顶空气相色谱法检测环戊丙酸雌二醇原料药中5种残留溶剂

杜碧莹

(广东省广州市药品检验所，广东 广州 510160)

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顶空气相色谱法检测环戊丙酸雌二醇原料药中5种残留溶剂

杜碧莹

(广东省广州市药品检验所，广东 广州 510160)

目的 建立检测环戊丙酸雌二醇原料药中5种残留溶剂的顶空气相色谱法。方法 色谱柱采用 Agilent DB－WAXetr毛细管柱(30m×250μm，0.5μm)，程序升温，流速为1.5mL／min；进样方式为分流进样，分流比为10∶1；进样口温度为200℃，检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为250℃；顶空瓶平衡温度为110℃，平衡时间为30min；进样量为1mL。按外标法进行定量分析。结果 环戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶的检测质量浓度线性范围分别为25～100，250～1 000，150～600，250～1 000，12.5～50.0μg／m L，r分别为0.999 49，0.999 73，0.999 68，0.999 73，0.999 58，精密度试验结果的 RSD分别为1.4%，0.7%，1.4%，1.4%，2.5%（n＝6）；加样回收率分别为104.55%，93.74%，100.94%，96.42%，94.52%，RSD分别为1.19%，1.40%，1.68%，1.02%，3.50%(n＝6)；检出限为0.04～0.70μg／m L，定量限为0.10～2.5μg／m L。结论 该方法简单，准确，重复性好，可用于环戊丙酸雌二醇原料药中5种残留溶剂的测定。

环戊丙酸雌二醇；顶空气相色谱法；残留溶剂

环戊丙酸雌二醇为长效雌激素，作用比戊酸雌二醇强而持久，临床用于治疗卵巢功能不全、闭经、更年期综合征、老年性阴道炎和前列腺癌等，如环戊丙酸雌二醇与醋酸甲羟孕酮组成复方注射用避孕药(商品名Lunelle)，可作为长效避孕针每月使用1次，并已获美国食品药物管理局（FDA）批准上市[1－4]，临床应用广泛。企业在生产时使用了环戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶等有机溶剂，由于残留溶剂无治疗作用，但又具有一定的毒性，且不同溶剂间可能会有毒性累加作用，故不能仅控制每种溶剂残留量的限度。目前，国内暂无环戊丙酸雌二醇的质量标准，溶剂残留量相关检测方法尚未见报道。根据药物杂质分析指导原则，残留溶剂作为杂质限量检查是质量控制指标之一[5－6]。参考文献[7－10]及残留溶剂指导原则要求，本研究中建立了测定环戊丙酸雌二醇原料药中5种残留溶剂的顶空气相色谱法，方法学验证结果表明，简便、灵敏，检测结果准确可靠，可作为环戊丙酸雌二醇原料药中残留溶剂控制的检测方法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Aglient7890A型气相色谱仪（安捷伦公司）；氢火焰离子化检测器（FID）；AglientG1888顶空进样器（上海安谱科学仪器有限公司)。

1.2 试药

环戊丙酰氯(批号为10120482，含量为98%），乙酸乙酯（批号为20101003－2，含量为99.5%），甲醇（批号为081029，含量为99.5%），乙醇(批号为20110718，含量为 99.7%)，吡啶（批号为 20050302－2，含量为99.5% ），二甲亚砜（色谱纯，批号为 2011094，20110442，含量为99.9%），均购自广州化学试剂厂；环戊丙酸雌二醇(北京紫竹药业有限公司，批号分别为20110941，20110942，20110943）

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：AgilentDB－WAXetr毛细管柱（30m×250μm，0.5μm）；程序升温：初始温度40℃，保持8 min，再以20℃ ／min的速率升温至200℃，保持5 min；载气：氮气；流速：1.5 m L／min；进样方式：分流进样，分流比10∶1；进样口温度：200℃。检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度：250℃；顶空瓶平衡温度：110℃，平衡时间：30min；进样量：1m L。

系统适用性试验：取对照品溶液顶空进样，各组分色谱峰间的分离度均应符合要求，见图1。再取供试品溶液与对照品溶液顶空进样，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，结果见表1。

表1 5种成分理论板数与分离度

图1 气相色谱图

2.2 溶液制备

混合对照品溶液：称取环戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶适量，精密称定，用二甲亚砜定量稀释成每1mL各含50，500，300，500，20μg的混合溶液，精密量取5mL置顶空瓶中，密封，即得。

供试品溶液：取样品0.5 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加二甲亚砜5mL使溶解，密封，即得。

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别称取环戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶适量，用二甲亚砜溶解并稀释成每1m L含环戊丙酰氯5 mg、乙酸乙酯50mg、甲醇30 mg、乙醇50mg、吡啶2.5mg的溶液，得混合对照贮备液。分别精密量取1，2，1，3，3，1 m L，置 200，250，100，250，200，50mL容量瓶中，用二甲亚砜定容并摇匀。精密量取5mL置顶空瓶中，密封。按拟订色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标（Y）、质量浓度为横坐标（X），进行线性回归，线性回归方程见表2。

精密度试验：取2.2项下的对照品溶液连续进样6次，测定，乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶、环戊丙酰氯峰面积的 RSD分别为0.7%，1.4%，1.4%，2.5%，1.4%（n＝6），表明仪器精密度良好。

表2 残留溶剂线性回归方程（n＝6）

表3 残留溶剂回收试验结果（%，n＝9）

重复性试验：取环戊丙酸雌二醇原料药，依法平行制备供试品溶液6份，按拟订色谱条件依法测定。结果乙酸乙酯、甲醇、吡啶均未检出，乙醇和环戊丙酰氯含量的 RSD分别为1.5%和1.6%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：分别称取环戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶适量，用二甲亚砜溶解并稀释成每1mL含环戊丙酰氯0.1mg、乙酸乙酯1.0mg、甲醇0.6mg、乙醇1.0mg、吡啶0.04mg的溶液，得回收贮备液。精密称取已知残留溶剂量的原料药0.5 g，共9份，各置于顶空瓶中，分别精密加入上述贮备液 2，2，2，2.5，2.5，2.5，3，3，3m L，二甲亚砜3，3，3，2.5，2.5，2.5，2，2，2m L，密封，摇匀，制成80%，100%，120%的低、中、高浓度，顶空进样。结果见表3。

检出限与定量限：精密量取对照品贮备液适量，作系列稀释，乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶及环戊丙酰氯检出限分别为 0.200 4，0.275 5，0.688 1，0.060 8，0.039 9μg／m L，定量限分别为0.668 0，0.918 2，2.293 6，0.202 7，0.133 2μg／m L。

2.4 样品残留溶剂测定结果

按2.2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果见表4。

3 讨论

3.1 限度选择

在合成环戊丙酸雌二醇原料药时，环戊丙酰氯作为起始原料使用，由于起始原料质量与终产物质量有关，且原料中所含的有机溶剂也易引入到终产物。目前，尚无足够毒理学确定控制限度，但考虑合成中多种溶剂使用可能产生溶剂间毒性累加作用，故需对环戊丙酰氯的限度进行严格控制，限度不得过0.05%。其他4种溶剂则根据文献[7－8]要求，甲醇与吡啶属二类溶剂，限度为0.30%和0.02%，此溶剂对人体有一定毒性，限制使用；乙醇与乙酸乙酯属三类溶剂，限度均为0.50%，此溶剂对人体健康危险性较小[9－10]，推荐使用。

3.2 溶剂选择

环戊丙酸雌二醇在水中不溶解，使用二甲亚砜为溶剂，结果二甲亚砜在5种待测溶剂之后出峰，对其他溶剂均无干扰。

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Determ ination of Five Residual Solvents in Estradiol Cypionate Crude Drug by Headspace Gas Chromatography

Du Biying
(Guangzhou Institute for Drug Control,Guangdong,Guangzhou,China 510160)

Ob jective To establish a headspace gas chromatography(HS－GC)method for determination of 5 residual solvents in Estradiol Cypionate crude drug.M ethods HS－GC method was performed by using Agilent DB－WAXetr column(30 m×250μm,0.5μm),programmed temperature,flow rate was 1.5 mL／min,split ratio was 10∶1,inlet temperature was 200℃,the detector was flame ionization detector,detecting temperature was 250℃.The bottles equilibrium temperature was 110℃,the equilibrium time was 30 min,and injection volume was 1 mL.External standard method was used for quantitative analysis.Results The Linear range were 25～100μg／mL (r＝0.999 49)for cyclopentyl propionyl chloride,250～1 000μg／m L(r＝0.999 73)for acetic ether,150～600μg／mL(r＝0.999 68) for methanol,250～1 000μg／m L(r＝0.999 73)for ethanol,12.5～50.0μg／m L(r＝0.999 58)for pyridine.The RSDs of precision were 1.4%,0.7%,1.4%,1.4%,2.5%(n＝6),respectively.The recoveries were 104.55%(RSD＝1.19%),93.74%(RSD＝1.40%), 100.94%(RSD＝1.68%),96.42%(RSD＝1.02%),94.52%(RSD＝3.50%).The detection limit was 0.04～0.70μg／mL and the quantitation limit was 0.10～2.5 μg／m L.Conclusion The method is simple,accurate and reproducible,which can be used for the determination of the 5 residual solvents in Estradiol Cypionate crude drug.

Estradiol Cypionate;headspace gas chromatography;residual solvent

2016－11－24；

2017－01－14)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.07.008

杜碧莹，女，硕士研究生，副主任药师，研究方向为药品质量，（电话）020－26282368（电子信箱）winddby＠tom.com。

TQ 460.4；TQ 460.7

A

1006－4931(2017)07－0024－03