XRCC1基因多态性与弥漫大B细胞型非霍奇金淋巴瘤预后的关系

高宇 魏楠 李梦洁 江皓

XRCC1基因多态性与弥漫大B细胞型非霍奇金淋巴瘤预后的关系

高宇 魏楠 李梦洁 江皓

目的 探讨X射线损伤交叉互补蛋白1（XRCC1)基因多态性与弥漫大B细胞型非霍奇金淋巴瘤（DLBCL）患者预后的关系。方法 选取XRCC1基因3个单核苷酸多态性（SNPs）对DLBCL患者进行基因分型，并回顾分析患者预后情况，采用logistic回归分析XRCC1基因型与患者预后的关系。结果 入选65例患者，平均年龄（59.7±8.0岁）；其中肿瘤相关死亡患者31例（47.7%）。XRCC1基因rs25487基因型频率在死亡组与存活组无统计学差异（P＞0.05），而等位基因频率两组间有统计学差异，其中A等位基因频率在死亡组中明显高于存活组（40.3%vs 22.1%，P＜0.05）。AA、GA、GG 3组基因型患者肿瘤相关病死率分别为75.0%（6/8）、54.2%（13/24）、36.4%（12/33）。rs25487位点A等位基因的加性模型中，每增加一个拷贝的A等位基因，风险是增加前的2.208倍（95%CI：1.039～4.694，P＜0.05）。校正年龄、性别、吸烟、B症状及和治疗方式后，A等位基因仍然显著增高患者死亡风险（OR=2.382，95%CI：1.057～5.367，P＜0.05）。结论 XRCC1基因rs25487多态性与DLBCL的预后相关。

非霍奇金淋巴瘤 XRCC1基因 多态性 预后

非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma，NHL）是一种常见的血液系统恶性肿瘤，近30年来发病率有明显的增加趋势，目前已成为全球癌症死亡的第五大病因。NHL发病危险因素除了病毒感染、大剂量辐射、接触有害的化工原料、服用某些免疫抑制剂导致免疫功能障碍外，遗传易感性在其发病中也起着重要作用[1]。X射线损伤交叉互补蛋白1（X-ray repair cross complementary protein 1，XRCC1）是一种与碱基切除修复/单链断裂修复直接相关的蛋白，参与铂类药物引起的DNA损伤修复过程[2]。有研究显示XRCC1基因多态性和NHL的发生密切相关[3-4]，但是目前关于XRCC1基因多态性与NHL预后的关系尚未明确。由于不同病理类型的NHL患者预后不同，故本研究以NHL的常见类型弥漫大B细胞型淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）患者为对象，探讨DLBCL患者XRCC1基因多态性与其预后的关系。

1 对象和方法

1.1 对象 选择浙江医院肿瘤科及血液科2009年3月1日至2014年3月1日病理明确诊断的DLBCL患者65例，排除4例非肿瘤相关死亡患者。患者纳入标准：（1）经病理组织学检查确诊为DLBCL；（2）经过系统规范化疗。排除标准：（1）伴有全身多器官功能衰竭者；（2）伴有其他恶性肿瘤者；（3）观察期内发生非肿瘤相关死亡患者。其中男45例，女20例，女性患者占33.3%；年龄40～76（59.7±8.0）岁。所有患者均为南方汉族。42例（64.6%）患者有B症状，B症状定义为发热（体温38℃以上）、盗汗、体重减轻（就诊前6个月内无其他原因体重减轻10%以上）。30例（46.2%）患者有吸烟史，吸烟定义为一生中连续或累积吸烟6个月或以上者。患者治疗结束后每3～6个月进行肿瘤状态评估，随访形式为门诊、住院复查及电话随访，截止观察日期为2015年3月1日。NHL相关死亡指患者死于本病及本病相关并发症。

1.2 治疗方案 入选患者采用R-CHOP方案及R-EPOCH方案进行化疗。R-CHOP方案：利妥昔单抗375mg/m2静脉滴注，第1天；环磷酰胺750mg/m2静脉滴注，第1、8天；阿霉素40mg/m2或表阿霉素50mg/m2静脉滴注，第1天；长春新碱1.4mg/m2静脉滴注，第1、8天；强的松80mg/m2口服，第1～5天；21d为1个周期。R-EPOCH方案：利妥昔单抗375mg/m2静脉滴注，第1天；第3天开始用EPOCH方案，依托泊苷50mg/（m2·d）、阿霉素10 mg/（m2·d）、长春新碱0.4mg/（m2·d）稀释于500ml 0.9%氯化钠注射液中持续静脉滴注，连续4d，采用输液泵控制滴数；环磷酰胺750mg/（m2·d）静脉注射，第8天；强的松80mg/（m2·d）口服，第3～8天。每3周为1个周期，至少治疗4个周期。其中采用放化疗联合的患者共11例。

1.3 样本处理、基因选择及分型 抽取患者外周静脉血2～3ml，EDTA抗凝，按照Omega公司血标本DNA提取试剂盒操作步骤提取DNA，置于-20℃冰箱长期保存。按照最小等位基因频率（MAF）＞0.05的标准，从在线HapMap CHB数据库的XRCC1基因中选取3个单核苷酸多态性（SNPs）位点rs25489、rs25487、rs1799782，基本信息见表1。采用Primer 3.0软件进行引物设计，引物由上海生工生物工程公司合成。扩增参数：95℃15min，94℃ 30s，58℃ 90s，72℃ 60s，30个循环，最后72℃延伸10min。SNP基因分型采用Beckman Coulter公司的GenomeLab SNP stream基因测序平台及系统自带的GetGenos 2.2图形分析软件。

表1 XRCC1基因SNP位点信息

1.4 统计学处理 应用SAS统计软件（Version 9.0，SAS Institute Inc.Cary，NC，USA）。正态分布的计量资料以表示，两样本间比较采用t检验；非正态分布的计量资料以中位数和四分位数间距（IQR）表示，比较采用Wilcoxon秩和检验。计数资料组间比较采用χ2检验或Fisher’s确切概率法检验。SNPs哈代温伯格（Hardy-Weinberg）平衡检验采用χ2检验。XRCC1基因型与患者预后之间的关系采用logistic回归分析。

2 结果

2.1 患者基线特征及随访结果 本研究入选的65例DLBCL患者中发生肿瘤相关死亡的共31例（47.7%）。死亡组患者年龄（61.7±5.2）岁大于存活组（57.8±8.7）岁，有统计学差异（P＜0.05），两组患者中性别分布、吸烟、B症状、放化疗联合的比例均无统计学差异（均P＞0.05），见表2。

表2 患者基线特征

2.2 XRCC1基因型及等位基因分布频率 XRCC1基因SNP的分型成功率为100%。死亡组与存活组患者SNP频率分布均符合哈代温伯格（Hardy-Weinberg）平衡。本研究中3个SNP之间连锁不平衡程度较弱，未发现与肿瘤相关死亡的单倍体型。死亡组和存活组患者间XRCC1基因rs25487位点基因型分布无统计学差异（P＞0.05），但是等位基因频率有统计学差异（P＜0.05），其中死亡组rs25487的A等位基因频率明显高于存活组（40.3%vs 22.1%，P＜0.05）。rs25489及rs1799782基因型及等位基因频率两组间均无统计学差异（均P＞0.05），见表3。

2.3 XRCC1基因多态性与预后相关性 XRCC1基因rs25487位点AA、GA、GG 3组基因型NHL患者相关病死率分别为75.0%（6/8）、54.2%（13/24）、36.4%（12/33），肿瘤相关病死率随着rs25487位点A等位基因拷贝增加而增加。在rs25487位点A等位基因的加性模型中，每增加一个拷贝的A等位基因，患者死亡风险是增加前的2.208倍（95%CI：1.039～4.694，P＜0.05）；校正患者年龄、性别、吸烟、B症状及治疗方式后，rs25487位点上的A等位基因仍然显著增高患者死亡风险，是增加前的2.382倍（95%CI：1.057～5.367，P＜0.05），见表4。

表3 XRCC1基因型及等位基因频率分布[例（%）]

表4 XRCC1基因多态性与预后分析

3 讨论

XRCC1基因是一种重要的DNA修复基因，它所编码的蛋白在基因切除修复和DNA单链断裂修复过程中都发挥着十分重要的作用。XRCC1蛋白没有直接的催化活性，但它可以与DNA聚合酶β、DNA连接酶Ⅲ、聚二磷酸腺苷核糖多聚酶（PARP）结合形成复合体，发挥骨架蛋白的作用，参与碱基切除修复和DNA单链断裂修复[2]。

目前，已有较多的研究发现XRCC1基因rs25487位点多态性与血液系统肿瘤发病及预后密切相关。Wang等[5]研究发现XRCC1基因多态性与儿童急性淋巴细胞性白血病发病密切相关，其中携带rs25487位点的A等位基因的亚洲儿童患急性淋巴细胞白血病的风险增加。Monroy等[3]对200例霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s lymphoma，HL）患者和220例对照者进行了XRCC1基因多态性与HL发病关系研究，结果显示rs25487位点的A等位基因突变可使HL患病风险增加62%。Liu等[6]对中国人群进行的XRCC1与NHL相关性研究中发现，重度吸烟患者组中XRCC1基因rs25487位点GA与AA基因型的患者发病风险较GG基因型高3倍。Guillem等[7]研究了XRCC1基因rs25487位点多态性与自体造血干细胞移植术后淋巴瘤（包括NHL）患者预后的相关性，发现携带突变型A等位基因的患者死亡风险是野生型患者的2倍，而杂合突变和纯合突变基因型患者发生治疗相关急性髓系白血病的风险也明显增加。然而，最近Li等[8]的一项荟萃分析显示rs25487位点A等位侧是NHL发病的保护因素，与本研究结果不一致，其原因主要是由于基因多态性存在地域及种族差异性，该荟萃分析纳入了欧洲高加索人群及亚洲非汉族人群。此外，还有较多研究发现XRCC1基因rs25487位点多态性与其他肿瘤发病及预后密切相关[9-10]。

本研究发现，XRCC1基因的rs25487位点多态性与DLBCL患者预后密切相关，AA、GA、GG 3组基因型患者的肿瘤相关病死率分别为75.0%、54.2%和36.4%，随着A等位基因拷贝增多，患者肿瘤相关病死率也逐渐升高。XRCC1基因rs25487位点突变会导致其第399密码子编码的氨基酸由精氨酸（Arg）变为谷氨酰胺（Gln），第399密码于位于PARP结合区域，因此这3个位点氨基酸的改变，可能改变XRCC1的功能[11-12]。rs25487位点的变异降低了XRCC1的修复能力，从而使DNA加合物水平升高，体细胞突变及染色体畸变增加，同时该位点的变异会影响XRCC1基因编码蛋白的氧化还原功能及DNA修复功能，将直接决定和影响癌细胞对铂类化疗药物耐药性的高低，使肿瘤恶化进展的风险增加[13]。其中携带rs25487位点A等位基因的患者对化疗药物的反应性较差，从而影响其预后及远期生存率。

本研究结果提示XRCC1基因rs25487位点多态性是NHL患者预后的预测因子，这提示未来可能可以通过对NHL患者进行基因分型，从而评估患者的肿瘤相关死亡风险，为NHL患者个体化治疗提供依据。但本研究也存在一些不足之处，首先样本量有限，由于各种客观条件限制，未能够进一步增加样本量，可能对统计效能有一定影响，后续需累计病例样本进一步研究；另外本研究的纳入人群均为中国南方汉族，XRCC1基因多态性存在地域种族差异性，故研究结论不能一概而论，尚需在不同地域及不同种族进一步验证。

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Association between DNA X-ray repair cross complementary protein 1（XRCC1）polymorphisms and clinical outcome of patients with diffuse large B-cell lymphoma

GAO Yu,WEI Nan,LI Mengjie,et al.Department of Hematology,Zhejiang Hospital,Hangzhou 310013,China

【 Abstract】 Objective To investigate the association of DNA X-ray repair cross complementary protein 1(XRCC1) polymorphisms with the clinical outcome of patients with non-Hodgkin's lymphoma(NHL). Methods Sixty five patients with diffuse large B-cell lymphoma(DLBCL)(mean age of 59.7±8.0 years)were enrolled in the study,among whom 31(47.7%)died from NHL during follow-up.Three single nucleotide polymorphisms(SNPs)in XRCC1 gene of patients were genotyped.Logistic regression analyses were used to compute odds ratios(ORs)and 95%confidence intervals(CIs). Results Among three SNPs, frequency of A allele of rs25487 was significantly higher in death group than that in survival group(40.3%vs.22.1%,P＜0.05).The death rates of patients with AA,GA,and GG genotype were 75.0%(6/8),54.2%(13/24)and 36.4%(12/33),respectively.A allele of rs25487 increased the risk of death in additive model with odds ratio(OR)of 2.208(95%CI:1.039～4.694,P＜0.05).After adjusting for age,sex,smoking,B symptoms and treatment,the significance still remained with OR=2.382(95%CI:1.057～5.367,P＜0.05). Conclusion rs25487 of XRCC1 gene may be correlated with outcome of DLBCL patients.

Non-Hodgkin's lymphoma XRCC1 gene Polymorphism Prognosis

2015-08-24）

（本文编辑：田云鹏）

310013 杭州，浙江医院血液科

高宇，E-mail：zjyyzlk@163.com