左乙拉西坦与苯妥英钠协同抗小鼠最大电惊厥作用实验研究

李　冰，齐春丽

（1.北华大学基础医学院，吉林吉林　132033；2.暨南大学实验动物中心，广东广州　510632）

左乙拉西坦与苯妥英钠协同抗小鼠最大电惊厥作用实验研究

李冰1，齐春丽2

（1.北华大学基础医学院，吉林吉林132033；2.暨南大学实验动物中心，广东广州510632）

目的探讨左乙拉西坦（Levetiracetam）与苯妥英钠（Phenytoin Sodium）协同抗小鼠最大电惊厥的作用.方法昆明种小鼠200只，雌雄各半，随机分为正常对照组、左乙拉西坦高中低剂量组、苯妥英钠高中低剂量组，测定抗最大电惊厥作用的量效关系，并根据两药的量效关系确定左乙拉西坦与苯妥英钠协同作用的高中低剂量组，每组20只小鼠，正常对照组给予等容积的生理盐水，其余给予相应的药物，灌胃剂量10mL/kg.灌胃给药后50min，给予小鼠电刺激，以小鼠下肢和全身出现强直性抽搐作为强直性惊厥指标，记录惊厥数，计算惊厥率.结果左乙拉西坦和苯妥英钠两药均有良好的抗最大电惊厥作用的量效关系，选择阈下剂量的左乙拉西坦和苯妥英钠合用后，高剂量组的惊厥发生率为10%，中剂量组惊厥发生率为40%，能产生明显的协同增效作用.结论阈下剂量的左乙拉西坦和苯妥英钠合用具有明显的协同抗小鼠最大电惊厥作用，并有良好的量效关系.

电惊厥；左乙拉西坦；苯妥英钠；协同作用

【引用格式】李冰，齐春丽.左乙拉西坦与苯妥英钠协同抗小鼠最大电惊厥作用实验研究［J］.北华大学学报（自然科学版），2016，17（3）:352-354.

癫痫（Epilepsy，EP）是由多种原因引起的脑神经细胞高度同步化异常放电，并以短暂性中枢神经系统功能失调为表现特征的临床综合征［1］，也是一种发病率较高、危害性较大的神经系统慢性疾病［2］.癫痫分为原发性癫痫和继发性癫痫，其突出的临床特点是反复发作、每次发作的不可预知以及需要长期的药物治疗［3］.本实验采用小鼠最大电刺激惊厥模型，探讨左乙拉西坦与苯妥英钠阈下剂量合用后是否可产生协同抗惊厥作用，为临床合理安全、长期应用抗癫痫药提供理论依据.

1　材料与方法

1.1实验动物

昆明种小鼠，雌雄各半，体质量（20±2）g（广东省医学实验动物中心提供，生产许可证号:SCXK（粤）2013-0002），实验期间动物自由饮食饮水，饲养环境温度为（23±2）℃，湿度（50±5）%，适应性饲养7 d后开始实验.

1.2实验药品

左乙拉西坦（UCB Pharma SA，批号:330054）；苯妥英钠（粉针剂，上海新亚药业公司，批号: 9505101）.

1.3实验仪器

YSD-4G型药理生理实验多用仪（北京卓川电子科技有限公司）.最大电惊厥通过预实验确定诱致小鼠强直性惊厥的最大电刺激参数（刺激时间:0.25 s，波宽:2ms，频率:4Hz，单次刺激，电压:100V）.

1.4实验分组

将200只小鼠分为对照组，左乙拉西坦高（74 mg/kg）、中（52mg/kg）、低（37.2mg/kg）剂量组，苯妥英钠高（25mg/kg）、中（12.5mg/kg）、低（6.3mg/ kg）剂量组，进行抗最大电惊厥作用的量效关系测定，并根据两药的量效关系确定左乙拉西坦与苯妥英钠协同作用的高、中和低剂量组，每组20只小鼠，正常对照组给予等容积的生理盐水，其余各组均给予相应的药物，灌胃剂量10mL/kg.灌胃给药后50min按上述电刺激参数给予电刺激，以小鼠四肢强直性抽搐作为强直性惊厥指标.

1.5统计学方法

应用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义.

2　结　果

2.1左乙拉西坦抗小鼠最大电惊厥的量效关系

由图1可见:左乙拉西坦对最大电刺激惊厥的拮抗作用与剂量有关，呈现良好的量效关系，剂量达74mg/kg时，小鼠惊厥率为20%；而剂量为37.2 mg/kg时，惊厥率为85%.

2.2苯妥英钠抗小鼠最大电惊厥的量效关系

由图2可见:苯妥英钠对最大电刺激惊厥的拮抗作用随着剂量的增加，小鼠惊厥发生率明显降低，并呈良好的量效关系，剂量达25mg/kg时，惊厥发生率为0，而剂量为6.3mg/kg时，惊厥发生率为85%.

2.3左乙拉西坦和苯妥英钠协同抗最大电惊厥作用

根据左乙拉西坦和苯妥英钠的抗最大电惊厥作用的量效关系，选择阈下剂量左乙拉西坦37.2 mg/kg和苯妥英钠6.3mg/kg作为合用的最高剂量组，依次稀释为中剂量组（18.6mg/kg+3.2mg/kg）和低剂量组（9.3mg/kg+1.6mg/kg），并于给药后50min开始行电刺激.结果见表1.合用高剂量组呈现明显的抑制惊厥作用，惊厥发生率仅为10%，并呈良好的量效关系.

表1　阈下剂量的左乙拉西坦与苯妥英钠协同抗小鼠最大电惊厥作用Tab.1　The anti-maximal electric seizure effect of subthreshold dose of levetiracetam and phenytoin sodium in m ice　（n=20，±s）

表1　阈下剂量的左乙拉西坦与苯妥英钠协同抗小鼠最大电惊厥作用Tab.1　The anti-maximal electric seizure effect of subthreshold dose of levetiracetam and phenytoin sodium in m ice　（n=20，±s）

注:与生理盐水对照组比较，P＜0.01

组别　ω（剂量）/ （mg·kg-1）　惊厥　未惊厥　η（惊厥）/ % NS　—　18　2　90左乙拉西坦　9.3+1.6　17　3　85左乙拉西坦+苯妥英钠　18.6+3.2　8　12　40苯妥英钠　37.2+6.3　2　18　10

3　讨　论

癫痫（EP）是神经系统常见的慢性疾病，病程长且反复发作.抗癫痫药物治疗可以改善癫痫的发作情况，但长期用药可使患者产生耐受性而降低药效，或由于药物的严重副作用而使患者治疗的依从性降低，不能有效的控制癫痫发作［4］.因此，寻找高效低毒的治疗癫痫的方法和有效药物已经成为研究热点.

左乙拉西坦属吡咯烷衍生物，口服后吸收快且完全（＞95%），并快速达到稳态血药浓度，生物利用度高（近100%）［5-6］.动物实验表明:左乙拉西坦对电刺激和PTZ点燃的小鼠癫痫大发作具有保护作用.临床研究［3-7］表明:该药安全范围大，不良反应少，耐受性好，用于治疗难治性、部分性、发作性癫痫效果好.关于左乙拉西坦的抗癫痫机制尚未明确，认为其抗癫痫作用与GABA能系统无关，因其并不影响脑组织中GABA转氨酶、谷氨酸脱羧酶的活性［8］.左乙拉西坦抗癫痫作用具有立体结构特异性.研究［9］表明:在中枢海马等脑区的突触膜上存在可以和3H-左乙拉西坦发生可逆性结合的特殊位点，并与其抗癫痫活性有关.苯妥英钠是经典的抗癫痫药物，其抗癫痫机制与其膜稳定作用有关.临床上主要用于治疗癫痫大发作，但不良反应多，患者依从性较差.因此，本实验研究将经典的抗癫痫药物苯妥英钠与新近上市的左乙拉西坦联合应用，观察阈下剂量的左乙拉西坦与苯妥英钠联合用药后是否能够产生协同的抗癫痫作用，为后续研究复方抗癫痫药物提供实验基础.

实验采用对控制癫痫大发作有效的最大电惊厥法（maximal electric seizure，MES）［10］，测得苯妥英钠和左乙拉西坦的量效关系，确定其阈下剂量分别是6.3mg/kg和37.2mg/kg.将两药的阈下剂量6.3mg/kg和37.2mg/kg作为高剂量组，并倍比稀释为中剂量组（3.2 mg/kg+18.6mg/kg）和低剂量组（1.6mg/kg+9.3mg/kg）.联合给药后，测定动物发生惊厥情况，高剂量组惊厥发生率为10%，分别与苯妥英钠12.5mg/kg和左乙拉西坦37.2mg/kg剂量相当，而中剂量组惊厥发生率为40%，也呈现较好的抗癫痫作用.结果表明:阈下剂量的苯妥英钠与左乙拉西坦联合给药具有明显的协同抗小鼠最大电惊厥作用，其协同作用的产生可能与其不同的作用机制有关.

由此可见，采用不同作用靶点的阈下剂量抗癫痫药联合应用可以产生明显的抗癫痫作用，为临床合理、安全、长期应用抗癫痫药治疗癫痫提供了实验基础.

［1］Kannoth S，Unnikrishnan JP，Kumar T S，et al.Risk factors for epilepsy:A population-based case-control study in Kerala，southern India［J］.Epilepsy&Behavior，2009，16（1）:58-63.

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［4］江澄川，俞丽云，洪震.颞叶癫痫［M］.上海:复旦大学出版社，2003:255-310.

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［6］Bialer M Johannessen S I，Kupferberg H J，et al.Pro-gress report on new antiepileptic drugs:a summary of the fourth EILAT conference（EILAⅣ）［J］.Epilepsy Res-earch，1999，34（1）:1-41.

［7］Browne T R，Szabo G K，Leppik I E，et al.Absence of pharmacokinetic drug interaction of levetiracetam with phenytoin in patients with epilepsy determined by new technique［J］.JClin Pharmacol，2000，40（6）:590-595.

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［9］Noyer M，Gillard M，Matagne A，et al.The novel antiepileptic drug levetiracetam（ucb L059）appears to act via a specific binding site in CNSmembranes［J］.Eur JPharmacol，1995，286（2）:137-146.

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【责任编辑：陈丽华】

Experimental Research on the Effects of Levetiracetam Combined with Phenytoin Sodium on Anti-maximal Electric Seizure in Mice

Li Bing1，Qi Chunli2
（1.Basic Medicine College of Beihua Uinversity，Jilin 132033，China；2.Experimental Animal Center of Jinan University，Guangzhou 510632，China）

Objective To investigate the synergistic effect of levetiracetam combined with phenytoin sodium on anti-maximal electric seizure （ MES） in mice. Methods A total of 100 male and 100 female mouse were randomly divided into the normal control group，high dose levetiracetam group，middle dose levetiracetam group， low dose levetiracetam group，high dose phenytoin sodium group，middle dose phenytoin sodium group and low dose phenytoin sodium group.Dose-effect relationships of anti-MES were measured.According to the dose-effect relationships，the corresponding anti-MES’s effect drug doses were determined. They were high dose group， middle dose group and low dose group with 20 mouse in each group.The control group was given 10 mL /kg saline by gavage，and the other three groups were administrated the corresponding drugs.After 50 minutes，all the mice were treated with electricity.When the lower limbs and the whole body of the mice showed tonic convulsions，the convulsion frequencies were recorded and then the convulsion rates were calculated.Results Both levetiracetam and phenytoin sodium had good anti-electric convulsion effect and showed obvious dose-effect relationship.The combination use of subthreshold doses of levetiracetam and phenytoin sodium could produce synergistic antimaximal convusion effect，with convulsion rate of 10％ in high dose group and the rate of 40％ in middle dosegroup.Conclusion The subthreshold dose of levetiracetam and phenytoin has obvious synergistic anti-MES effect and shows a good dose-effect relationship.

MES；levetiracetam；phenytoin sodium；synergistic effect

R392.8

A

1009-4822（2016）03-0352-03

10.11713/j.issn.1009-4822.2016.03.015

2015-12-01

吉林省科技发展计划项目（20130633）.

李冰（1964-），女，实验师，主要从事机能实验学研究，E-mail:bl5354@163.com；通信作者:齐春丽（1983-），女，博士，高级实验师，主要从事抗癫痫药物动物实验学研究，E-mail:lovebaobei51@126.com.