薄层色谱一标多测方法在小儿咳喘灵颗粒中的应用

崔宇宏1，王 玳1，任建平

(1.山西省食品药品检验所，山西 太原 030001；2.山西职工医学院，山西 太原 030012)

小儿咳喘灵颗粒具有宣肺、清热、止咳功效，用于上呼吸道感染，气管炎，肺炎，咳嗽等。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第四册，处方中有麻黄、板蓝根、苦杏仁、金银花、甘草、瓜蒌、石膏7味药材，原标准鉴别项只收载2个理化鉴别，包括1个试管颜色反应及1个泡沫反应，未能完全控制成药质量。为了提高质量标准，控制成药质量，并提高实验效率，达到省时省力的效果，采用薄层鉴别一标多测方法，可在一个薄层色谱条件下尽可能地鉴别多味药材。本实验使用一个供试品溶液、两种展开系统，鉴别了方中板蓝根、苦杏仁、金银花、及甘草4味药材。板蓝根、苦杏仁为一个色谱条件；金银花、甘草为另一个色谱条件。麻黄主含生物碱成分，未能与上述4味药材鉴别合并。

1 试药及试剂

对照药材及对照品：麻黄碱(714-8501)、板蓝根(121177-200302)、苦杏仁(121554-200601)、R，S告伊春(111753-201304)、金银花(110718-200507)、甘草(121303-200502)、绿原酸(110753-200413)、苦杏仁苷(820-9401)、盐酸麻黄碱(714-8501)均购自中国药品生物制品检定所。

样品：多个企业生产样品。

试剂：硅胶G预制板(青岛海洋化工厂，merck板)，其余均为分析纯。

2 实验与结果

2.1 苦杏仁和板蓝根薄层鉴别

采用同一供试品溶液、以苦杏仁对照药材及板蓝根特征成分R，S告伊春为对照，在同一块薄层板上同时鉴别2味药材。

2.1.1 供试品溶液的制备 处方中药材均经过水煎，故选择水饱和正丁醇超声处理提取药材中的成分。取本品8 g，研细，加水饱和正丁醇60 mL，超声处理40 min，滤过，取滤液20 mL备用，其余滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2 对照药材及其对照品溶液的制备 取苦杏仁对照药材各1 g，分别加水100 mL，煎煮30 min，放冷，滤过，滤液用水饱和正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取R，S告伊春对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 阴性对照品溶液的制备(所用药材由生产单位提供) 分别取处方中各药味(除板蓝根、苦杏仁)1/100处方量，模拟“制法”，按供试品溶液的制备方法，分别制备缺板蓝根、苦杏仁的对照溶液。

供试品色谱具有苦杏仁对照药材及R，S告伊春对照品的特征斑点，阴性对照无干扰，重复性、耐用性均符合要求。见图1，2。

图1 苦杏仁薄层鉴别

图2 板蓝根薄层鉴别1缺苦杏仁阴性 2苦杏仁对照药材 3供试品溶液 4供试品溶液 5供试品溶液 6告伊春对照品 7缺板蓝根阴性 8供试品溶液

2.2 甘草、金银花的薄层鉴别

将处方中甘草、金银花的薄层鉴别合并，以一块薄层板、一种展开系统，同时鉴别甘草、金银花两种药材。

2.2.1 供试品溶液的制备 取苦杏仁鉴别项下的供试品溶液。

2.2.2 对照药材及其对照品溶液的制备 取甘草对照药材及金银花对照药材各0.5 g，加水100 mL，煎煮30 min，放冷，滤过，滤液用水饱和正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备(所用药材由生产单位提供) 分别取处方中各药味(除甘草、金银花)1/100处方量，模拟“制法”，分别制备缺甘草、金银花的对照溶液,按供试品溶液的制备方法制备，即得。

供试品色谱具有甘草对照药材、金银花对照药材及绿原酸对照品的特征斑点，阴性对照无干扰，重复性、耐用性均符合要求。见图3，4。

图3 金银花鉴别

图4 甘草鉴别1供试品溶液 2缺甘草阴性液 3供试品溶液 4供试品溶液 5缺金银花阴性液 6供试品溶液 7供试品溶液 8甘草对照药材 9供试品溶液 10供试品溶液 11绿原酸对照品 12供试品溶液 13供试品溶液 14金银花对照药材

2.3 麻黄薄层鉴别

麻黄主含生物碱，未能与上述薄层合并。

2.3.1 供试品溶液的制备 根据麻黄药材中麻黄碱有效成分的性质，碱化后用有机溶剂萃取，浓缩后作为供试品溶液，经验证方法简单易行、提取速度快，效率高。取本品3 g，加水20 mL使溶解，加氨试液使成碱性，再加氯仿15 mL振摇提取，分取氯仿液，浓缩至约1 mL，作为供试品溶液。

2.3.2 对照品溶液的制备 取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.3 阴性对照品溶液的制备(所用药材由生产单位提供) 分别取处方中各药味(除麻黄)1/30处方量，模拟制剂工艺, 并按供试品溶液的制备方法，制备缺麻黄的阴性溶液。

图5 麻黄的薄层鉴别1供试品溶液 2供试品溶液 3供试品溶液 4供试品溶液 5供试品溶液 6麻黄碱对照品 7麻黄碱对照品 8缺麻黄阴性液

3 讨论

为了控制中成药的质量， 薄层色谱是最主要的鉴别方法，但中成药处方通常药味较多，需建立多个薄层色谱条件与方法，以鉴别不同的药材，费时费力。薄层鉴别的一标多测方法，即采用一个供试品溶液、一种色谱条件下鉴别多味药材的方法，已成为质量标准制定的趋势。

将处方中板蓝根、苦杏仁2味药材的薄层鉴别合并，金银花、甘草2味药材的薄层鉴别合并。本研究建立了使用3块薄层板鉴别处方中5味药材的方法。

供试品溶液的制备，中药材的提取方法通常比较复杂，提取步骤繁琐，费时费力。不同的药材采用同一供试品溶液将会大大提高效率。小儿咳喘灵颗粒中的药材均经过水煎煮，故采用水饱和正丁醇作为提取溶剂以提取制剂中的水溶性成分，苦杏仁、板蓝根、甘草、金银花的供试品溶液均采用同一个供试品溶液。

展开剂与显色剂的选择，金银花和甘草的鉴别，首先参考药典甘草项下的展开剂展开后[1]，在UV(365 nm)下检视，发现金银花和绿原酸斑点清晰，再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰后，观察甘草的斑点。苦杏仁和板蓝根的鉴别，首先参考药典苦杏仁与板蓝根[1]的鉴别方法，均未成功，经过多次摸索，在UV365 nm下观察到苦杏仁的荧光斑点，再置碘蒸气中熏观察板蓝根中特征成分R，S告伊春的斑点。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(2015年版一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2015.