0.573），血清标本在存放6个月后质量差异无统计学意义。在淋巴细胞存活率方面，6个月后平均存活率均大约90%，符合细胞存放生存标准。

表2肺癌数据库血液标本有效6个月后合格情况

3 讨论

随着临床医学、病理学和分子生物学的发展，针对肿瘤组织分析和血液样本的分析已经成为肿瘤基础研究、临床诊断和疗效评估的重点领域。肿瘤标本库的建立能够对所有研究提供充足的标本资源和信息提供[6]。以往数据库的建立，优于缺乏系统化管理，仅仅低温保存，没有对血细胞及肿瘤组织标本成分进行检测，缺乏了科研的前瞻性，也在一定程度上造成了科研的损失[7]。

该次研究，针对肺癌组织标本进行采集，严格的按照采集标准进行操作，规范了信息的全面性，基础信息采集做能够帮助肿瘤临床工作的流行病学采集，信息全面准确，标本采集经过前期质量控制，保障了3个部分组织标本的质量。建立了规范的血液标本库，在采血，保存和使用过程进行规范化管理，严格遵循了科学的管理模式。该次研究显示，经6个月存放后，全血和血清存放符合率较高，保障了血液的存放质量，这也得益于严格控制标本离体时间和严格的管理措施。

综上所述，肺癌组织标本库已经初步建立，通过全面的，科学化和系统化的管理，保障了组织和血液标本的质量，为肺癌的科学研究提供了物质保障。

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R73

A

1672-5654（2017）08（b）-0105-02

2017-05-08）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.23.105

国家自然科学基金项目（No.81202084）；齐齐哈尔市科学技术项目（No.SFGG-201201）。

刘得水（1981-），男，辽宁抚顺人，硕士，助理实验师，研究方向：肿瘤基础研究。

刘吉成（1958-），男，黑龙江勃利人，博士，教授，研究方向：肿瘤发病机制研究，E-mail：qqybliu@126.com。