高效液相色谱法测定武力拔寒散中橙皮苷的含量＊

赵磊，孙艳涛，张晗，马琳琳，于浪天

(1.四平市食品药品检验所，吉林四平 136000； 2.吉林师范大学化学学院，吉林四平 136000；3.吉林师范大学环境友好材料制备与应用省部共建教育部重点实验室，吉林四平 136000；4.中国医科大学，南京 211198)

高效液相色谱法测定武力拔寒散中橙皮苷的含量＊

赵磊1，孙艳涛2，3，张晗2，3，马琳琳2，3，于浪天4

(1.四平市食品药品检验所，吉林四平 136000； 2.吉林师范大学化学学院，吉林四平 136000；3.吉林师范大学环境友好材料制备与应用省部共建教育部重点实验室，吉林四平 136000；4.中国医科大学，南京 211198)

建立液相色谱测定武力拔寒散中橙皮苷含量的方法。以甲醇为流动相A，以冰乙酸–水(1∶300)为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为284 nm，流量为1.0 mL／min，柱温为30℃。橙皮苷的质量浓度在1.190 3～119.03 µg／mL范围与色谱峰面积线性关系良好(r=0.999 9)，检出限为300 ng／g。样品加标回收率为95.00%～98.50%，测定结果的相对标准偏差为1.0%(n=6)。该方法简单、快速、准确，重现性好，可为全面评价和控制武力拔寒散制剂的质量提供依据。

武力拔寒散；花椒；橙皮苷；高效液相色谱法

武力拔寒散是一种中药制剂，它具有祛风散寒，活血通络的功效，主要用于治疗感受风寒，筋骨麻木，肩背酸痛，腰痛寒腿，饮食失调，胃寒作痛，肾寒精冷，子宫寒冷，行经腹痛，寒湿带下等症［1–3］。武力拔寒散制剂收录于中国卫生部药品标准中(WS3–B–1751–94)［4］，现有质量标准仅有性状鉴别与显微鉴别。为了更好地控制与评价该制剂，需要对该制剂的质量标准进行进一步的研究，建立一种快速、准确的检测方法。

武力拔寒散是由白花菜子、花椒(青椒去目)二味药经提取加工制成的制剂，花椒是《中华人民共和国药典》收载的常用中药材［5–7］。青花椒中主要含有挥发油、酰胺类物质和生物碱等成分［8–11］，具有多种药理活性［12–14］。研究表明，橙皮苷具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗菌、抗病毒等功效，目前尚未见有关花椒中橙皮苷检测方法的报道。花椒中挥发油成分容易受外界条件影响，因此测定橙皮苷的含量可以更好地控制花椒的质量，进而能够更好地对武力拔寒散药品进行质量监控，提高用药安全。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：1260型，美国安捷伦科技有限公司；

超纯水器：2001B型，北京普析通用仪器有限责任公司；

电子天平：BT125D型，感量为0.1／0.01 mg，上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂；

超声波清洗器：SK5200H型，功率为300 W，频率为60 Hz，上海科导仪器有限公司；

橙皮苷对照品：批号为110712–201316，含量为95.38%，中国食品药品检定研究院；

橙皮苷对照品溶液：0.119 0 mg／mL，精密称取橙皮苷对照品5.95 mg，置于50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至标线，混匀；

甲醇：HPLC级，赛默飞世尔(中国)有限公司；

武力拔寒散：(1)批号为3101029，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，(2)按处方工艺［白花菜子600 g、花椒(青椒去目)500 g，将以上二味药材粉碎成粗粉，过筛，混匀］自制两批，批号分别为20151107，20151209；

实验用水为超纯水，符合GB／T 6682–2008 《分析实验室用水规格和试验方法》要求。

1.2 色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB–C18柱［250 mm×4.6 mm，5 μm，安捷伦科技(中国)有限公司］；检测波长：284 nm；柱温：30 ℃；进样体积：5 µL；流动相流量：1.0 mL／min；流动相：A组分为甲醇，B组分为冰乙酸–水(1∶300)，梯度洗脱，洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

1.3 样品处理

取武力拔寒散样品，混匀，精密称量1.122 g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇100 mL，超声处理30 min，放冷，过滤，用30 mL甲醇分别洗涤残渣及容器，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，定容至10 mL，摇匀，滤过，取续滤液分析。

1.4 阴性样品处理

按照武力拔寒散处方工艺，去除花椒(去目)药材，白花菜子粉碎成粗粉，过筛，混匀，精密称量0.605 g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇100 mL，超声处理30 min，放冷，过滤，用30 mL甲醇分别洗涤残渣及容器，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解后，定容至10 mL，摇匀，滤过，取续滤液分析。

2 结果与讨论

2.1 提取条件选择

分别以甲醇、20%甲醇、水作为提取溶剂进行试验，结果表明甲醇的提取率最高，回收率达到96.91%。以甲醇为提取溶剂，提取时间分别选择5，10，20，30和40 min进行提取试验，结果表明，随着提取时间的增加提取率随之增高，提取30 min以后提取率趋于稳定，因此提取时间定为30 min。

2.2 色谱条件优化

参照文献［12–15］，选择ODS色谱柱作为分析色谱柱，实验发现规格为(250 mm×4.6 mm，5 μm)的色谱柱优于(150 mm×4.6 mm，5 μm)的色谱柱。分别以甲醇–冰乙酸水溶液(1∶300)、甲醇–水、甲醇–0.1%磷酸作为流动相进行试验，结果发现色谱峰形差别较大，采用甲醇为流动相(A)，以冰乙酸–水(1∶300)为流动相(B)效果最佳。由于样品中杂质峰多，为了缩短分析时间，采用梯度洗脱方式，对强保留物质进行洗脱。洗脱初始甲醇为38%，运行35 min，保证橙皮苷色谱峰完全分离。36～40 min甲醇占比为100%，目的是冲洗色谱柱，洗脱强保留物质，减少分析时间。41～70 min甲醇占比38%，该阶段为平衡色谱柱时间。在优化的色谱条件下，橙皮苷对照品溶液、武力拔寒散样品溶液、阴性样品溶液的色谱图分别见图1～图3。由图1～图3可见，橙皮苷与样品中其它成分色谱峰分离良好，色谱峰形比较理想，可以进行定量分析。

图1 橙皮苷对照品溶液、寒散样品溶液、阴性样品溶液高效液相色谱图

2.3 线性关系和检出限

精密吸取橙皮苷对照品溶液0.1，3，5，7，10 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至标线，混匀，配制成质量浓度分别为1.190，35.70，59.50，83.3，119.0 μg／mL的系列标准溶液，依次取溶液注入液相色谱仪，按照1.2色谱条件对样品进行测定，以色谱峰面积(y)为纵坐标，溶液的质量浓度(x)为横坐标，进行线性回归，以橙皮苷色谱峰的信噪比(S／N)为3时计算橙皮苷的检出限，线性范围、线性方程、相关系数和检出限结果见表2。

表2 线性范围、线性方程、相关系数和检出限

2.4 精密度试验

取批号为3101029的武力拔寒散样品6份，按照1.3方法制备样品溶液，并依照1.2色谱条件进行测定，计算样品中橙皮苷的含量及其相对标准偏差，结果见表3。由表3可知，本法测定结果的相对标准偏差为1.0%，表明本法测量精密度良好。

表3 样品中橙皮苷含量测定结果

2.5 稳定性试验

取批号为3101029的武力拔寒散样品1.0758 g，按照1.3方法制备样品溶液，分别放置3，6，9，12，15 h，按照1.2色谱条件测定色谱峰面积，考察方法的稳定性，测定结果见表4。

表4 稳定性试验结果

由表4可知，橙皮苷色谱峰面积的相对标准偏差为0.76%(n=5)，表明样品溶液在15 h内基本稳定，说明该分析方法稳定性良好。

2.6 加标回收试验

精密称取已知含量的武力拔寒散样品6份(批号为3101029，取样量按约含橙皮苷0.4 mg)，分别依次精密加入以甲醇配制的质量浓度为0.119 0 mg／mL的橙皮苷对照品溶液3，5，5，10，10 mL，按1.3方法制备加标样品溶液，并依次进行测定，计算橙皮苷的标回收率，结果见表5。由表5可知，橙皮苷的加标回收率为95.00%～98.50%，表明本方法测定结果准确度较高。

表5 加标回收试验结果

3 结语

参照液相色谱法测定橙皮苷的色谱条件，利用高效液相色谱法定量分析制剂中含量较高的橙皮苷。采用甲醇–冰乙酸水溶液(1∶300)作为流动相进行梯度洗脱，所得色谱峰峰形对称，可以有效地缩短分析时间，满足分析要求。该方法具有专属性强、精密度高、重复性好的特点，为控制武力拔寒散制剂的质量提供理论依据。

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一种基于光学传感器的纸张碳酸钙含量测定的新方法与装置

公开(公告)号：CN106525743A 公开(公告)日：2017.03.22

申请(专利权)人：福建农林大学

摘要本发明涉及碳酸钙含量测定的技术领域，公开一种基于光学传感器的纸张碳酸钙含量测定的新方法与装置。该装置包括用于分散纸张和加酸酸化的酸化反应槽、沉淀剂储存槽、计量泵、溶液混合器、设有比色皿的光学检测系统和计算机，所述酸化反应槽和沉淀剂储存槽分别通过设有阀门和计量泵的管道连通溶液混合器，溶液混合器连通比色皿，所述比色皿设有出液口。该方法通过对纸张进行酸化处理后，对酸化溶液进行光谱检测得到所述纸张中碳酸钙含量。本发明装置结构简单，操作简便，极大的改善了检测的工作强度，减小人工操作的误差。能够快速实现准确测定纸张中的碳酸钙含量，检测结果的准确度和精密度高。

一种基于膜富集比色快速检测纸质包装材料中甲醛含量的方法

公开(公告)号：CN106525839A 公开(公告)日：2017.03.22

申请(专利权)人：上海烟草集团有限责任公司;上海烟草包装印刷有限公司

摘要本发明提供一种基于膜富集比色快速检测纸质包装材料中甲醛含量的方法，包括以下步骤：(1)取甲醛标准储备溶液，加入显色试剂，获得标准显色溶液；(2)将标准显色溶液中显色产物富集至过滤膜上，与色卡比较，制作比色卡；(3)将纸质包装材料试样加水混合，浸泡提取后移取上层清液，加入显色试剂，获得显色溶液；(4)将显色溶液中的显色产物富集至过滤膜上，获得显色过滤膜；(5)将显色过滤膜与比色卡进行比色，从而获得试样中甲醛含量。本发明提供的上述方法，首次将膜富集与比色法进行结合用于甲醛的检测中，能够快速测定纸质包装材料及其油墨中甲醛含量，提高测定准确性和灵敏度。

一种测定合金钢中痕量氧、氮元素的方法

公开(公告)号：CN106525757A 公开(公告)日：2017.03.22

申请(专利权)人：陕西宏远航空锻造有限责任公司

摘要本发明涉及一种测定合金钢中痕量氧、氮含量的方法，包括步骤1：试验条件准备；步骤2：制备试样；步骤3：空白试验；步骤4：氧氮分析仪校准(4.1：使用钢中氧氮含量标准物质校准，4.2：测定钢中氧氮含量标准物质确定校准)；步骤5：测定试样中痕量氧氮含量。本发明提高了测定结果的准确性，解决了合金钢中痕量氧、氮含量的测定难题。

一种采用B-Z化学振荡反应测定重酒石酸去甲肾上腺素含量的方法

公开(公告)号：CN106525926A 公开(公告)日：2017.03.22

申请(专利权)人：辽宁石油化工大学

摘要本发明涉及一种采用B-Z化学振荡法测定重酒石酸去甲肾上腺素含量的方法，通过对影响振荡反应的4种主要因素，(NH4)2Ce(SO4)3，KBrO3，HOOCCH2COOH，H2SO4浓度进行探讨，确定了B-Z反应中重酒石酸去甲肾上腺素检测的最佳浓度条件；进而考察了最佳的振荡反应温度。在最佳实验条件下，通过重酒石酸去甲肾上腺素对B-Z化学振荡体系扰动的大小与其浓度成线性关系来测定其含量，可用于重酒石酸去甲肾上腺素的日常例行分析检测。

一种赭曲霉毒素A含量检测方法

公开(公告)号：CN106556585A 公开(公告)日：2017.04.05

申请(专利权)人：百奥森(江苏)食品安全科技有限公司

摘要本发明公开了一种赭曲霉毒素A含量检测方法，包括以下步骤：样品前处理：取蔬果样品碾碎，加入萃取剂，混匀，采用超声波快速萃取30～60 min，萃取温度为30～40℃，离心，取上清，将上清过赭曲霉毒素A免疫亲和柱纯化，依次用真菌毒素清洗缓冲液、水淋洗免疫亲和柱，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液过滤，取滤液得到待测样品溶液；所述萃取剂为乙腈和四氢呋喃的混合液。本发明可用于复杂基体中痕量组的赭曲霉毒素A定量快速测定，结果更加准确，更有利于目前市场的发展与推广。

一种检测食品中果糖的方法

公开(公告)号：CN106525801A 公开(公告)日：2017.03.22

申请(专利权)人：兰州大学;兰州大学中卫高新技术研究院

摘要本发明提供了一种检测食品中果糖的方法，其步骤为a.配制储备液；b.制备标准溶液；c.测定荧光光谱；d.绘制标准曲线。荧光谱图中存在572 nm和500 nm两个峰，基于两个波长的荧光强度比值对果糖进行检测。本发明与现有技术相比，分析时间短，操作条件温和，重现性好，且对果糖的检出限低，具有快速、简便、稳定和高灵敏的优点。

Determination of Hesperidin in Wuli Bahan Powders by High Performance Liquid Chromatography

Zhao Lei1, Sun Yantao2， 3, Zhang Han2， 3, Ma Linlin2，3, Yu Langtian4
(1. Siping Institute for Food and Drug Control, Siping 136000, China; 2. College of Chemistry, Jilin Normal University, Siping 136000, China; 3. Key Laboratory of Preparation and Applications of Environmmental Frendly Materials, Jilin Normal University, Siping 136000, China; 4. Chinese Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China)

A method was established to determine hesperidin in Wuli Bahan powders by high performance liquid chromatography. The mobile phase was methanol (A) and acetic acid–water (1∶300)(B) with gradient elution program. The flow rate was 1.0 mL／min and the detection wavelength was 284 nm. The column temperature was 30℃. The content of hesperidin had good linear relationship with the chromatographic peak area in the range of 1.190 3–119.03 µg／mL with the correlation coefficient of 0.999 9, the detection limit was 300 ng／g. The sample recovery rates were 95.00%–98.50%, and the RSD was 1.0%(n=6). The method is simple, rapid, accurate and reproducible, which provides a reference for quality control of Wuli Bahan powders.

Wuli Bahan powders; chinese prickly ash; hesperidin; HPLC

O657.7

A

1008–6145(2017)03–0050–04

*2016国家级大学创新创业训练计划项目(201610203010)；四平市科技局项目(2014042)

联系人：赵磊；E-mail: zhaolei0433@sina.com

2017–03–13

10.3969／j.issn.1008–6145.2017.03.011