载脂蛋白E基因、TOMM 40基因多态性与海南省百岁老人长寿的关联性

刘正旺，张明，杨华，云美玲，蔡望伟，张云霞

（1.海南省中医院 心内科，海南 海口570102；2.海南医学院 生物化学和分子生物学教研室，海南 海口 571199）

论著

载脂蛋白E基因、TOMM 40基因多态性与海南省百岁老人长寿的关联性

刘正旺1，张明1，杨华1，云美玲2，蔡望伟2，张云霞2

（1.海南省中医院 心内科，海南 海口570102；2.海南医学院 生物化学和分子生物学教研室，海南 海口 571199）

目的探讨载脂蛋白E基因、线粒体外膜转位酶同工酶40的r s2075650多态性与海南省百岁老人长寿的关联性。方法用聚合酶链反应法分析百岁老人组（n=259）和对照组（n=529）载脂蛋白E基因、线粒体外膜转位酶同工酶40的r s2075650的基因型和等位基因频率。结果①载脂蛋白Eε2ε3、ε2ε4基因型频率百岁老人组低于对照组；ε2等位基因频率对照组高于百岁老人组。②百岁老人组线粒体外膜转位酶同工酶40型频率AA基因型频率高于对照组；等位基因频率分布差异无统计学意义。按载脂蛋白E基因分为携带ε4和非携带ε4等位基因进行分层分析：携带ε4的AA基因型频率百岁老人组高于对照组；A等位基因频率百岁老人组高于对照组。非携带ε4的G A、AA基因型频率百岁老人组高于对照组。等位基因A在非携带ε4等位基因频率百岁老人组高于对照组。结论载脂蛋白E和线粒体外膜转位酶同工酶40连锁分析显示，线粒体外膜转位酶同工酶40的r s2075650位点AA基因型与携带ε4与百岁老人长寿相关。等位基因A与携带ε4百岁老人长寿有关联。

长寿；载脂蛋白E基因；线粒体外膜转位酶同工酶40；基因多态性

目前，长寿的遗传学背景研究是各国的热点。有研究表明，基因对寿命的影响在60岁之前表现并不明显，而在60岁之后明显，这证明了基因影响人类寿命的论据，而且这种现象在高龄人群中更突出［1］。其中载脂蛋白E（A polipoprotein E，A P O E）基因为目前学术界公认的与长寿有关的基因。线粒体外膜转位酶同工酶40（the translocase o f the mitochondrial o u ter membrane 40，T O MM40）是一种在线粒体外膜控制各种酶进入线粒体发挥作用的关键通道，对线粒体发挥正常作用有直接影响。其由核基因表达。有研究认为其与阿尔茨海默等慢性病、长寿有关，且和A P O E基因有连锁可能。

本课题对259例海南百岁老人和529例健康人A P O E基因和T O MM40基因rs2075650多态性进行基因连锁研究，探讨其与长寿的相关性。

1　资料与方法

1.1研究对象

百岁老人组259例。男性71例，女性188例；平均年龄（103.32±2.15）岁。纳入标准：严格按照长寿老人年龄界定五步法确定长寿老人［2］，取年龄≧100岁的长寿老人作为研究对象。对照组529例。男性145例，女性384例；平均年龄（49.78±6.52）岁。纳入标准：海南地区同一民族没有血缘关系，无长寿家族史，家族中至少2代无90岁的健康人群，所有对象经调查组逐一核实筛选，验证确切无误者确定为研究对象。根据中华人民共和国国务院《医疗机构管理条例》规定［3］，本研究经本院伦理委员会伦理审核通过，在实验前将实验方案和风险告知受试者及家属，所有受试者或亲属签署了知情同意书。

1.2材料与试剂

DN A M ar k erⅠ、DN A M ar k erⅡ、脱氧核糖核苷三磷酸（deo x y-ribon u cleotide triphosphate，dNT P）、Ta q酶、琼脂糖、DN A提取试剂盒等购自Tian g en公司，引物合成由上海生物技术有限公司完成。

1.3仪器与设备

电泳仪（JY600C，上海京工实业有限公司），微量移液器（德国Eppendor f公司），高速台式离心机（H1650-W，湖南平凡仪器仪表有限公司），分析天平（上海升隆电子科技有限公司），超微量核酸蛋白测定仪（Nanodrop 2000/2000C，美国Thermo公司），聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PC R）仪（德国B iometra公司），凝胶成像分析系统（G el Doc 2000，美国B io-R ad公司），微波炉（MM721AA U-P W，中国美的公司），水浴箱（HH-W420，上海双旭电子有限公司），通风橱（北京欧世佳实验室家具有限公司），摇匀器（WH-986，上海双旭电子有限公司）。

1.4试验方法

1.4.1DNA的提取所有入组者取5m l静脉血，乙二胺四乙酸（EDT A）抗凝，置入-80℃冰箱冷冻保存，标本收集完成后，用改良酚-氯仿法［4］提取DN A，低温下备用。

1.4.2P C R扩增A P O E基因片段A P O E基因引物一参照文献［5］，N1：5'-A T GCCG A T G A CC T GC A G A A TT-3'；N2：5'-A T GCCG A T G A CC T GC A G AA T C-3；N3：5'-CGCGG A C A T GG A GG A CG TTT-3'；N4：5'-CG CGG A C A T GG A GG A CG TT C-3'；N5：5'-G TT C A G T G A TT G T CGC T GGGC A-3'。反应体系：总体积25μl，10×PC R B uff er 2.5μl，10mmol dNT P 2.5μl，N1/N2 1μl，N3/N4 1μl，N5 1μl，模板DN A 5μl，Ta q DN A聚合酶1μl，dd H2O 11μl。分A、B管进行PC R扩增，A管引物为N1、N3、N5，B管为N2、N4、N5。94℃预变性7min，94℃变性55 s，59℃退火45 s，72℃延伸1min，共循环30次，72℃再延伸7min。取5μl PC R反应产物与1μl的6×加样缓冲液混匀后，加样于0.5×Tris-硼酸缓冲液（以下简称T B E缓冲液）配制的含嗅化乙锭1.7%的琼脂糖凝胶中，在0.5× T B E缓冲液以90 V电压电泳约30min，紫外灯下观察扩增结果并照相。见图1。

采用O li g o 6.0软件设计A P O E基因引物：P1 为5'-T CC AA GG A GC T GC A GGCGGCG-3'；P2：5'-CC CGGCC T GG T A C A C T GCC A GG-3'。取100份标本用P1/P2引物扩增A P O E基因目的条带。反应体系10× PC R B uff er 2.5μl，10 mmol dNT P 2.5μl，P1/P2各1μl，模版DN A 1μl，Ta q聚合酶1μl，双蒸水16μl，总体积25μl。PC R反应条件：94℃预变性7 min，94℃变性55 s，59℃退火45 s，72℃延伸1min，共循环30次，72℃再延伸10min。PC R产物经琼脂糖电泳证实为特异性条带，经超微量核酸蛋白测定仪检测质量在60 n g/μl以上，O D260/280在（1.91± 0.06）之间。每份标本各取80μl由北京T I A N G EN公司测序，基因型与多重PC R所得出的结果吻合，提示多重PC R结果可靠，可以作为本次实验A P O E分型使用。见图2。

图1　PCR扩增A PO E的6种基因型

图2　ε3ε4基因型测序结果

1.4.3P C R扩增TO MM 40基因片段采用O li g o 6.0软件设计T O MM40基因引物：R1为5'-G A G AA G A G AAA CGC T G T C A C A C T CC A C T-3；R2：5'-G A G AA G A G AAA CGC T G T C A C A C T CC A CC-3'；R3：5'-GC A C A TT CG A GG A G T GCC A CCGG AA G T-3'。反应体系：10× PC RB uff er 10μl，10 mmol dNT P2.5μl，P rimer R1/R2 1μl，P rimer R3 1μl，模板DN A 1μl，Ta q DN A酶1μl，dd H2O 17.5μl，总体积25μl。PC R反应条件：94℃预变性7min，94℃变性55 s，59℃退火45 s，72℃延伸1min，共循环30次，72℃再延伸10 min。A、B管进行PC R扩增，A管引物R1/R3，B管引物R2/R3取5μ1 PC R反应产物与1μl的6×加样缓冲液混匀后，加样于0.5×T B E缓冲液配制的含嗅化乙锭1.7%的琼脂糖凝胶中，在0.5×T B E缓冲液以90 V电压电泳约30min，紫外灯下观察扩增结果并照相。PC R扩增结果按5%比例进行复检，要求复检和初检的符合率达到100%。见图3。

图3　7份标本TOMM40基因PCR目的条带

1.5统计学方法

采用S P SS 11.5统计软件进行数据分析，H ardy-W einber g平衡用拟合优度χ2检验。基因型与等位基因频率均以百分率（%）表示，组间比较用χ2检验和F isher检验，同时计算比值比（odds ratio，O R）和95%可信区间（con f idence inter v al，CI），P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1A PO E基因多态性

2.1.1经吻合度检验对照组A P O E基因型符合H ardy-W einber g平衡定律（χ2＜3.84，P＞0.05）。见表1。

2.1.2A P O E基因各基因型及等位基因分布经吻合度检验，百岁老人组、对照组A P O E基因型符合H ardy-W einber g平衡定律（χ2=1.84，P=0.062），百岁老人组和对照组的基因型分布频率经χ2检验（χ2= 5.867，P=0.042），差异有统计学意义，等位基因分布频率差异有统计学意义（χ2=20.512，P=0.003）。见表2。

2.1.3百岁老人组、对照组A P O E基因与长寿的关联性百岁老人组、对照组ε2ε2、ε4ε4、ε3ε4基因型频率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而对照组ε2ε3、ε2ε4基因型频率高于百岁老人组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

2.2TOMM40基因多态性

表1　百岁老人组和对照组的A PO E基因型构成比　例（%）

2.2.1TO MM 40基因多态性H a rd y-W e in b e r g平衡对照组基因型符合H ardy-W einber g平衡，能够代表群体的基因分布。见表4。

2.2.2TO MM 40基因各基因型及等位基因分布频率T O MM40基因各基因型及等位基因分布中，百岁老人组和对照组的基因型分布频率差异有统计学意义（χ2=12.027，P=0.002），等位基因分布频率差异无统计学意义（χ2=2.798，P=0.094）。见表5。

2.2.3TO MM 40基因型、等位基因频率与长寿的相关性按是否携带A P O Eε4等位基因将百岁老人组和对照组分为携带ε4组与非携带ε4组，对T O MM40基因型、等位基因频率与长寿的相关性进行分析。结果表明，非携带A P O Eε4等位基因T O MM40基因型在百岁老人组和对照组间比较，差异有统计学意义（χ2=249.658，P=0.000）。百岁老人组GG型的频率为53.9%，G A型的频率为33.3%，对照组GG型的频率为63.0%，G A型的频率为29.6%，两组间比较差异有统计学意义（ ＾O R=0.172，95%CI：0.165，0.180，χ2=2.028，P=0.028），百岁老人组GG型的频率低于对照组，G A型的频率高于对照组。百岁老人组AA型的频率为12.8%，对照组为7.4%，两组比较差异有统计学意义（＾O R=0.018，95%CI：0.015，0.020，χ2=5.884，P=0.000），百岁老人组高于对照组。百岁老人组等位基因G的频率为70.5%，等位基因A 为29.5%，对照组等位基因G的频率为77.8%，等位基因A为22.2%，两组间比较差异有统计学意义（＾O R= 0.007，95%CI：0.005，0.008，χ2=7.494，P=0.000）。百岁老人组等位基因G型的频率低于对照组，等位基因A高于对照组。见表6。

表2　百岁老人组、对照组A PO E基因型、等位基因频率分布　例（%）

表3　百岁老人组、对照组A PO E基因与长寿的关联性　例（%）

表4　TOMM40基因多态性H ar d y-We i n ber g平衡　例（%）

表5　百岁老人组和对照组TOMM40基因型、等位基因频率分布　例（%）

携带A P O Eε4等位基因T O MM40基因型频率百岁老人组与对照组比较，差异有统计学意义（χ2= 12.343，P=0.002）。G A型与GG型比较差异无统计学意义（P=0.010）；AA型与GG型比较，差异有统计学意义（P=0.007）。等位基因A与G比较差异有统计学意义（P=0.027）。见表7。

表6　非携带ε4等位基因的TOMM40基因型、等位基因与长寿的相关性　例（%）

表7　携带ε4基因型的TOMM40基因型、等位基因与长寿的相关性　例（%）

3　讨论

人类基因组计划的研究结果表明，不同个体对疾病和环境有害因素的易感性是由细微的基因差异造成的［5］。细微的基因差异主要表现在基因多态性上，而单核苷酸多态性（sin g le n u cleotide polymorphism，S N P）与疾病及其他生命现象的相关性成为分子生物学及遗传学研究的热点之一。除外显子外，内含子多态性与基因功能的关系也越来越受到人们的关注，其内藏的可读框架可以表达为成熟酶、逆转录酶和核酸内切酶，对基因的表达和调控产生影响［6］。表观遗传学最新研究表明，核外分子构成一个功能强大的信息缓冲区，内含子被剪切后是该信息缓冲区中的分子来源之一。随着研究的深入，内含子基因多态性与长寿的关系将会得到进一步明确。

A P O E基因位于人类第19号染色体长臂13区2带（19q13.2）上，包含3个内含子，4个外显子。基因的最终产物299个氨基酸残基组成成熟蛋白［7］。其中外显子4编码112位半胱氨酸和158位精氨酸的DN A序列存在多态性，根据这2个位点的多态性，可将A P O E分为3种等位基因，即ε2、ε3和ε4。这3种等位基因又可构成6种不同的基因型，即3种纯合型（ε2/ε2、ε3/ε3、ε4/ε4）和3种杂合型（ε3/ε4、ε2/ε3、ε2/ε4）。

早期研究发现，载脂蛋白E与特异的脂蛋白受体作用而改变血循环中胆固醇的水平［8］。进一步研究发现，A P O E基因与影响人类健康长寿的多种疾病有关，其中与L O A D的研究是近几年较多。有研究［9］发现，A P O Eε4是患阿尔茨海默病和心血管疾病的高危因素。全基因组相关性研究发现，众多阿尔茨海默病易感基因和等位基因，证实A P O E基因和阿尔茨海默病易感性有关［10-11］。A P O Eε4等位基因携带者阿尔茨海默病发病较早且存在更为广泛的弥漫性老年斑，这与A P O Eε4等位基因数目有关。A P O Eε2等位基因则导致阿尔茨海默病发病风险下降和病理严重程度的减轻。S E R IP A等［12］对意大利86例诊断为痴呆渐进性失语的患者和99例健康人作比较分析，发现A P O Eε3ε4、ε4ε4基因型与痴呆，尤其原发性失语显著相关（P＜0.01）。糖尿病合并外周动脉粥样硬化的患者如果携带ε4等位基因更易出现认知上的障碍［13］。胡才友等［14］研究表明，广西巴马地区老人A P O E基因多态性与其认知功能改变相关，认为A P O Eε4等位基因是长寿老人认知功能障碍发病的危险因子。

J A C OB S EN等［15］对丹麦百岁老人进行分析，认为A P O Eε4等位基因与百岁老人的生存期有很大联系。携带ε4等位基因者心血管疾病发生率高，寿命明显缩短，非携带ε4等位基因者，生存期延长。M A TE R A［16］对2 124例老人进行A P O E基因分析和5年的生命质量追踪随访，发现女性ε2ε2基因型差异明显（P＜0.01），女性老人ε2ε2基因型频率明显增多。A P O Eε4等位基因与其中观察的671例老人死亡有关。相反，A P O Eε2等位基因降低总死亡率。MC K A Y等［17］通过对10 623例欧洲老年性黄斑变性患者和对照组10年的观察，得出结论——A P O Eε4等位基因对寿命是不利的尤其是A P O Eε4ε4基因型。随着年龄增加，检测A P O E基因显示ε4ε4基因型明显减少，各个基因型无性别差异，这与M A TE R A［16］的研究结论不同。我国广西巴马地区、新疆长寿老人A P O E基因多态性与长寿现象的关联研究发现，A P O E基因多态性与长寿相关联［18-19］，长寿相关基因为A P O Eε2/ε2、ε3/ε3基因型。

笔者在该实验研究中发现，海南百岁老人组显示ε3ε3基因型与百岁老人长寿有关联，但与ε2/ε2基因型不相关。

T O MM40是一种在线粒体外膜控制各种酶进入线粒体发挥作用的关键通道，对线粒体发挥正常作用有直接影响。其由核基因表达。T O MM40基因位于染色体上位于19号染色体45312338～45422606区域，包含10个外显子和9个内含子。在第2内含子基因位点45395619（rs2075650）存在G/A多态性。

DEE L EN等［20］通过对欧洲多个研究中心的荟萃分析发现，rs2075650与长寿有关，主要表现在：与A P O E连锁分析时，发现T O MM40的AA基因型与A P O E的ε4相关。M A R U SZ A K等［21］通过对414例L O A D患者、173位百岁老人、305位其他神经系统疾病的患者的T O MM40和A P O E基因进行关联性分析认为，T O MM40AA基因型在迟发型阿尔茨海默病中更有意义。P O T K I N等［22］在对381例临床诊断阿尔茨海默病患者进行全基因关联性分析发现，T O MM40基因的rs2075650多态性位点检测率高出正常对照组2倍，认为其能用来预测A D的发生。E L C O R O A R I S T I Z A B A L等［23］对90岁以上老人S N P位点进行分析，认为A D与T O MM40基因和A P O E基因多态性有关联性。T O MM40基因与阿尔茨海默病易感性之间的联系可能由于该基因与A P O E连锁失衡所致［24-26］。

笔者对T O MM40基因的研究发现，百岁老人AA分布频率高于对照组；等位基因A频率在百岁老人组明显高于对照组。对A P O E基因和rs2075650连锁分析发现，A P O Eε4携带者中AA基因型与百岁老人长寿有关。A等位基因与百岁老人长寿有关。这与DEE L EN等［19-20，24-25］的报道一致。提示A P O E基因与T O MM40基因连锁对长寿产生影响，尤其在A P O Eε4携带者中差异有统计学意义（P＜0.01），提示其可能对ε4等位基因表达蛋白质的功能产生积极效应，限制ε4对机体的损害，具体机制有待深入研究。

［1］F O R NE Y K，D OB R I B A N E G A R A G N A N I P，et al.G enome-w ide scan in f ormed by a g e-related disease identi f ies loci f or e x ceptional h u manlon g e v ity［J］.P L o SG enet，2015，11（12）.D O I: 10.1371/j o u rnal.p g en.1005728.

［2］国家统计局人口统计司.中国人口统计年鉴［R］.北京:中国统计出版社，1993:52.

［3］中华人民共和国国务院.医疗机构管理条例［Z］.1994.

［4］刘正旺，云美玲，钟江华，等.提取陈旧血标本中DN A的三种方法比较［J］.中国热带医学，2012，12（3）:321-323.

［5］W A N G E.M icro R N A，the p u tati v e molec u lar control f or midli f e decline［J］.Ag ein g R es R e v，2007，6（1）:1-11.

［6］F IC HOU Y，G E H A NN I N P，C O RR E M，et al.E x tensi v e fu nctional analyses o f R H D splice site v ariants:I nsi g hts into the potential role o f splicin g in the physiolo g y o f R h［J］.Trans fu sion，2015，55（6 P t 2）:1432-1443.

［7］H A Y A S H I T，K A M A D A H，J I N G，et al.Di ff erent e x pression o f lo w density lipoprotein receptor and A P O E bet w een yo u n g ad u lt and old ratbrains a f ter ischemia［J］.Ne u rol R es，2006，28（8）:822-825.

［8］A C A RÇI N L ET I B，Y A R D IMCI N，A Y TÜR K Z，et al.The e ff ects and interactions o f A P O E and A P H-1A polymorphisms in A l z heimer disease［J］.T u r k J M ed S ci，2015，45（5）:1098-1105.

［9］L A B A T R OB E R T J，R OB E R T L.L on g e v ity and a g in g.R ole o f f ree radicals andx anthine o x idase.Are v ie w［J］.P athol B iol，2014，62（2）:61-66.

［10］B E R T R A M L.A l z heimer's disease g enetics c u rrent stat u s and fu t u re perspecti v es［J］.I nt R e v Ne u robiol，2009，8（4）:167-184.

［11］B E R T R A M L，T A N Z I R E.G enome-w ide association st u dies in A l z heimer's disease［J］.H u m M ol G enet，2009，18（2）:137-145.

［12］S E R IP A D，B I ZZ A RR O A，P A N Z A F，et al.The A P O E g ene loc u s in f rontotemporal dementia and primary pro g ressi v e aphasia［J］.A rch Ne u rol，2011，68（5）:622-628.

［13］S A V I N OV A O V，F I LL A U S K，H A RR I S W S，et al.E ff ects o f niacin and ome g a-3 f atty acids on the apolipoproteins in o v erw ei g ht patients w ithele v atedtri g lycerides andred u cedH D L cholesterol［J］.A therosclerosis，2015，240（2）:520-525.

［14］胡才友，杨泽，郑陈光，等.广西巴马地区老人A P O E基因多态性与认知功能的关系［J］.中国心理卫生杂志，2005，19（6）:383-386.

［15］J A C OB S EN R，J A C OB S EN R，M A R T I N U SS EN T，et al.I ncreased e ff ect o f the A P O E g ene on s u r v i v al at ad v anced a g e in healthy and lon g-li v ed Danes:t w o nation w ide cohort st u dies［J］. Ag in g C ell，2010，9（6）:1004-1009.

［16］M A TE R A MG，S A N C A RL O D，P A N Z A F，et al.A polipoprotein E-related all-ca u se mortality in hospitali z ed elderly patients［J］. Ag e（Dordr），2010，32（3）:411-420.

［17］MC K A Y G J，S I L V E S T R I G，C H A K R A V A R T HY U，et al. V ariations in apolipoprotein E f re q u ency w ith a g e in a pooled analysis o f a lar g e g ro u p o f older people［J］.A m J Epidemiol，2011，173（12）:1357-1364.

［18］宗小芬，胡茂林，唐劲松，等.载脂蛋白E基因多态性与老年期抑郁症的关联性［J］.中华行为医学与脑科学杂志，2015，24（4）: 319-322.

［19］C A P R I M，S A NT O R O A，G A R A G N A N I P，et al.G enes o f h uman lon g e v ity:an endless q u est［J］.C u rr V asc P harmacol，2014，12（5）:707-717.

［20］DEE L EN J，B EE K M A N M，UH HW，et al.G enome-w ide as-sociation st u dy identi f ies a sin g le ma j or loc u s contrib u tin g to s u r v i v al into old a g e［J］.Ag in g C ell，2011，10（4）:686-698.

［21］M A R U SZ A K A，P E PŁO＇N S K A B，S A F R A N OW K，et al.T O MM40 rs10524523 polymorphism's role in late-onset A l z heimer's disease and in lon g e v ity［J］.J A l z heimers Dis，2012，28（2）:309-322.

［22］P O T K I N S G，G U FF A NT I G，L A K A T O S A，et al.H ippocampal atrophy as a q u antitati v e trait in a g enome-w ide association st u dy identi f yin g no v el s u sceptibility g enes f or A l z heimer's disease［J］.P L os O ne，2009，4（8）.D O I:10.1371/j o u rnal.pone.0006501.

［23］E L C O R O A R I S T I Z A B A L M X，GÓM E Z B F，A R T A Z A A I，et al.G enetic pro f iles o f lon g e v ity and healthy co g niti v e a g in g in nona g enarians f romthe bas q u e co u ntry［J］.R e v EspG eriatr G erontol，2011，46（4）:217-222.

［24］YU C E，S E L T M A N H，P E S K I ND E R，et al.C omprehensi v e analysis o f A P O E and selected pro x imate mar k ers f or late-onset A l z heimer's disease:patterns o f lin k a g e dise q u ilibri u m and disease mar k er association［J］.G enomics，2007，89（6）:655-665.

［25］L A M B E R T J C，H E A T H S，E V EN G，et al.G enome-w ide association st u dy identi f ies v ariants at C L Uand C R1 associate associated w ith A l z heimer's disease［J］.Nat G enet，2009，41（10）: 1094-1099.

［26］I K ED A T，Y A M A D A M.R is k f actors f or A l z heimer's disease［J］. B rain Ner v e，2010，62（7）:679-690.

（申海菊 编辑）

Relationship of polymorphism s of APOE and TOMM 40 genes w ith longevity of Hainan centenarians

Zheng-wang Liu1，Ming Zhang1，Hua Yang1，Mei-ling Yun2，Wang-wei Cai2，Yun-xia Zhang2
（1.Cardiovascular Department，Traditional Chinese Medicine Hospital of Hainan Province，Haikou，Hainan 570102，China；2.Department of Biochemistry and Molecular Biology，Hainan Medical College，Haikou，Hainan 571199，China）

Objective To study the relationship of polymorphisms of apolipoprotein E（APOE）gene and translocase of outer mitochondrial membrane 40（TOMM40）gene with longevity of Hainan centenarians. M ethods Genotype and variation of allele frequencies of APOE gene and TOMM40 gene rs2075650 were analyzed in 259 cases of centenarian group and 529 cases of control group by polymerase chain reaction. Results The frequency of APOEε2ε3 andε2ε4 genotypes in the centenarian group was lower than that of the control group.Theε2 allele frequency of the control group was higher than that of the centenarian group. The frequency of AA genotype of TOMM40 gene in the centenarian group was higher than that of the control group，but there was no statistically significant difference in the allele frequency distribution.Stratification analysis was carried out based on carryingε4 allele of APOE gene or not.In the people who carriedε4，the frequency of AAgenotype of the centenarian group was higher than that of the control group，and the frequency of A allele of the centenarian group was also higher than that of the control group.In the people who did not carryε4，the frequency of GA and AA genotypes of the control group was lower than that ofthe centenarian group，and the same with the frequency of A allele.Conclusions Linkage analysis of APOE and TOMM40 genes showed that TOMM40 gene rs2075650 AA genotype and APOE ε4 are linked with longevity.Allele A may also be associated with longevity of the centenarians carrying APOEε4.

longevity；apolipoprotein E gene；translocase of outer mitochondrial membrane 40 gene；gene polymorphism

R 394

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.013

1005-8982（2016）15-0069-07

2015-10-21