亚麻籽油和橄榄油影响妊娠期糖尿病产妇和新生儿T细胞功能体外研究

(开封市妇幼保健院，河南 开封 475000)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是导致妊娠期高血压的主要原因之一，主要是指妊娠期间发生或者首次发生的不同程度的葡萄糖不耐受，但不排除妊娠前存在糖代谢异常的可能[1]。妊娠期糖尿病与产后糖尿病发生率增高相关，且导致新生儿呼吸窘迫综合症和巨大胎儿等并发症增加[2,3]。妊娠期糖尿病发病机理未阐明，脂肪酸代谢与妊娠期糖尿病或胰岛素抵抗等相关研究是一大研究热点[4,5]。游离脂肪酸是孕妇和新生儿重要的能量物质，其水平可能影响胰岛分泌功能。本研究旨在通过检测妊娠期糖尿病产妇和新生儿的T细胞功能，以及体外给予亚麻籽油和橄槛油处理，从营养学角度阐述亚麻籽油(Linseed oil)和橄榄油(olive oil)对于妊娠期糖尿病的产妇和新生儿的T细胞增殖以及IL-2和IL-4分泌水平，为临床上妊娠期糖尿病饮食指导提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

抽取41例妊娠期糖尿病产妇和新生儿，以及40例正常产妇和新生儿的静脉血各10 mL，肝素抗凝后加Hank’s液稀释，用淋巴细胞分离液进行密度梯度离心，吸取上中层淋巴细胞层。待处理。

1.2 T细胞体外培养

T细胞采用Histopaque 1077(Sigma, Aldrich)试剂盒进行体外提取后用含有小牛血清的1640培养基进行体外培养48 h，培养条件37℃，5% CO2。刀豆蛋白A(Con A, Sigma)刺激T细胞增殖。亚麻籽油和橄榄油的终浓度是30μM。

1.3 MTT法

细胞以5000个/孔的密度种植于96孔板内，当细胞生长融合达70%时，给予细胞相应处置，细胞转染48 h后给予相应药物处理，若无需转染直接用药物处理24 h，然后进行检测。为了避免药物处理时间过长导致混杂因素过多，药物处理时间不超过24 h。药物处理时间达到预定时，每孔加入10μL MTT，在37℃孵育4 h，终止培养。弃掉孔内液体，避光条件下加入200 μL二甲基亚砜，放置摇床晃动10 min使结晶物充分溶解。用酶标仪于490 nm波长处测定各孔的吸光度值，并记录结果。

1.4 ELISA法

T细胞体外培养48 h后，收集细胞上清液，1 500 rpm离心10 min，按照ELISA试剂盒(R&D System, Oxford, UK)进行操作分别检测IL-2和IL-4。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 基本特征

妊娠期糖尿病产妇和正常产妇的基本特征，年龄、母体孕前BMI、妊娠周数、5 min评分、新生儿出生性别、母体孕期甘油三酯、母体孕期胆固醇两组差异无统计学意义(P>0.05)。新生儿出生体重在妊娠期糖尿病组高于正常组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 正常和妊娠糖尿病的产妇生产情况及血脂状态

注：1)与正常组比较，P<0.05

2.2 妊娠期糖尿病和正常组产妇及新生儿体外T细胞增殖水平

刀豆蛋白A具有刺激T细胞增殖作用，体外提取的妊娠期糖尿病和正常组产妇和新生儿的T细胞，在刀豆蛋白A刺激下检测其T细胞增殖水平。妊娠期糖尿病的产妇和新生儿两者的T细胞增殖水平低于正常组的产妇和新生儿，差异具有统计学意义(P<0.05)。体外处理给予胰岛素后，妊娠期糖尿病的产妇和新生儿T细胞增殖水平有所上升，但与对应的正常组产妇和新生儿的T细胞增殖水平有统计学差异(P<0.05)。亚麻籽油降低各组的T细胞增殖水平，妊娠期糖尿病的产妇和新生儿的T细胞增殖水平与正常组之间无显著性差异(P>0.05)。而橄榄油却能反向刺激T细胞增殖，但其水平仍低于正常组的产妇和新生儿(P<0.05)，效果与胰岛素相似。见图1。

图1 正常和妊娠期糖尿病的产妇及新生儿T细胞增殖水平

2.3 妊娠期糖尿病和正常组产妇与新生儿的IL-2和IL-4分泌水平

刀豆蛋白A具有刺激T细胞增殖作用，体外提取的妊娠期糖尿病和正常组产妇和新生儿的T细胞，IL-2分泌水平代表Th1细胞功能，IL-4分泌水平代表Th2细胞功能。妊娠期糖尿病的产妇和新生儿两者的IL-2分泌水平低于正常组的产妇和新生儿，差异具有统计学意义(P<0.05)。

体外处理给予胰岛素后，提高妊娠期糖尿病的产妇和新生儿IL-2分泌水平，但与对应的正常组产妇和新生儿的IL-2分泌有统计学差异(P<0.05)。亚麻籽油降低各组的TIL-2分泌水平，妊娠期糖尿病的产妇和新生儿的IL-2分泌水平与正常组之间无显著性差异(P>0.05)。而橄榄油却能反向刺激IL-2分泌，但其水平仍低于正常组的产妇和新生儿(P<0.05)，效果与胰岛素相似，见图2。而IL-4在妊娠期糖尿病的产妇和新生儿与正常组的产妇和新生儿分泌水平无统计学差异(P>0.05)，仅胰岛素处理能增加妊娠期糖尿病和正常组产妇T细胞的IL-4分泌水平，而亚麻籽油和橄榄油均无影响IL-4分泌作用，见图3。

图2 正常和妊娠糖尿病的产妇及新生儿体外油脂刺激的IL-2分泌水平

图3 正常和妊娠糖尿病的产妇及新生儿体外油脂刺激的IL-4分泌水平

3 讨论

妊娠期糖尿病指妊娠期间发生或者首次发生的不同程度的葡萄糖不耐受，但不排除妊娠前存在糖代谢异常的可能[1]。妊娠期糖尿病发病机理未阐明，脂肪酸代谢与妊娠期糖尿病或胰岛素抵抗等相关研究是一大研究热点[4]。游离脂肪酸和葡萄糖作用相似，是孕妇和新生儿重要的能量物质，其水平可能影响胰岛分泌功能。有关游离脂肪酸和外源性亚麻籽油与橄榄油等对于妊娠期糖尿病的发生发展作用存在一定的争议。脂肪酸在口服葡萄糖耐量过程中起到一定调控作用，在II型糖尿病和妊娠期糖尿病均有所体现[5]。饮食中的短链脂肪酸和ω-3通过GLP-1和PYY分泌调控其代谢[2]，过氧化基、钙离子下调和Fox-3的调控与脂肪酸代谢维持糖代谢稳态相关[3]。

本研究中亚麻籽油降低娠期糖尿病产妇和新生儿与正常产妇和新生儿的T细胞增殖水平和IL-2，妊娠期糖尿病的产妇和新生儿的T细胞增殖水平与正常组之间无显著性差异(P>0.05)。而橄榄油却能反向刺激T细胞增殖和IL-2，但其水平仍低于正常组的产妇和新生儿，效果与胰岛素相似。IL-4分泌水平不受亚麻籽油和橄榄油的影响。

总之，橄榄油具有胰岛素样作用升高妊娠期糖尿病产妇和新生儿的T细胞增殖和IL-2分泌水平，而亚麻籽油相反。从营养学角度给予妊娠期糖尿病孕妇饮食指导改善T细胞功能，为临床上妊娠期糖尿病饮食指导提供理论依据。

[1] Khosrowbeygi A,Shiamizadeh N,Taghizadeh N.Maternal Circulating Levels of Some Metabolic Syndrome Biomarkers in Gestational Diabetes Mellitus[J].Endocrine,2016,51(2):245-255.

[2] Ly LD,Xu S,Choi SK,et al.Oxidative Stress and Calcium Dysregulation by Palmitate in Type 2 Diabetes[J].Exp Mol Med,2017,49(2):291.

[3] Smesny S,Milleit B,Schaefer MR,et al.Effects of Omega-3 PUFA on Immune Markers in Adolescent Individuals at Ultra-high Risk for Psychosis-Results of the Randomized Controlled Vienna Omega-3 Study[J].Schizophr Res,2017(17)：110-117.

[4] Nasiri-Amiri F,Bakhtiari A,Faramarzi M,et al.The Association Between Physical Activity During Pregnancy and Gestational Diabetes Mellitus:A Case-Control Study [J].Int J Endocrinol Metab,2016,14(3):37123-37124.

[5] Nemati R,Lu J,Tura A,et al.Acute Changes in Non-esterified Fatty Acids in Patients with Type 2 Diabetes Receiving Bariatric Surgery [J].Obes Surg,2017,27(3):649-656.