半乳凝素-3在宫颈上皮瘤变和宫颈鳞状细胞癌中的表达

唐　瑶， 何　丽， 李珏杉

(成都市妇女儿童中心医院 妇科， 四川 成都　610000)



半乳凝素-3在宫颈上皮瘤变和宫颈鳞状细胞癌中的表达

唐瑶， 何丽， 李珏杉

(成都市妇女儿童中心医院 妇科， 四川 成都610000)

目的： 探讨半乳凝素-3(Galectin-3)在宫颈上皮瘤变(CIN)、宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其意义。方法： 选择80例宫颈鳞状细胞癌组织标本、60例CIN标本及20例正常宫颈组织标本作为研究对象，采用免疫组化法检测组织中Galectin-3蛋白表达，观察不同CIN分级及宫颈鳞状细胞癌患者的分化程度、病灶大小、是否发生淋巴转移、年龄及临床分期与Galectin-3蛋白阳性表达率的关系。结果： 3组Galectin-3蛋白阳性表达率比较，宫颈鳞状细胞癌组织中显著高于CIN和正常宫颈组织(P<0.05)，CIN组织和正常宫颈组织差异无统计学意义(P>0.05)；不同CIN分级患者组织中Galectin-3蛋白阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；宫颈鳞癌组织中Galectin-3蛋白阳性表达率在低分化、病灶≥2cm及癌细胞未发生淋巴转移患者中显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；在不同年龄和不同临床分期患者间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论： 宫颈鳞癌组织中Galectin-3蛋白阳性表达率显著增高，与患者的癌细胞的分化程度、病灶大小及淋巴结转移有关。

半乳凝素-3； 宫颈上皮瘤变； 宫颈鳞状细胞癌； 免疫组织化学； 淋巴转移； 肿瘤分期

[Abstract]Objective: To investigate the expression and significance of -3 (Galectin-3) in cervical squamous cell carcinoma (CIN) and cervical squamous cell carcinoma (SCC). Methods： 80 cases of cervical squamous cell carcinoma tissue specimens and 60 cases of CIN tissues, 20 cases of normal cervical tissue specimens were collected, using immunohistochemical method to detect the expressive intensity of galectin-3 in three groups, and analyzing galectin-3 protein and cervical squamous cell carcinoma patients clinical pathological features. Results: In squamous cell carcinoma of cervix galectin-3 protein positive expression rate was 82.50% significantly than 31.67% in CIN tissues and normal cervical tissues of 35.00%, the difference has statistical significance (P<0.05); normal cervical tissue and CIN and galectin-3 protein positive expression rate differences had no statistical significance (P>0.05). Cervical squamous cell carcinoma in galectin-3 protein positive expression rate in patients with different degree of differentiation, tumor size, whether lymph node metastasis has a statistically significant relationship (P<0.05), and the age of patients, the clinical staging was not significant (P>0.05). Conclusion: The positive expression rate of Galectin-3 protein in cervical squamous cell carcinoma was significantly increased, and it had a certain relationship with the degree of differentiation, the size of the lesion and lymph node metastasis.

[Key words]Galectin-3; cervical intraepithelial neoplasia; cervical squamous cell carcinoma; immunohistochemistry; lymphnode metastasis; tumor stage

宫颈癌以及宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是宫颈细胞长期病变的结果，大多学者认为宫颈上皮HPV病毒感染是导致CIN及宫颈原位癌连续性病变的主要因素，但近年来的研究发现，单纯的HPV感染不足以导致宫颈原位癌或者浸润型癌的发生[1-2]。有学者提出细胞增殖周期调节、代谢以及细胞生理特征调控可能参与了宫颈病变的发生过程，半乳凝素-3(Galectin-3)是一个富含多N-乙酰基乳糖的外源凝集素家族成员，在调节机体免疫反应、血管新生和肿瘤进展等方面具有重要的意义，特别是对于早期异常增生或者肿瘤细胞同型诱导聚集作用更为明显[3-4]。相关研究证实Galectin-3在乳腺癌、卵巢癌以及甲状腺癌等恶性肿瘤中异常表达，并与肿瘤的临床分期、淋巴转移等临床特征相关[5-6]。关于Galectin-3 在宫颈病变中的研究较少。本研究观察宫颈鳞状细胞癌组织、CIN及正常宫颈组织中Galectin-3蛋白表达水平，为研究宫颈癌的发生机制提供参考。

1　资料与方法

1.1一般资料

收集2013年1月～2015年1月宫颈鳞状细胞癌组织标本80例、CIN标本60例以及正常宫颈组织标本20例。80例宫颈鳞状细胞患者， 39～59岁，平均(46.3±6.9)岁；癌细胞高分化10例，中分化21例，低分化49例；临床分期为Ⅰ期35例，Ⅱ期29例，Ⅲ期16例。60例CIN组患者，33～57岁，平均(44.6±9.0)岁；CINⅠ级26例，Ⅱ级22例，Ⅲ级12例。20例正常宫颈组织人群， 35～57岁，平均(46.1±7.2)岁。宫颈鳞癌组织、CIN组织均来源于手术后标本，宫颈鳞癌患者术前均未接受放化疗及免疫治疗； 正常宫颈组织来源于常规妇科检查获取的正常宫颈组织；纳入研究对象的各项资料完整。

1.2方法

1.2.1组织标本处理采用石蜡切片脱蜡至水，切片厚度3 mm，3% H2O2室温孵育 5 min，去离子水冲洗3次， 3 min/次，采用浓度为10% 牛奶蛋白(1 g蛋白加入100 mL纯水)封闭，室温孵育5 min，加入Galectin-3抗体(鼠来源，南京碧云天生物科技有限公司)， 37 ℃ 孵育 2 h，PBS缓冲液冲洗3次，5 min/次，滴加HRP标记的二抗(兔来源，购自罗氏检测公司)，37 ℃ 孵育 30 min，PBS 冲洗3次，5 min/次，加入 NBT/BCIP色剂显色 5 min，复染，脱水，透明，封片，镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司，配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。

1.2.2结果判定及评分Galectin-3蛋白的阳性主要着色于细胞浆，在细胞核及细胞表面也有少量表达，呈黄色、棕黄色、褐色表达。(1)根据着色强度进行评分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为褐色或黑色。(2)根据阳性细胞比例进行评分：阳性细胞数<10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。两种积分相乘总分<3分为阴性，≥3分为阳性。

1.3观察指标

比较3组被检者组织中Galectin-3蛋白表达阳性率，按年龄、癌细胞分化程度、病灶大小、临床分期、是否有淋巴转移对宫颈鳞状细胞癌患者进行分组，记录各组间的Galectin-3蛋白阳性表达病例数，分析不同细胞分化程度、病灶大小、是否发生淋巴转移、年龄及临床分期与Galectin-3蛋白表达的关系。

1.4统计学方法

2　结果

2.1Galectin-3蛋白表达

3组组织中均有Galectin-3蛋白表达，细胞浆中均可见黄色、棕黄色、褐色颗粒(图1)，3组Galectin-3蛋白阳性表达率比较，宫颈鳞状细胞癌组织显著的高于CIN组织和正常宫颈组织，差异有统计学意义(χ2=37.144、χ2=18.316，P<0.05)，CIN组织和正常宫颈组织差异无统计学意义(χ2=0.076，P>0.05)。见表1。

表1　3种子宫颈组织标本中Galectin-3蛋白表达

注：为A为宫颈鳞癌组织，B为CIN组织，C为正常宫颈组织图1　3种组织子宫颈标本中Galectin-3的表达(SP，×200)Fig.1　SP staining of 3 tissue samples

2.2不同CIN分级组织中Galectin-3蛋白表达

不同CIN分级组织中Galectin-3蛋白表达阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　不同CIN分级子宫颈组织中Galectin-3蛋白表达(n，%)

2.3Galectin-3蛋白表达与子宫颈鳞癌患者临床病理特征的关系

宫颈鳞癌组织中Galectin-3蛋白阳性表达率在低分化、病灶≥2 cm及癌细胞未发生淋巴转移患者显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)；在不同年龄和不同临床分期患者间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

3　讨论

近年来性生活紊乱、性伴侣的频繁更换以及过早地进行性生活等，均可促进宫颈CIN以及宫颈癌的发生，相关研究证实CINI的发病率在年龄18～28岁可达2.5%以上，CINII-III级的发病率也可达0.7%以上[7-8]。宫颈HPV病毒感染通过整合E6/E7病毒基因进入柱状上皮，经不断的扩增繁殖，促进上皮细胞增殖周期失调，细胞侵袭和转移能力均明显增加，进而调控细胞增殖、凋亡、分化、血管侵袭以及早期肿瘤细胞的浸润。Galectin-3作为凝集素家族成员，由2个糖识别结构区域以及胶原蛋白和纤维蛋白C5融合结构，14号染色体的相关Galectin-3基因编码和翻译成功后，Galectin-3蛋白可以通过其氨基末端的巯基多重功能区域，进入宿主细胞核发挥调控细胞增殖和分化等生物学活性作用[9-10]。有研究发现，Galectin-3在乳腺癌以及卵巢癌中的平均阳性表达率可分别达45%、37%，且随临床分期、淋巴转移率增高、细胞分化的降低， Galectin-3的阳性表达率升高[11-12]。然而迄今为止对于Galectin-3在宫颈CIN以及宫颈癌中的研究报道较少，仅有部分学者认为Galectin-3的表达与宫颈癌的病死率有一定的关系[13]。

表3　Galectin-3蛋白表达与子宫颈鳞癌患者临床病理特征的关系

本研究发现宫颈癌组患者中Galectin-3的阳性表达率可达80%以上，明显高于CIN组以及正常对照组，免疫组化切片分析可见Galectin-3主要表达于宫颈鳞状上皮增殖较为活跃的区域，且细胞的异型性越为明显，Galectin-3的表达强度越高，提示Galectin-3蛋白的异常表达在宫颈癌早期发生发展过程中可能发挥了重要的调节作用。但正常对照组以及宫颈CIN组患者中并未发现Galectin-3表达的差异，考虑在正常宫颈上皮发展至宫颈CIN的过程中，HPV感染可能发挥了主导作用，而Galectin-3的生物学活性作用不明显，另一方面也可能与本次研究纳入的低级别的CINI级病例数量较多有关。对于不同分级的CIN中Galectin-3表达阳性率的分析发现，Galectin-3的表达并未随着CIN病变等级的上升的升高，表明CIN分期并不影响Galectin-3的表达，其表达率基本维持在15%左右，持续性地维持在较低的水平。本研究重点探讨Galectin-3与宫颈癌患者相关临床特征间的关联，结果提示，低分化的宫颈癌患者Galectin-3阳性率达到了70%，而肿瘤病灶>2 cm以及发生了淋巴结转移的患者Galectin-3的阳性率也可达60%左右，明显高于低分化组、病灶<2 cm组以及未转移组，表明Galectin-3的表达与宫颈癌患者的临床病理特征具有密切的关系。肿瘤病灶>2 cm的患者，其对于宫旁组织的浸润率较高，浸润程度较深，而Galectin-3可以通过增加宫颈癌细胞的同型聚集能力，增强其侵袭和转移的能力，进一步促进肿瘤病灶的扩大，另外Galectin-3可以增加宫颈癌细胞对于淋巴管内皮的粘附，进而增加淋巴结转移率。徐美容等[14-15]也认为，在低分化宫颈鳞状细胞癌中，Galectin-3的阳性率较高，并认为Galectin-3可以增加HPV病毒对于宿主细胞的整合能力，进而进一步增加宫颈癌细胞的溢出和脱落，增加淋巴结转移率。但本次研究的局限性在于未能探讨Galectin-3在CINII-III级患者宫颈锥切术后的改变， 宫颈锥形切除术后切缘Galectin-3阳性率对于指导临床工作更具指导意义。

综上所述，虽然Galectin-3在不同CIN分级中并无显著差异性表达，但宫颈癌组织中的Galectin-3蛋白表达阳性率较高，且与患者细胞分化程度、病灶大小、是否发生淋巴结转移密切相关，临床上通过检测宫颈癌术后标本的Galectin-3表达水平，可为指导临床预后提供一定的参考。

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(2016-01-31收稿，2016-07-09修回)

中文编辑： 吴昌学； 英文编辑： 赵毅

Expression and Significance of Galectin-3 in CIN and Cervical Squamous Cell Carcinoma

TANG Yao, HE Li, LI Jueshan

(DepartmentofGynaecology,ChengduCenterHospitalofWomenandChildren,Chengdu610000,SichuanProvince,China)

R737.33

A

1000-2707(2016)08-0967-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.08.025

网络出版时间：2016-08-23网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160823.1343.022.html