烟台地区MTHFR基因C677T位点多态性与原因不明复发性自然流产的相关性研究

石春红 严倩 姜凌

烟台地区MTHFR基因C677T位点多态性与原因不明复发性自然流产的相关性研究

石春红 严倩 姜凌

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T位点多态性与原因不明复发性流产（URSA）的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP），检测烟台地区64例URSA女性和169例正常女性的MTHFR基因C677T位点的多态性。结果URSA患者的MTHFR基因C677T位点TT型、CC型基因与对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；TT基因型的个体发生URSA的危险度在不断的增高（OR=8.463，95%CI：2.060～30.475）。结论烟台地区MTHFR基因677位点突变与URSA相关。

亚甲基四氢叶酸还原酶；基因；多态性；复发性流产

复发性流产（RSA）是指连续发生两次及以上的自然流产，病因复杂，约50%的复发性流产原因尚不明确[1]。MTHFR基因多态性与复发性流产之间的相关性，目前已经引起了国际生殖医学界的广泛关注[2]。选择2012年9月—2014年12月于烟台市烟台山医院产科就诊的64例原因不明复发性流产患者以及就诊的169例产检孕妇进行研究，现将结果汇报如下。

1 资料与方法

1 一般资料

选择2012年9月—2014年12月在烟台市烟台山医院产科就诊的64例原因不明复发性流产患者作为URSA组，年龄23～37岁，平均年龄为（27.7±2.1）岁。选择同期在门诊就诊的169例产检孕妇作为对照组，年龄24～36岁，平均年龄为（26.5±2.8）岁。

1.2 研究方法

两组受试者均在清晨空腹状态下抽取肘静脉血5 ml，送检实验室采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP），对比两组受试者血液标本中MTHFR基因C677T位点的多态性。

1.3 基因多态性判断标准

198bp为MTHFR677基因扩增片段，如C→T突变在677位点，内切酶HinfI就会切断该位点，会产生23bp和175bp和两个片段。677CC酶切后仅产生1个条带198bp；C677T酶切后会产生23bp、175、1983个条带，即为杂合突变，片段大小决定基因型根据电泳凝胶分子标志物（marker）判断[3-4]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计学处理，计数资料采用（n，%）表示，采用χ2检验，对T等位基因在URSA组中表达频率有显著意义的自变量作多因素Logistic分析。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基因型频数HWE 检验结果分析比较

经计算得出，两组调查人群基因型频数分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05），表明具有群体代表性，见表1。

2.2 两组妇女MTHFR基因C677T位点多态基因型分布及等位基因分析频数分析比较

经数据分析显示，两组妇女MTHFR基因C677T位点的基因型分布频数比较中；与对照组相比，TT型在URSA组中分布频率显著升高，差异具有统计学意义（P＜0.05），同时CC基因型在URSA组中表达频率显著降低（P＜0.05）；此外，T等位基因在URSA组中表达频率高于对照组（P＜0.05）。因此，带有TT基因型的个体发生复发性流产的危险度明显增高，是CC基因型个体的8.463倍（OR=8.463，95%CI：2.060～30.475），见表2。

3 讨论

RSA患者中病因不明的患者占40%～50%，治疗效果一般都不理想，不明原因的RSA病因研究以及治疗已经引起了医学界的广泛关注[5]。据研究表明[6]：RSA的发生主要与遗传因素和环境因素有关。妊娠期高Hcy会显著增加母亲血栓形成的危险性，导致胎盘出现血栓栓塞，进而引起流产。高Hcy导致细胞处于高氧化应激状态，进而产生了胚胎毒性作用，致使胚胎异常发育，进而引发流产。近年来有研究发现，URSA可能与胎盘部位的血栓形成有关[7]。在遗传因素方面，MTHFRC677T基因位点的突变已经引起了医学界的广泛关注。MTHFR是一种常见的凝血相关基因，它是调节四氢叶酸代谢和同型半胱氨酸的关键酶。高同型半胱氨酸血症会损伤患者的血管内皮细胞，加速血栓的形成，可通过再甲基化途径和转硫途径完成代谢。目前最为常见的是MTHFR基因第4外显子的C677T碱基突变，该位点突变导致丙氨酸转变成缬氨酸，降低了MTHFR酶的活性，并产生了不可耐热性，从而引起血浆中的Hcy在不断的蓄积。近年来，国外学者还发现[8]，复发性早期流产与血浆中Hcy水平升高有关。本研究发现，病例组纯合突变基因型远高于对照组，并且发生复发性流产的危险性也在明显增高，说明MTHFR677C→T突变极有可能是中国人群复发性流产的遗传易感性因素。本研究发现，MTHFRT的T基因型频率和T等位基因型频率均高于对照组（P＜0.05），因而认为母亲MTHFRC677T位点突变与复发性流产相关。携带易感基因型的孕妇，应当及时的补充维生素B12以及叶酸、降低妊娠期妇女胎盘组织以及血液中的Hcy水平，降低复发性流产的发生率，提高治疗效果。

表1 两组基因型频数HWE 检验结果分析比较 [n（%）]

表2 两组妇女MTHFR基因677位点多态基因型分布及等位基因分析频数分析比较[n（%）]

[1] 孟丽丽，王振花，陈慧，等. 复发性流产的高危因素分析[J]. 广东医学，2013，34（9）：1397-1400.

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Study on the Relationship Between the Polymorphism of MTHFR Gene C677T Locus and Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion in Yantai

SHI Chunhong YAN Qian JIANG Ling Obstetrics Department, Yantai Mountain Hospital, Yantai Shandong 264008, China

ObjectiveTo investigate the relationship between methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene C677T polymorphism and unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA).MethodsPolymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) was used to detect polymorphism of C677T locus in 64 cases of URSA women and 169 cases of normal women MTHFR gene in Yantai.ResultsThe MTHFR gene C677T locus TT type and CC genotype in URSA patients were statistically significant (P＜0.05). The risk of URSA in individuals with TT genotype was increasing (OR= 8.463, 95%CI: 2.060 ～ 30.475).Conclusion677 mutation of MTHFR gene is associated with URSA in Yantai.

methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR); gene; polymorphism; recurrent abortion

R714.21

A

1674-9308（2017）03-0075-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2017.03.041

烟台市烟台山医院产科，山东 烟台 264008