HIV/HCV共感染患者念珠菌检出情况及相关研究

贾冬梅，王爱平，温春阳，刘　进，董　岚，吴维华，费敏钢，臧立权，赵敬军，芦红智

（1.北华大学附属医院，吉林吉林　132011；2.复旦大学附属中山医院青浦分院，上海　201700；3.吉林医药学院，吉林吉林　132013；4.吉林化学工业集团公司总医院，吉林吉林　132021；5.吉林市关爱医院，吉林吉林　132011；6.上海市同济医院，上海　201000）

HIV/HCV共感染患者念珠菌检出情况及相关研究

贾冬梅1，2，王爱平1，温春阳3，刘进1，董岚1，吴维华1，费敏钢4，臧立权5，赵敬军6，芦红智5

（1.北华大学附属医院，吉林吉林132011；2.复旦大学附属中山医院青浦分院，上海201700；3.吉林医药学院，吉林吉林132013；4.吉林化学工业集团公司总医院，吉林吉林132021；5.吉林市关爱医院，吉林吉林132011；6.上海市同济医院，上海201000）

目的通过研究101例HIV/HCV共感染患者念珠菌检出情况，分析其可能的相关因素.方法采集101 例HIV/HCV共感染患者口腔、皮肤、指甲标本，采用CHROMagar念珠菌显色培养基培养、45℃生长试验及API-20C-AUX鉴定系统鉴定到种，同时进行单因素和多因素分析.结果101例HIV/HCV共感染患者中有44例（43. 6%）检出念珠菌，所分离到的44株念珠菌中，有19株白念珠菌（43.2%），9株近平滑念珠菌（20.5%），8株季也蒙念珠菌（18.2%），1株为热带念珠菌（2.3%），1株克柔念珠菌（2.3%），5株涎沫假丝酵母菌（11.4%），1株产朊假丝酵母（2.3%）.通过单因素和多因素分析发现:该人群念珠菌检出率的CD4计数、病毒载量比较差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论HIV/HCV共感染患者念珠菌主要菌种是白念珠菌、近平滑念珠菌和季也蒙念珠菌；检出率与CD4计数、病毒载量高度相关；检出率可能对HIV/HCV共感染患者判断临床预后有一定参考价值.

HIV/HCV共感染患者；念珠菌；相关因素

【引用格式】贾冬梅，王爱平，温春阳，等.HIV/HCV共感染患者念珠菌检出情况及相关研究［J］.北华大学学报（自然科学版），2016，17（3）:355-358.

我国HIV感染处于快速增长期，HIV感染者最常见合并念珠菌感染，为HIV感染后免疫抑制的早期征象.目前我国关于HIV/HCV共感染患者念珠菌感染检出的研究还未见报道，国外也鲜见报道.HIV/HCV共感染者口腔念珠菌的检出率、菌种分布以及相关因素的研究可以为HIV/HCV共感染患者的治疗、生存质量及耐药监测提供线索、积累资料.本研究通过对101例HIV/HCV共感染者的念珠菌的检出率、菌种分布及相关因素进行分析，为进一步的研究和临床治疗提供依据.

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1研究对象

本次研究病例采用1992年2月—2010年11月吉林市关爱医院艾滋病防治中心就诊的HIV/ HCV共感染患者101例，其中，男59例，女52例，感染途径除1例为母婴传播外，其余均为血液传播.患者年龄5～64岁，平均（38.46±1.26）岁.采集其口腔黏膜拭子、皮肤及指甲标本.

1.1.2入选标准

研究对象知情同意，配合采样，伴或不伴 OC体征（经市级医院专科医生按国家规范诊断），无抗生素和激素长期用药史，半年内未接受抗真菌治疗，无器官移植或肿瘤等其他全身性疾病史.经吉林市疾病预防控制中心ELISA和 Western blot方法确诊为HIV/HCV共感染的患者.

1.2采集方法

CD4计数和病毒载量为感染者在采样前1个月内（如是未接受过抗病毒治疗的病例则要求采样前1个月内）的检测结果，病毒载量检测使用Roche Amplicormonitor test方法，检测限为 500～750 000 copies/mL；治疗相关信息包括是否接受抗病毒治疗、治疗时长、治疗方案（重点是有无使用蛋白酶抑制剂）等.以上信息均来自国家艾滋病综合防治信息系统.

1.3实验材料

沙保琼脂培养基（SDA，北京陆桥技术有限责任公司）；米粉吐温80琼脂培养基（南京一基生化科技有限公司）；Chromagar显色培养基（法国科玛嘉）；API 20 C AUX酵母菌鉴定系统及比浊仪（法国梅里埃）.

1.4方法

1.4.1样本的收集

刮取皮损部位皮屑、指甲屑，无菌拭子在患者的口腔双颊黏膜、舌背及上腭黏膜反复滚动涂擦5次以上，将样本接种于沙保氏琼脂培养基，2 h内将样本带回实验室.

1.4.2培养、分离

将样本置37℃恒温箱中培养24～48 h，观察菌落颜色、形态及数目，再挑取单个菌落培养、观察.

1.4.3形态学

将培养基中的菌落涂片进行革兰氏染色，观察孢子、菌丝形态.

1.4.4标准株

念珠菌标准株为近平滑念珠菌（ATCC22019，第二军医大学附属长海医院提供）.

1.4.5念珠菌Chromagar鉴定

将标准菌株和标本一起接种于Chromagar培养基中，37℃培养48 h，根据颜色不同初步鉴别念珠菌的种类，白念珠菌或都柏林念珠菌为绿色或翠绿色；热带念珠菌菌落为蓝灰色或铁蓝色；克柔念珠菌为粉红色，边缘模糊，有微毛；光滑念珠菌落为紫色；其他念珠菌菌落为白色.

1.4.645℃生长试验

将Chromagar显色培养基呈绿色的念珠菌再次接种于沙保氏琼脂培养基，45℃培养24～48 h，白念珠菌能够生长，都柏林念珠菌完全不生长.

1.4.7念珠菌API20C鉴定

挑取生长于沙保培养基24～48 h的新鲜标本菌落和标准菌株配成混悬液，调整至麦氏浓度为2，按说明书将其分别接种于API 20 C AUX鉴定板与玉米吐温80培养基API 20C鉴定板中，30℃培养48和72 h.RAT培养基25℃培养24和48 h，分别读取API20C数字编码，光学显微镜观察念珠菌是否在玉米吐温80培养基上生长菌丝，按照鉴定体系检测念珠菌对19种碳水化合物同化反应的能力，并根据反应数据查编码表，鉴定念珠菌菌种.

1.5结果判定标准

在接种培养的两个沙保培养基中，其中一个培养基生长至少有一个念珠菌落即判断为检出念珠菌.在接种培养48 h后仍未生长的需再次接种，若仍无菌落生长，为阴性.

1.6统计学分析

应用SPSS 13.0软件进行统计学分析，念珠菌的检出与CD4计数、病毒载量、感染途径、有无抗病毒治疗及治疗时长、是否使用PI等多因素相关，并采用Logistic回归分析；念珠菌的检出与流行病学特征、机体免疫状况及抗病毒治疗情况的分析采用χ2检验；P＜0.05为差异具有统计学意义.

2　结　果

2.1HIV/HCV共感染者念珠菌的检出率

本组101例HIV/HCV共感染者中，有44例培养出念珠菌，检出率为43.6%，其中19株为白念珠菌（43.2%），25株为非白念珠菌（56.8%）.

2.2HIV/HCV共感染者念珠菌菌株中的菌种分布

44例念珠菌中19株为白念珠菌（43.2%），9株为近平滑念珠菌（20.5%），8株为季也蒙念珠菌（18.2%），1株为热带念珠菌（2.3%），1株为克柔念珠菌（2.3%），5株为涎沫假丝酵母菌（11.4%），1株为产朊假丝酵母（2.3%）.结果表明:HIV/HCV共感染患者的念珠菌菌株分布白念珠菌仍为首位，其次为近平滑念珠菌和季也蒙念珠菌，其他几种念珠菌所占比例很小.

2.3HIV/HCV共感染患者念珠菌检出单因素分析

2.3.1流行病学特征

HIV/HCV共感染检出念珠菌患者性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义，因本组仅1例为母婴传播，其余感染途径均为血液传播，故感染途径比较差异无统计学意义.

2.3.2CD4计数和HIV病毒载量对HIV/HCV共感染者念珠菌检出率的影响

不同CD4计数（χ2=20.6，P=0.005）和HIV病毒载量（χ2=16.2，P=0.005）的HIV/HCV共感染者念珠菌检出率不同，差异具有统计学意义.

表1显示:CD4计数＜200 cell/mL、HIV病毒载量＞10，000 copies/mL的患者检出率明显高于其他组，提示前两者可能是HIV/HCV共感染患者检出率升高的危险因素.

表1　CD4计数和HIV病毒载量对念珠菌检出率的影响Tab.1　Influence of CD4 number and H IV loads to the candida detection rate

2.4HIV/HCV共感染患者念珠菌检出相关因素的多因素分析

将性别、年龄、感染途径、病毒载量、CD4计数、抗病毒治疗时长等纳入回归方程进行多因素Logistic回归分析，发现CD4（OR=0.575，95%CI:0. 467～0.816）和HIV病毒载量（OR=1.556，95%CI: 1.136～2.028）比较差异具有统计学意义.

3　讨　论

目前多数学者认为，在已知的150余种念珠菌属中对人类致病的主要有白念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌.近年来国外的研究报道，HIV感染者念珠菌检出率为11%～96%，且有增加趋势，HIV感染者念珠菌的检出情况对统计流行病学资料和指导临床抗真菌药的应用都具有重要意义.但我国HIV/HCV共感染患者念珠菌的检出状况目前还是空白，国外也鲜有报道.

本研究对101例HIV/HCV共感染患者进行检测，有44例培养出念珠菌，检出率为43.6%，其中19株为白念珠菌（43.2%），25株为非白念珠菌（56.8%），低于巴西学者Costa［1］的62.6%（黏膜拭子法）和土耳其Erküse［2］报道的82.8%（口腔含漱法）.黏膜拭子法操作简单、便捷，患者接受程度高，方便与既往数据进行比对，故本研究采用的是黏膜拭子法.自然状态下的微生物大多是黏附在组织表面形成生物膜结构，与艾滋病相关的念珠菌感染多为急性红斑型和假膜型，用黏膜拭子最有可能取到定植在黏膜表面的念珠菌［3］，检出率可能略低于口腔含漱法，与本研究情况相符.HIV/HCV共感染患者念珠菌准确分型对统计流行病学资料和指导临床抗真菌药物研究有一定的意义［4］.

由于常规的沙氏培养基鉴定念珠菌亚类有局限性，Chromagar和API 20C在念珠菌的鉴定应用上逐渐增多.M.Yücesoy等［5］认为Chrom Magar可以简单、高效、可靠的检验念珠菌，尤其是鉴定白色念珠菌、热带念珠菌和克柔念珠菌.API 20CAUX鉴定念珠菌主要利用其对各类碳源同化能力的不同而达到目的，菌落必须为单一菌落.J Xu等［6］进行了API20CAUX技术和分子技术鉴定的比较，发现58株血液感染的念珠菌仅1例不符（API 20C AUX鉴定为白念珠菌，分子技术显示为都柏林念珠菌），他认为API20CAUX技术在鉴定念珠菌属方面与分子鉴定不相上下，仅有少数都柏林念珠菌可能误判为白念珠菌.Giovanni M Giammanco等［7］认为API20CAUX技术在鉴定都柏林念珠菌方面也有一定的可靠性，他们用API20CAUX技术鉴定6株都柏林念珠菌，与脉冲场凝胶电泳鉴定完全一致.HIV感染患者非白色念珠菌的感染呈上升趋势，但还需进一步的大规模流行病学调查.目前有调查表明:HIV阳性患者非白色念珠菌检出率为30.7%，而HIV阴性患者检出率为15.9%，吸烟和使用咪唑类药物治疗是非白色念珠菌携带率升高的危险因子.本实验的非白色念珠菌检出率为56.8%，高于文献报道的非白色念珠菌检出率，可能与合并 HCV感染有关.SchoofsAG等［8］单因素和多因素分析均表明:CD4计数和病毒载量是影响HIV/HCV共感染患者念珠菌检出率的最主要因素.而CD4计数低和HIV病毒载量高在早期研究中已明确为HIV/AIDS并发OC的高危因素［9-10］.

本研究对101例HIV/HCV共感染患者念珠菌的检出情况进行了系统分析，结果显示:HIV/ HCV共感染患者念珠菌的检出率与宿主CD4计数、HIV病毒载量等密切相关，与治疗时长也有一定相关性，可对判断HIV/HCV共感染患者临床病毒学及免疫学预后有一定意义.

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［3］亓庆国，周学东，肖晓蓉，等.影响正常口腔念珠菌检出率的方法学研究［J］.中国微生态学杂志，2004，16 （1）:29-30.

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［10］Fidel PL Jr.Candida-host interactions in HIV disease implications for oropharyngeal Candidiasis［J］.Adv Dent Res，2011，23（1）:45-49.

【责任编辑：陈丽华】

Correlated Investigation of Detection of Candida in HIV/HCV Coinfection Cases

Jia Dongmei1，2，Wang Aiping1，Wen Chunyang3，Liu Jin1，Dong Lan1，Wu Weihua1，FeiMingang4，Zang Liquan5，Zhao Jingjun6，Lu Hongzhi5
（1.Affiliated Hospital of Beihua University，Jilin 132011，China；2.Qingpu Branch of Zhongshan Hospital，Fudan University，Shanghai 201700，China；3.Jilin Medical College，Jilin 132013，China；4.General Hospital of CNPC in Jilin，Jilin 132021，China；5.Guanai Hospital of Jilin City，Jilin 132011，China；6.Tongji Hospital of Shanghai，Shanghai 201000，China）

Objective To analyze the conceivable correlation factor and significance through investigating detection of candida from 101 HIV/HCV.Method To identify the sample collected from oral cavity，skin，nail of 101 coinfection cases with HIV/HCV，by using CHROMagar Candida color medium，45 ℃ growth test，API-20CAUX identification system. Simultaneously，to search the correlated information of pidemiology，treatment anddetection to progress single actor and multiple factors through the national AIDS comprehensive prevention and control of information system.Results In 101 coinfection cases with HIV/HCV，44 cases（ 43.6％） were detected with candida.In 44 strains candida，19 strains （ 43.2％） were C.Albicans，9 strains （ 20.5％） were C.parapsilosis， 8 strains （ 18.2％） were C.Guilliermondii，1 strain （ 2.3％） was C. tropicalis，1 strain （ 2.3％） was C. krusei，5 strains （ 11.4％） were C.zeylanoides，1 strain （ 2.3％） was C.mycoderma.There was statistical difference in CD4 and viral load through single factor and multiple factors analysis.The detection rate of CD4 and viral load were significantly higher than that of other groups.Conclusion The major strains were C.Albicans，C.parapsilosis，C. Guilliermondii.The detection rate was highly correlated with CD4 number and viral load.It has certain reference value to prejudge prognosis of clinical virology and immunology of HIV/HCV coinfection cases.

HIV/HCV coinfection；candida；correlation factor

R994.6

A

1009-4822（2016）03-0355-04

10.11713/j.issn.1009-4822.2016.03.016

2016-03-19

吉林省科技发展计划项目（20120750）；吉林省卫生厅基金课题（2011z057）；上海市卫生局基金课题（20134362）；上海市复旦大学附属中山医院青浦分院院级课题（QYM2012-09）.

贾冬梅（1972-），女，主任医师，硕士生导师，主要从事皮肤与性病学研究，E-mail:jiadm1972@163.com；通信作者:王爱平（1962-），女，博士，主任医师，硕士生导师，主要从事肝病诊断与治疗研究，E-mail:fsyy008@163.com.