人参皂苷Rg3聚合物胶束的工艺优化研究

荆 鸣 朱春璐 袁子民 李学涛 林彦馨 马雨晨 孔 亮

辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600

人参皂苷Rg3聚合物胶束的工艺优化研究

荆 鸣 朱春璐 袁子民*李学涛 林彦馨 马雨晨 孔 亮

辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600

目的：对人参皂苷Rg3聚合物胶束的制备工艺进行优化。方法: 采用薄膜水化法，以DSPE-PEG2000为胶束的载体材料，通过正交试验及包封率的测定，对人参皂苷Rg3与DSPE-PEG2000的质量比、水化时间、水化温度及水化体积的四个因素进行考察优化。结果：药物与载体的比为1∶10，水化体积为5mL，水化温度50℃，水化时间为20min，平均包封率为77.9%。结论：该工艺重复性良好，可用于人参皂苷Rg3聚合物胶束的制备。

人参皂苷Rg3；薄膜水化法；聚合物胶束

人参含有40余种人参皂苷类成分，其中人参皂苷Rg3(20(R)-人参皂苷Rg3)是人参中具有抗肿瘤作用的活性成分之一[1]，对肺癌、胃癌、肝癌、脑胶质瘤等肿瘤细胞具有较好的抑制效果[2]，其对大鼠C6胶质瘤肿瘤干细胞的增殖有显著影响，可能是人参皂苷Rg3 抗胶质瘤的作用机理之一[3]。目前，人参皂苷Rg3已开发成参一胶囊，但Rg3油水分配数较大，口服生物利用度较低，为提高其体内生物利用度及靶向性，目前采用固体分散技术、脂质体制备技术的报道较多[4-6]，笔者采用聚合物胶束制备技术，以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)为胶束载体材料，将其制成人参皂苷Rg3聚合物胶束，旨在提高其体内生物利用度及抗脑胶质瘤作用的靶向性，为人参皂苷Rg3制剂的深入研究与开发奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；Agilent 1100 高效液相色谱仪；HC-2062 高速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。

1.2 材料 20(R)-人参皂苷Rg3原料药(自制，含量>90%)；20(R)-人参皂苷Rg3对照品(批号:YAO417YA14，上海源叶生物科技有限公司，含量>98%)；DSPE-PEG2000(批号：20150922，上海艾韦特医药科技有限公司)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 人参皂苷Rg3原料药聚合物胶束的制备 分别取人参皂苷Rg3原料药及二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)，精密称定，共置烧瓶中，加甲醇20 mL使其溶解，摇匀，40℃旋蒸除去甲醇，于烧瓶内形成一层薄膜，加入适量的pH值为7.4的PBS缓冲液，在一定温度的水浴中水化一定时间，冷却至室温，经0.2μm的聚碳酸酯膜滤过，即得人参皂苷Rg3原料药聚合物胶束[7-8]。同法制备不加人参皂苷Rg3原料药的空白聚合物胶束溶液。

2.2 包封率的测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil TMC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水(50∶50)；流速1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：203nm。

2.2.2 对照品溶液的制备 取人参皂苷Rg3对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.75mg/mL的对照品溶液，即得。

2.2.3 线性关系考察 分别精密量取“2.2.2”项下对照品溶液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5、2.5mL于10mL量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=3.3802X+0.9931，r=0.9996。结果人参皂苷Rg3浓度在7.5～187.5μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.2.4 供试品溶液的制备及包封率的测定 精密量取人参皂苷Rg3原料药聚合物胶束0.5mL置10mL量瓶中，加入适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，测定胶束中总的药物量(W1)，并同法制备空白胶束对照液。另精密量取人参皂苷Rg3原料药聚合物胶束2.0mL于5mL离心管中，离心(5000r/min)5min，精密量取上清液0.5mL置10mL量瓶中，按上述载药胶束供试品溶液的制备方法，同法测定离心后胶束中包封的药物量(W2)，计算包封率(EE):EE%=W2/W1×100%[8]。

2.2.5 空白干扰试验 精密吸取对照品溶液、载药胶束供试品溶液、空白胶束对照液各10 μL，按“2.2.1”项下的色谱条件测定，结果空白胶束对本品含量测定无干扰。色图谱见图1。

2.2.6 精密度试验 分别精密吸取同一供试品溶液10μL，连续进样6次，记录峰面积，计算RSD为2.02%，表明精密度良好。

2.2.7 重复性试验 取同一载药胶束样品，按“2.2.4”项下的载药胶束供试品溶液的制备方法，分别制备6份，依法测定含量。结果胶束中人参皂苷Rg3的平均含量为0.934mg/mL，RSD为2.36%，表明重复性良好。

2.2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10 h进样10μL，记录峰面积，结果RSD为1.88%，表明人参皂苷Rg3在10 h内稳定。

2.2.9 回收率试验 分别精密量取6份已知含量的载药胶束0.5mL(0.934mg·mL-1)，分别置10mL容量瓶中，各精密加入0.6mL人参皂苷Rg3对照品溶液(0.75mg/mL)，其余按胶束供试品溶液制备方法及上述色谱条件依法测定，计算回收率，结果平均加样回收率为98.2%，RSD为1.36%，符合规定。

2.3 载药聚合物胶束处方及工艺优化 经单因素考察，本实验以包封率为指标，选取人参皂苷Rg3与DSPE-PEG2000的质量比(A)、水化体积(B)、水化温度(C)、水化时间(D)作为考察因素，因素水平见表1；实验中人参皂苷Rg3量为5 mg，正交试验设计及结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交试验设计及结果 (n=3)

表3 方差分析表(F0.05(2,2)=19.00)

由表2、表3可知，各因素的影响顺序为C>D>B>A，其中C、D因素对工艺的影响具有显著性，确定的最佳工艺条件为A3B2C2D1，即人参皂苷Rg3与DSPE-PEG2000的质量比为1∶10，水化体积为5mL，水化温度为50℃，水化时间为20min。

2.4 制备工艺的验证 按上述的最佳工艺条件，精密称取人参皂苷Rg3原料药 5mg，制备三批载药聚合物胶束，并计算包封率，结果三批载药胶束的包封率分别为76.4%、78%、79.3%，平均包封率为77.9%，表明优化的处方及制备工艺合理、可行、重复性好，且包封率在75%以上，因此，本实验所确定的薄膜水化法的工艺条件，可用于人参皂苷Rg3聚合物胶束的制备。

3 讨论

3.1 介质pH值的选择 实验中曾使用pH值为6.8PBS缓冲液作为水化介质，该介质与pH值为7.4PBS缓冲液介质相比，对包封率影响不大，但含量测定时在203nm波长下基线波动较大，色谱图峰形不佳，故选择pH值为7.4PBS缓冲液作为本实验的水化介质。

3.2 包封率测定方法的选择 由于人参皂苷Rg3在pH值为7.4PBS缓冲液中溶解度较低，因此，本实验采用高速离心法，将未包封的药物离心除去，测定包封率，方法快速、重复性好。

[1]薛丽莉，周海彤，李龙华，等.酶转化人参皂苷中间产品Rg3皂苷的分析[J].大连轻工业学报,2007,26(1):1-4.

[2]谭世强，许永华，王丽芝.人参皂苷Rg3抗肿瘤作用的研究新进展[J].人参研究,2016(3):46-48.

[3]廖丹琼，张建平，付银根，等.人参皂苷Rg3对大鼠脑胶质瘤肿瘤干细胞增殖的影响[J].河南职工医学院学报，2011,23(2):131-133.

[4]潘翠珊，王风华，翁艺芳，等.人参皂苷Rg3脂质体的处方优化及制备工艺研究[J].中药新药与临床药理,2015,26(1):113-117.

[5]叶菲菲，代旸，徐缓，等.人参皂苷Rg3脂质体的制备、表征及对黑色素瘤细胞的生长抑制作用[J].中国新药杂志,2014,23(21):2542-2545.

[6]吴超，赵宗哲，鲁明，等.人参皂苷Rg3 固体分散体渗透泵片的研制及体外释放度考察[J].中草药,2014,45(11):1561-1565.

[7]袁子民，高春华，王静，等.β-榄香烯聚合物胶束的制备工艺研究[J].中国现代应用药学，2016，33(10)：1280-1282.

[8]马文转，王金铃，屠鹏飞.黄芩苷纳米胶束的制备、表征及其对MCF-7 细胞抑制作用的研究[J].中草药,2015,46(4):507-512.

Preparation of Gensenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles

JING Ming ZHU Chunlu YUAN Zimin*LI Xuetao LIN Yanxin MA Yuchen KONG liang

Liaoning University of TCM,Dalian 116600,China

Objective To optimize the preparation technology of Gensenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles. Methods With poly(ethylene glycol-2000)-grafted distearoy lphosphosphatidylethanolamine(DSPE-PEG2000) as the carrier materials, thin film hydration method was used to prepare ginsenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles;through orthogonal design and entrapment efficiency of ginsenoside Rg3 determination, it was adopted to optimize four factors of the mass ration ginsenoside Rg3 and DSPE-PEG2000, hydration time,hydration temperature and hydration volume.Results the mass ration ginsenoside Rg3 and DSPE-PEG2000 of 1∶10,hydration volume of 5 mL,hydration temperature of 50℃,hydration time of 20min,entrapment efficiency of 77.9% on average. Conclusion The repeatability of preparation established in this optimization method is good, and it could be used for the preparation of ginsenoside Rg3 Nano Polymeric Micelles .

Ginsenoside Rg3;Thin Film Hydration Method;Nano Polymeric Micelles

辽宁中医药大学大学生创新创业训练计划项目(201610162036)。

荆鸣(1996-)，女，汉族，本科在读，研究方向为药物新科技。E-mail：1761541292@qq.com

袁子民(1975-)，男，汉族，副教授，研究方向为中药新技术与新剂型。E-mail:yuanzmin@163.com

R283.6

A

1007-8517(2017)15-0021-03

2017-05-23 编辑：程鹏飞)