HPLC测定不同产地白苏子中迷迭香酸的含量

李婷，成彦，陈伟，雍菁

（1．南京明基医院中药房/南京医科大学附属医院，江苏 南京 210019；2．南京中医药大学附属第三医院，江苏 南京 210001；3．苏州市中医医院，江苏 苏州 215009）

HPLC测定不同产地白苏子中迷迭香酸的含量

李婷1，成彦1，陈伟3，雍菁2

（1．南京明基医院中药房/南京医科大学附属医院，江苏 南京 210019；2．南京中医药大学附属第三医院，江苏 南京 210001；3．苏州市中医医院，江苏 苏州 215009）

目的：比较不同产地白苏子产品中迷迭香酸的含量，拟建立白苏子的质量评价标准。方法：通过高效液相色谱法（HPLC）对8批次不同白苏子产品进行迷迭香酸含量测定；采用迪马Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇-0.1%甲酸溶液（40∶60），流速：1.0 mL/min，柱温：35 ℃，检测波长330 nm，进样量为10 µL。结果：8个批次的白苏子中迷迭香酸含量为0.149%～0.196%。结论：HPLC测定白苏子产品中迷迭香酸的方法重现性好，准确度高，可作为研究白苏子质量标准的方法。

白苏子；不同产地；高效液相色谱法；含量测定；迷迭香酸

白苏子始载于《名医别录》，列为上品。陶弘景曰：“荏状如苏，高大白色，不甚香其子研之，杂米作糜，甚肥美，下气补益。”苏颂认为：“苏有数种：有水苏、白苏、山鱼苏，皆是荏类”；并谓，“白苏，方径圆叶，不紫，亦甚香，实亦入药。”李时珍谓：“紫苏者，以别白苏也”，进一步阐明：“其面背皆白者即白苏，乃荏也[1-4]。”紫苏是民间常用的中草药，全草均可入药，其性温、味辛，归肺、脾、胃经，具有解毒，散寒，行气和胃等功效，用于风寒感冒，咳嗽，呕恶，妊娠呕吐，解鱼鳖虫毒等。嫩尖也可当茶用，有清热解毒之功效。白苏的分布极为广泛，资源丰富，是我国传统的药食两用植物之一。中国药典只收载了紫苏子，但白苏子在市场上大量流通。紫苏子含迷迭香酸，该酸具有抗炎、抗氧化和免疫抑制等多种活性[5-9]，《中华人民共和国药典》（2010年版）便以它作为紫苏子的含量测定成分。本文以迷迭香酸含量为指标，考察白苏子饮片中迷迭香酸的含量，为白苏子的质量控制提供可靠依据。

1 样品情况

收集样品共8批，具体来源见表1。

表1 样品收集

2 仪器与试药

高效液相色谱仪（Waters e2695-2998，PDA检测器，Empower 3色谱工作站）；迪马Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；电子天平（Sartorius，BP115D，d＝0.1 mg）；高速离心机（Thermo，Biofuge primo R）；超声波清洗仪（KQ-400GKDV，昆山市超声仪器有限公司）。

2.2 试药

甲醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，美国Sigma-Aldrich公司）；去离子水（Milli-Q超纯水机制备，美国Millipore公司）。

迷迭香酸标准品（批号：201505）购自中国药品生物制品检定研究院。

3 方法与结果

3.1 色谱条件

以Diamonsil C18（5 µm，4.6 mm×250 mm）为填充剂[10]；流动相：甲醇-0.1%甲酸溶液（40∶60），流速：1.0 mL/min，柱温：35 ℃，检测波长330 nm，进样量为10 μL。

3.2 溶液的制备

5.坚定不移地狠抓防疫体系建设，确保有效提升服务能力。围绕“基层队伍素质提升化”，大力实施基层兽医远程教育和定期培训，在全区218名乡镇兽医人员中，中专以上文化程度达到80%，在42名机关人员中，有硕士研究生8名，畜牧兽医管理和技术人员结构得到多层次优化。以全面打造标准化乡镇兽医站为目标，采取中央投资与自筹相结合的方式，近年投入改扩建项目建设资金500多万元，改建全区34个乡镇畜牧兽医站，完善了区级及乡级的冷链体系和电脑、打印机等办公设备，新建改建冻库3个、配备冰柜、冰箱共计90余台、电脑50余台，打印机30余台。全区的乡镇畜牧兽医站通过规范建设后面貌焕然一新。

对照品溶液的制备：精密称取迷迭香酸对照品10 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液[11]。用甲醇稀释成各种浓度的对照品溶液。

供试品溶液的制备：取白苏子粉末0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，密塞，称定质量，加热回流2 h，放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

3.3 系统适应性试验

3.3.1 专属性试验 在“3.1”色谱条件下，迷迭香酸峰形良好，无杂质干扰（图1-1，图1-2，图1-3）。

3.3.2 标准曲线及线性范围 精密吸取对照品储备液配置成迷迭香酸浓度分别为5.200，10.399，20.798，41.597，83.192，103.992，207.983 µg/mL的对照品溶液，分别进样10 µL，记录峰面积，以浓度为横坐标，以峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，迷迭香酸回归方程为:

图1-1 迷迭香酸阴性对照溶液HPLC图

结果表明迷迭香酸对照品浓度在5.200～207.983 µg/mL范围内呈现良好的线性关系。

3.3.3 精密度试验 精密吸取迷迭香酸浓度为41.597 µg/mL的对照品溶液10 µL，按照“3.1”项下色谱条件连续进样6次，记录迷迭香酸峰面积。迷迭香酸峰面积相对标准偏差（RSD）为0.906%。

图1-2 迷迭香酸对照品溶液HPLC图

3.3.4 重复性试验 取同一批白苏子样品6份，1 g/份，分别精密称定，按照“3.2”项下方法制备供试品溶液，按上述HPLC条件测定。结果迷迭香酸含量的RSD为1.719%。

3.3.5 最低检测限和定量限 信噪比S/N为3时，最低检测限为0.1078 μg/mL，信噪比S/N为10时，最低定量限为0.3234 μg/mL。见图2、图3。

图2 迷迭香酸最低检出限

图3 迷迭香酸最低定量限

3.3.6 稳定性试验 取混合对照品溶液（迷迭香酸浓度为20.798 µg/mL）分别在0，2，4，6，8，10及12 h分别进样10 µL，RSD分别为0.348%，表明对照品溶液在12 h内稳定。

3.3.7 加样回收率试验 取同一批白苏子5份，0.25 g/份，精密称定，分别精密加入迷迭香酸对照品溶液。按照“3.2”项下方法制备供试溶液，按上述HPLC条件测定，计算回收率，结果见表2。

3.4 样品测定

分取上述8批药材，按照“3.2”项下方法操作，提取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定迷迭香酸的色谱峰面积，代入线性回归方程：

Y＝33163X＋1085.6，

计算出药材中迷迭香酸的含量，测定结果见表3。

表2 迷迭香酸加样回收率

表3 迷迭香酸含量 （mg）

4 讨论

预试验考察了80%甲醇、甲醇、乙醇、50%乙醇、超声30，50，60 min，以及80%甲醇、甲醇、乙醇、50%乙醇加热回流1，1.5，2，3 h[12]，结果表明80%甲醇回流2 h提取效率最高。测定样品8批，最低测定值为迷迭香酸0.149%。以最低测定值的80%设限，迷迭香酸为0.119%，暂定本品按干燥品计算，含迷迭香酸（C18H16O8）不得少于0.12%。

分别采用3种不同品牌色谱柱进行测定，结果表明在不同色谱柱上，迷迭香酸均峰形良好，供试品主峰均能与杂质峰得到基线分离。

本文较好地运用HPLC检测了白苏子中迷迭香酸的含量，方法快速简便，重现性好，为研究白苏子的质量标准提供了可靠的实验及理论依据。

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本文编辑：苏日力嘎

Determination of Rosmarinci Acid Content in Perilla frutescens(L.)Britt. from Different Habitats by HPLC

Li Ting1, Cheng Yan1, Chen Wei3, Yong Jing2

(1. Mingji Hospital of Nanjing City, Jiangsu Nanjing 210019, China; 2. The Third Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Jiangsu Nanjing 210001, China; 3. Suzhou Traditional Chinese Medical Hospital, Jiangsu Suzhou 215009, China)

Objective：To compare the rosmarinic acid content in Perilla frutescens (L.) Britt. from different habitats in order to establish the quality standard for Perilla frutescens. Methods：The rosmarinic acid contents in eight batches of Perilla frutescens preparation were determined by HPLC using Diamonsil C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) chromatographic column. Methanol-0.1% formic acid (40∶60) was served as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 35 ℃, while the detection wavelength was 330 nm, and the sample loading was 10 μL. Results：The rosmarinic acid contents in eight batches of Perilla frutescens preparation were 0.149%～0.196%. Conclusion：The HPLC method for determination of rosmarinic acid content in Perilla frutescens is precise and reproducible, which may be used for the study on quality standard for Perilla frutescens.

Perilla frutescens; Different Habitats; High Performance Liquid Chromatography (HPLC); Content Determination; Rosmarinic Acid

R284.1

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.03.008

2017 - 01 - 19

南京市中医药转化医学基地项目（ZYYZH1304）;南京市中医院科研项目（YJLC201605）

李婷，女，主管中药师。研究方向：中药学。E-mail：yxhgrace@163.com

雍菁，女，主管中药师。研究方向：中药学。E-mail：1565661221@qq.com