应用FISH技术对孕早期胚胎停育及自然流产的遗传学因素分析*

沈 菲，张成芳，赵 娟，覃亦伟，李 辉，陈广新

(广州市花都区人民医院，广东 广州 510800)

染色体数目检测技术是目前确认早期胚胎停育及自然流产的遗传学因素的主要手段之一。近几年 FISH检测分析技术的临床应用范围广泛，是一种快速准确的生物学诊断技术[1]。本次我院为探讨分析采用荧光原位杂交技术即FISH技术分析孕早期胚胎停育及自然流产的遗传学因素的效果及意义，选取2015-06—2016-06间广州市花都区人民医院就诊患者100例进行分析，结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

用数字表法选取2015-06—2016-06间本院就诊患者100例，年龄25～36岁，平均年龄(28.4±5.9)岁，其中孕周小于15 周发生不明原因自然流产的患者病例50例，通过 B 超检查为胚胎停止发育的患者50例，孕周7～13周，平均孕周(9.5±3.2)周。所有入选病例均经患者本人同意，并自愿签订知情同意书。

1.2 方法

FISH技术试验过程：首先需要通过冷磷酸盐缓冲液(PBS) 冲洗处理绒毛组织标本，去掉存留的污染母血细胞。使用倒置体视显微镜，使用眼科镊挑选绒毛组织，需要注意的是要尽量避免混入蜕膜组织。根据标本量，使用浓度为0.3 ng/mL的胶原酶 B消化持续5～10 min，再使用浓度为0.25% 的胰蛋白酶持续消化10 min。然后，通过离心技术处理，去掉消化液后，使用浓度为 0.075 mol/L的KCl 低渗处理30 min，按照3∶1的比例液经过预固定、固定后，沉淀在同一载玻片，分别滴取 3 个杂交区。最后，对处理后的薄片进行荧光原位杂交实验，观察在患者的流产组织中是否存在数目异常的染色体及具体异常情况。

1.3 试验结果评价标准[2]

FISH 结果的判读依据为：每组的探针计数大于或等于100 个细胞，对每种指标进行单独判断，正常细胞比>90%，则说明该项指标正常；若异常细胞比例> 60%，则说明该项指标存在异常；如果全部单个指标异常细胞的比例均<10%，检测正常结果。如果某一项指标的异常检测比在10%～60%，需要增加观测样本的细胞数，如果异常细胞的所占比例低于判断非嵌合体状态的异常标准(60% )，其可能原因为胎儿染色体异常嵌合体、母体细胞污染等，需要进行进一步的遗传判断。

1.4 观察指标

统计分析Fish技术检测染色体异常类型检出率及不同异常类型的检出情况。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 异常染色体检出率

经统计，异常染色体异常患者50例，异常检出率50%，染色体异常情况比例较高。

2.2 不同类型异常染色体检出情况

异常染色体检出50例，其中16-三 体和22-三 体异常占比率均较高(图1、图2)为32.00%，XXX 、21-三体最低均为2.00%，差异有统计学意义(P<0.05)，可见染色体数目异常为导致早产或停育的主要因素。见表1。

表1 不同异常类型的检出情况

图1 16-三体

图2 22-三体

3 讨论

环境因素、内分析因素以及遗传学因素等都是导致胚胎停育的重要因素，而胚胎停育后大约15%的患者会出现自然流产。目前，从遗传学的角度讲，染色体的数目异常是胚胎停育和发生早期流产的根本因素。而受精卵卵裂时染色体不分离等都是导致胚胎染色体数目异常的主要因素，而染色体异常又可以主要分为染色体数目减少或增加一条这两种情况，即三体性或者单体性情况。而如果胚胎中存在多倍体或单倍体染色体核型，则很可能由于基因剂量效应的作用而使胚胎无法继续发育即停育[3]。大量研究结果显示，染色体数目异常胚胎中仅部分 21-三体和性染色体多倍体或单倍体情况的胚胎能够发育成熟。即便如此，这些患者大多数会在生长发育、智力或者生殖等方面出现严重的缺陷。本次调查研究结果显示：异常染色体检出率50.00%，其中16-三体异常占比率最高为32.00%，XXX 、21-三体最低均为2.00%，差异有统计学意义(P<0.05)，这一结果也可充分说明染色体数目异常为导致早产或停育的主要因素之一。且和郑雷等[4]探究分析结果符合，说明经FISH技术诊断染色体异常情况检出率较高，且提示染色体数目异常为胚胎停育的主要遗传学因素。

FISH 检测分析技术应用的最大优势为这一技术不局限于检测分裂期的细胞，既能够适用中期染色体，也可适用于检测间期核及细胞周期的各个阶段[5]。由此可见，通过FISH 检测方法能够检测流产组织，并能够充分发挥该实验技术的检测优势。另外，这一检测技术主要能够通过荧光信号标记染色体，所以通过对荧光信号的判读便能够了解待检标本的染色体数目是否存在异常情况，进而发现由于染色体数目异常而导致的流产病因，为孕早期胚胎停育及自然流产的遗传学因素判断提供可靠依据[6]。但是与此同时，FISH检测技术也存在一定的局限性，其主要针对22、21、18、16、13和X/Y这6种较为常见染色体的数目异常情况具有良好的检测效果，而针对其他染色体的检测效果不佳，因此在检测过程中也会有漏诊情况的发生。这也是目前FISH检测技术无法完全取代核型分析检测技术的重要原因，但是FISH检测技术仍可作为早期筛选、诊断的有效手段。

综上所述，从遗传学角度，患者染色体数目异常是其早期胚胎停育或发生自然流产的主要因素，而16 号染色体三倍体的改变则是最常见的异常情况。FISH技术分析方法能够对孕早期停育的胚胎和流产组织进行有效的检测，为该病遗传学因素分析提供了可靠依据。

[1] 崔洪艳，陈叙，岳天孚.FISH 技术检测自然流产或死胎死产组织中染色体异常的临床研究[J].中国妇幼保健，2011，26(33):5220-5221.

[2] 韦红卫，杜娟，夏红卫，等.FISH 技术在检测自然流产胚胎染色体异常中的应用研究[J].中国优生与遗传杂志，2012，20(8):40-41.

[3] 宋兰林，熊丽，刘思平，等.FISH 技术在快速诊断自然流产胚胎染色体数目异常中的应用[J].南方医科大学学报，2011，31(9):1605-1607.

[4] 郑雷，何晓春，李巍，等.FISH 方法进行孕早期胚胎停育及自然流产的遗传学因素分析[J].实用妇产科杂志，2013，11(29):863-865.

[5] 徐雪琴，李灿铮，林小玲，等.温州地区110 例早孕胚胎停育绒毛染色体核型分析[J].中国优生与遗传杂志，2012，20(12):54-55.