高磷刺激下尿毒症患者甲状旁腺细胞增生的临床研究

洪艳，宋丹

(无锡市第二人民医院肾内科，江苏 无锡 214000)



高磷刺激下尿毒症患者甲状旁腺细胞增生的临床研究

洪艳，宋丹

(无锡市第二人民医院肾内科，江苏 无锡 214000)

目的：探讨尿毒症时高磷通过局部环氧化酶2(cyclooxygenase 2，COX2)途径对甲状旁腺细胞增生和功能亢进的刺激效果。方法：对19例行甲状旁腺切除术的尿毒症患者甲状旁腺组织进行研究。通过免疫组化和免疫共染色法的方法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和COX2的表达和分布。将培养的原代甲状旁腺细胞分为正常对照和高磷干预组，用Western印迹法和RT-PCR法，分别测定甲状旁腺激素(iPTH)表达水平。结果：62枚尿毒症甲状旁腺结节中均观察到COX2和PCNA阳性细胞高表达。高磷刺激下，体外原代培养的甲状旁腺细胞中，甲状旁腺激素分泌显著增加， PCNA和COX2蛋白及基因表达也显著增加。结论：尿毒症时高磷会通过局部环氧化酶2(COX2)途径对甲状旁腺细胞增生和功能亢进产生明显的刺激。

尿毒症；甲状旁腺激素；细胞增生；高磷血症

尿毒症患者容易并发甲状旁腺功能亢进，导致甲状旁腺增生[1]。研究发现，环氧化酶(cyclooxygenase，COX) 在癌前期病变及恶性肿瘤中会存在高表达现象，是导致肿瘤细胞增生的重要因素之一[2]。本研究中，笔者选择19例行甲状旁腺切除术的尿毒症患者甲状旁腺组织进行研究，探讨尿毒症时高磷通过局部环氧化酶2(cyclooxygenase 2，COX2)途径对甲状旁腺细胞增生和功能亢进的刺激效果。现将本研究相关结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

选择19例行甲状旁腺切除术的尿毒症患者甲状旁腺组织进行研究，实验组织均来自本院2012年12月至2013年12月19例行甲状旁腺全切除加自体前臂移植术的毒症患者。

1.2 方法

兔抗人COXl、兔抗人COX2、鼠抗人增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)试剂盒均购自上海研谨生物科技有限公司，利用免疫组化和免疫共染法观察增殖细胞核抗原(PCNA) 以及COX2的表达和分布情况。对实验所用组织进行原代培养，并制备细胞悬液备用。分别予以正常磷和高磷干预，检测其甲状旁腺激素(parathyroid hormone，iPTH)水平。利用 Western印迹法和实时PCR方法检测实验组织，观察 COX2和PCNA的表达情况。

1.3 统计学分析

2 结果

手术一共获得62枚尿毒症甲状旁腺结节。

2.1 COX2表达与分布情况分析

较之正常组织，尿毒症患者甲状旁腺组织中COX2的阳性指数显著增大，其中结节性增生甲状旁腺组织显著低于弥漫性增生甲状旁腺组织，经比较差异有统计学意义(P<0.05)，具体如图1所示。

2.2 COX2与甲状旁腺增生关系分析

甲状旁腺细胞增生与COX2表达之间存在一定的关系，弥漫性增生甲状旁腺组织中， COX2阴性细胞中21.50%呈PCNA阳性，COX2阳性细胞中80.60%呈PCNA阳性，经比较差异有统计学意义，(P<0.05)，具体如图2所示。

2.3 高磷对甲状旁腺细胞分泌功能的影响分析

随着培养时间的增加，两组组细胞上清iPTH水平均出现上升现象，12 h之后，高磷组iPTH水平开始维持显著高于对照组的状态(P<0.05)。具体如图3所示：

2.4 高磷对甲状旁腺细胞COX2和PCNA蛋白及mRNA表达的影响分析

经实时定量PCR检测和Westem印迹检测，均显示高磷组甲状旁腺细胞中COX2和PCNA的蛋白表达显著高于正常磷组(均P<0.05)。具体如图4所示。

3 讨论

甲状旁腺功能亢进是慢性肾脏病患者透析后出现的常见并发症，常导致患者钙、磷和骨代谢异常[3-4]。甲状旁腺主要调节人体钙和磷的代谢，随着尿毒症病情的加重，引起其甲状旁腺增生，导致其调节功能出现紊乱，继发性甲状旁腺功能亢进[5-7]。有学者通过研究发现[8]，尿毒症患者的主动脉钙化程度和自身的血钙、血磷代谢异常之间会呈现出正相关关系，且与甲状旁腺激素水平之间呈现出正相关关系。引起血液中甲状旁腺激素异常，而甲状旁腺激素水平升高会引起骨质脱钙，这也是引起全身关节疼痛和骨骼缩短的病因。研究发现[9]，在甲状旁腺功能亢进的发生过程中，高磷以及成纤维细胞生长因子(FGF) 会参与其中。还有学者通过研究发现[10]，人甲状旁腺组织中会出现COX2的表达。本次研究结果显示，62枚尿毒症甲状旁腺结节中均观察到COX2和PCNA阳性细胞高表达。在正常的甲状旁腺组织中，极少存在COX2阳性细胞，但在尿毒症甲旁亢患者甲状旁腺组织中则出现COX2的高表达现象。且COX2在弥漫性增生甲状旁腺组织中的表达要明显高于其在结节性增生甲状旁腺组织中的表达。有学者通过研究[11]，分析环氧化酶2(COX2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对尿毒症大鼠甲状旁腺(PG)异常增生的影响，发现选择性COX2抑制剂塞来昔布可以显著抑制尿毒症大鼠甲旁亢和甲状旁腺增生。张倩[12]也通过研究发现，在很多癌前病变及肿瘤组织中均能发现COX2与mPGES1呈现出协同高表达的情况，该通路代谢产生的PGE2的受体EP2表达增加。且表达的阳性率越高，肿瘤的恶性程度越高。对于慢性肾衰竭患者而言，大多会出现高磷、低钙等情况，在这些因素的持续刺激下，患者的甲状旁腺便会从正常低分化状态不断向着增生状态发展，导致甲状腺细胞增生等的出现，甚至导致单克隆结节等[13]。本次研究结果还显示，体外原代培养甲状旁腺细胞中，高磷状态下，iPTH分泌会出现显著的增加，并显著上调PCNA及COX2蛋白、基因表达。即表明，在甲状旁腺局部会出现COX2异常代谢的情况，并有可能与早中期甲状旁腺组织增生的发生、发展过程存在一定的关系，并参与其中。甲状旁腺组织结节性增生的出现会导致增生现象的活跃，并大多为单克隆样增生[14]。而在结节性和弥漫性增生的甲状旁腺组织中，绝大多数COX2阳性细胞均同时表达PCNA。这一结果还进一步表明，COX2的表达与甲状旁腺细胞增生有关，并参与其中。另外，还有学者通过研究报道[15]，除高磷刺激之外，缺乏维生素D以及低钙等因素也可能会导致COX2出现异常代谢。人体中的血钙通过与细胞膜上的钙敏感受体胞外进行结合可以对胞质内的花生四烯酸予以有效调节，从而对花生四烯酸上游途径磷脂酶A2 活性产生影响。但是，其是否会对下游COX2代谢途径产生影响还需要进一步分析研究。因此，本研究还存在一定的不足之处，还需要在今后的研究中予以进一步补充和完善。

综上所述，尿毒症时高磷会通过局部环氧化酶2(COX2)途径对甲状旁腺细胞增生和功能亢进产生明显的刺激，局部COX2异常代谢异常可能会导致尿毒症患者出现甲状旁腺细胞增生。

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(学术编辑：刘红)

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Clinical research on high phosphorus stimulate uremia parathyroid cell hyperplasia

HONG Yan,SONG Dan

(RenalDepartment，WuxiNo.2People’sHospital,Wuxi214000,Jiangsu,China)

Objective：To explore the stimulating effect of uremia high phosphorus by topical cyclooxygenase 2(COX2) pathway of hyperthyroidism on proliferation and function of parathyroid cells.Methods：19 cases of parathyroid tissue of uremic patients underwent parathyroidectomy were selected to study.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and the expression and distribution of COX2 were observed by immunohistochemistry and immuno CO staining method.And culture of human parathyroid cells in primary,after the normal and high phosphorus intervention,detection of the parathyroid hormone (iPTH) level;and the expression was observed in the COX2 and PCNA by Western blotting and real-time PCR method.Results：62 pieces of uremia parathyroid nodules were observed in the high expression of COX2 and PCNA positive cells.Primary culture in vitro of parathyroid cells,high phosphorus conditions.There is a significant increase in iPTH secretion,expression and the significant increase in PCNA and COX2 protein,gene.Conclusion：There is obvious stimulation of uremia high phosphorus will by topical cyclooxygenase 2 (COX2) pathway on proliferation and function of parathyroid cell hyperfunction.

Uremia;Parathyroid hormone;Cell proliferation;Hyperphosphatemia

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.02.17

南京医科大学科技发展基金面上项目(2013NJMU190)

2015-05-15

洪艳(1985-)，女，硕士，主治医师。E-mail：hong1985yan@163.com

时间：2016-4-25 11∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160425.1131.034.html

1005-3697(2016)02-0208-03

R582+.1

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