壮药扁担藤薄层色谱鉴别研究

甄汉深 蒋兰兰 丘 琴 陈明伟 许玉华

广西中医药大学，广西 南宁 530001

壮药扁担藤薄层色谱鉴别研究

甄汉深 蒋兰兰 丘 琴*陈明伟 许玉华

广西中医药大学，广西 南宁 530001

目的：建立壮药扁担藤的薄层色谱定性鉴别方法。方法：采用薄层色谱法，分别对壮药扁担藤药材根、茎、叶部位的粉末进行鉴别试验。结果：在相同的提取和鉴别条件下，壮药扁担藤的薄层色谱鉴别分离效果良好。结论：该方法可用于壮药扁担藤的鉴别。

壮药扁担藤；薄层色谱；鉴别

壮药扁担藤来源于葡萄科崖爬藤属植物扁担藤Tetrastigmaplanicaule(Hook.f.)Gagnep.，为藤本植物[1-2]，全株均可药用。其主要分布在广西等地，在广西壮族民间常用于临床。其味辛、酸，性平，归肝经，主要用于治疗风湿痹痛、跌打损伤、腰肌劳损、风湿性关节炎等症[1-7]；壮医认为其具有祛风毒、除湿毒、通龙路、火路之功效，用于治疗发旺(痹病)、兵吟(筋病)、林得叮相(跌打损伤)、麻邦(半身不遂)等症[1]。对于扁担藤生药学的研究，笔者已有研究报道[3]。本文对扁担藤薄层色谱鉴别进行研究，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 紫外灯(力扬企业有限公司)。

1.2 材料 薄层层析硅胶G(青岛海洋化工厂)；所用试剂均为分析纯。原儿茶酸(批号：110809-201205，中国食品药品检定研究院，供含量测定用，纯度98%)；香草酸(批号：110776-200402，中国食品药品检定研究院，供含量测定用，纯度98%)。

实验所采用药材均为广西境内10个不同地区的扁担藤药材，经广西一心药业马利飞副主任中药师鉴定均为葡萄科崖爬藤属植物扁担藤Tetrastigmaplanicaule(Hook. f.)Gagnep.，见表1。分别研成粉末，干燥后备用。

表1 不同产地的扁担藤药材

2 方法与结果

2.1 供试品溶液制备 取1号扁担藤茎药材粉末约3g，加入30mL甲醇-0.5%冰醋酸溶液(75:25)回流提取2h，过滤，滤液蒸干至无醇味，用乙酸乙酯溶液萃取5次(10mL每次)，将乙酸乙酯萃取的溶液合并，蒸干，最后用甲醇溶液定容至2mL，作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液制备 文献记载，扁担藤中含有原儿茶酸和香草酸这两种成分，且与临床应用中抗炎作用有关[2,4]。取原儿茶酸、香草酸对照品各0.55mg置于5mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度线，制成每1mL含0.11mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 薄层板的点样及展开方法 用玻璃毛细管吸取纯甲醇试剂做空白样品1号，再吸取供试品及对照品溶液各8μL和2μL于同一块硅胶G薄层板(按照2010年《中华人民共和国药典》中记录的方法铺板)上，待溶剂挥干后用相宜的展开剂系统进行展开30min，自然晾干，用相应的显色剂进行显色即可。

2.4 显色剂的选择 通过比较碘显色、10%硫酸乙醇显色、溴甲酚绿显色、2%铁氰化钾-1%三氯化铁(均按照2010年《中华人民共和国药典》中的标准配制)等显色剂，结果显示2%铁氰化钾-1%三氯化铁显色的薄层板的斑点清晰，无边缘效应及拖尾现象，因此选择2%铁氰化钾-1%三氯化铁显色效果最好。见图1-4。

2.5 展开剂系统的选择 根据《中华人民共和国药典》2010年版一部(附录VIB)薄层色谱法，可知吸取供试品溶液8μL，对照品溶液2μL点于硅胶G薄层板上，分别以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(12：6：1)、氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)、氯仿-甲醇-甲酸(12：2：1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(12：6：1)、甲苯-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(16：1：4：1.5)等多个展开剂系统。结果发现氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)为展开剂时，分离效果好，斑点圆整，Rf值适合。见图5-9。

2.6 薄层色谱条件的确定 用硅胶G薄层板(20cm×10cm)，分别吸取供试品溶液8μL，对照品溶液2μL点于此板上，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)为展开剂，饱和15分钟后进行展开30min，再用2%铁氰化钾-1%三氯化铁为显色剂。薄层板展开后自然晾干、显色，斑点在日光下可见。

3 扁担藤根、茎和叶药材的薄层鉴别

按照2.1项下的方法，分别制备根、茎、叶3个部位10个不同的样品，得30份供试品溶液，再根据2.6项下所得出的薄层色谱条件进行展开，得图10 至12。

4 讨论

4.1 展开系统选择 壮药质量标准(第二卷)中记载了薄层鉴别的展开剂系统为二甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20：4：0.5)和提取方法[1]。在实验中采用后分离效果不好，尤其是香草酸基本无法分离，后将二甲苯更换成了甲苯，实验结果依然不理想。继而将甲酸变为冰醋酸并调整了比例，仍然无法分离且冰醋酸使得斑点的拖尾增加。因此，将甲苯换成氯仿进行实验，结果证明此展开剂不适用于扁担藤根、茎、叶药材的薄层分离，为此又进行了比例的调整，最终找出了最佳展开剂比例为氯仿-丙酮-乙酸乙酯-甲酸(17：1.5：3：1.5)，其对扁担藤根、茎、叶药材中的原儿茶酸和香草酸的薄层分离效果好。

4.2 试剂的配制 在实验过程中发现，不同试剂极性大小差异，要考虑其相似相容性的原理，因此要注意试剂配制的先后问题，否则会出现分层、拖尾、分离度差、边缘效应等现象，将会影响实验结果的准确性。实验中极性大的溶剂先配制，酸溶剂后配制，挥发性强的溶剂后配制，将所有试剂依次加入，待饱和后无分层、无颜色变化、无化学反应为最佳展开溶剂，故本实验的配制顺序是乙酸乙酯、甲酸、丙酮、氯仿。另外，展开剂系统饱和时间的长短及展开时间的长短也会影响分离效果、拖尾、Rf值大小及边缘效应等，对实验中正确的展开剂系统的选择影响较大，因此必须要固定其二者的时间为15min和30min才可以进行展开剂系统、显色剂的选择。另外，有强酸性的甲酸留在板上，会破坏其显色剂。综上，待板可自然晾干或者暖风吹干，所有的残留溶剂均挥发后，再进行显色为最佳。

[1]广西壮族自治区食品监督管理局编.壮药质量标准(第二卷)[M].南宁：广西科学技术出版社，2011:226.[2]邵加春，何翠红，雷婷，等.瑶药扁担藤化学成分的研究[J].中国药学杂志，2010,21(45):1615-1617.

[3]甄汉深，梁晓乐，丘琴，等.壮药扁担藤的性状及显微鉴别[J].中药材，2013，36(6)：900-902.

[4]覃迅云，罗金裕，高志刚，中国瑶药学[M].北京：民族出版社，2002: 141.

[5]李经纬，余瀛鳌，欧永欣，等.中医大辞典[M].北京：人民卫生出版社，1995:1343.

[6]贾敏如，李星炜.中国民族药志要[M].北京：中国医药科技出版社，2005:398.

[7]《中药辞海》编写组.中药辞海(第二卷)[M].北京：中国医药科技出版社，1996:1840.

投稿注意事项

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3.本刊诚征民族医药、中医药、中西医结合相关研究文章。

Study on Identification of Thin Layer Chromatography ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep

ZHEN Hanshen JANG Lanlan QIU Qing*CHEN Mingwei XU Yuhua

Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001，China

Objective The method of qualitative identification of thin layer chromatography ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep. Methods The powder of root, stem and leaf was tested by thin layer chromatography, respectively, ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep. Results Under the same extraction and identification conditions, the thin layer chromatography ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep.was effective.Conclusion There are significant differences in the content ofTetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep.

Tetrastigmaplanicaule(Hook. F.) Gagnep;TLC; Identification

广西壮族自治区卫生厅中医药科技专项(GZBZ14-07)、壮瑶药协同创新中心(桂教科研[2013]20号)、广西壮瑶药重点实验室(桂科基字[2014]32号)、广西重点学科壮药学(桂教科研[2013]16号)、广西八桂学者中药创新理论与药效研究(J13162)的项目资助。

甄汉深(1959-)，男，博士生导师，教授，研究方向为药学和中药学的教学和科研工作。E-mail：8zhen@163.com

丘琴(1983-)，女，博士研究生，副教授，研究方向为药学和中药学的教学和科研工作。E-mail：12031983@163.com

R284.1

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1007-8517(2017)15-0027-03

2017-05-25 编辑：程鹏飞)