脑钠肽前体A、B基因变异和蒙古族、汉族原发性高血压的相关性

常培叶　赵　平　刘志跃　秦　莉

(内蒙古医科大学附属医院核医学科，内蒙古　呼和浩特　010050)



脑钠肽前体A、B基因变异和蒙古族、汉族原发性高血压的相关性

常培叶赵平1刘志跃2秦莉2

(内蒙古医科大学附属医院核医学科，内蒙古呼和浩特010050)

〔摘要〕目的探讨人类脂联素(hANP)基因与脑钠肽前体(NPP)基因变异在蒙古族、汉族原发性高血压中的作用。方法采集蒙古族高血压标本212例，正常血压标本217例，汉族高血压标本200例，正常血压标本216例，用高温连接酶检测反应进行基因分型。结果①蒙古族和汉族高血压组体质指数明显高于正常血压组；两民族血浆总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的水平在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义(P<0.05)。②根据block选择tagSNP，从NPPA基因的常见SNPs中筛选出1个tagSNP，从NPPB筛选出1个tagSNP，蒙古族和汉族候选位点的等位基因和基因型频率在高血压组和正常血压组之间差异无统计学意义。结论NPPA基因rs5063和蒙古族、汉族原发性高血压均无相关性，NPPB基因rs198389和蒙古族、汉族原发性高血压均无相关性。

〔关键词〕高血压；单体型；脑钠肽前体A基因；脑钠肽前体B基因；蒙古族

原发性高血压是由遗传和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病，其中遗传性因素占30%～40%〔1〕。在血压的调节机制中，脑钠肽(BNP)通过调节血管张力和钠平衡在血压的调节中起重要作用〔2〕。脂联素(ANP)和BNP作用于肾小球和集合管，通过增加肾小球滤过率，抑制集合管对钠的重吸收，进而增加钠的排泄；同时ANP和BNP还可以通过抑制肾素、血管紧张素Ⅱ和醛固酮的分泌来调节血压，如果ANP和BNP功能障碍将影响血压。研究显示，脑钠肽前体(NPP)A、NPPB基因变异和高血压发生相关〔3〕。新近研究发现涉及这些遗传机制在不同人群结果不同，本文探讨这2个基因变异在蒙古族、汉族原发性高血压发病机制中的作用，需要在不同的种族人群中进一步研究。

1材料和方法

1.1研究对象于2010年、2011年在锡林郭勒盟多伦县和东乌旗开展高血压流行病学调查，共采集蒙古族牧民样本429例，其中高血压212例，正常血压者217例；汉族农民样本416例，其中高血压200例，正常血压者216例。所有研究对象均无血缘关系，无异族通婚史，年龄20～70岁，至少三代从小生活在调查所在地。所有参与者均知情同意。根据美国心脏病协会(AHA)推荐的标准方法给调查对象测量血压。 高血压的入选标准：3次测量血压，平均收缩压(SBP)≥140 mmHg和(或)平均舒张压(DBP)≥90 mmHg，或研究对象正在接受抗高血压药物治疗。正常对照组入选标准：查体健康者，3次测量血压，平均收缩压<140 mmHg和(或)平均舒张压<90 mmHg，无服用降压药史，研究中排除了有继发性高血压、过量饮酒、冠心病、糖尿病、脑卒中、严重肝肾疾病、甲状腺疾病病史以及恶性肿瘤的对象。

1.2方法

1.2.1人基因组DNA样品的制备采用北京天根有限公司的血液基因组DNA提取试剂盒提取血液标本DNA并进行DNA浓度、纯度检测。

1.2.2SNP位点的选取从HapMap数据库(http：//www.hap map.org)下载包含中国人的基因型数据库，使用Haploview软件根据block选择tagSNP，设置条件为较少等位基因频率≥ 0.05，r2≥0.8。从NPPA基因中筛选出1个tagSNP，rs5063，从NPPB基因中筛选出1个tagSNP，rs198389。

1.2.3候选基因分型目的基因引物序列：rs198389：正义链5'AGACACAGACAAGTCCCCGT3'，反义链5'AGGAAGAAAGC-GCCAACCTA3',扩增长度98 bp；rs5063：正义链5′AGGTCAGACCAGAGCTAATC3′，反义链5'GCCCTACCTTGAAATCCATC3'，扩增长度91 bp。PCR系统，20 μl体系：1 μl模板DNA,2 μl PCR10倍缓冲液,0.6 μl Mg2+(100 mmol/L),2 μl dNTP(20 mmol/L),0.2 μl Taq(5 U/μl),2 μl引物(5 pmol/L),12.2 μl ddH2O。PCR方案：起始95℃变性2 min，然后94℃ 30 s，53℃ 1 min，65℃ 30 s，反应35个循环，最后65℃延伸10 min。高温连接酶检测反应10 μl：1 μl 10倍缓冲液,1 μl 探针混合物,0.05 μl连接酶，4 μl ddH2O，4 μl PCR产物。反应条件：95℃ 2 min，94℃ 30 s，60℃ 2 min，反应35个循环。

1.3统计学分析采用SPSS17.0软件进行t及χ2检验。

2结果

2.1临床相关指标比较两个民族高血压组与正常血压组比较平均年龄、体质指数(BMI)、SBP、DBP、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

2.2基因多态性位点和高血压的关联研究在蒙古族人群，NPPA基因的rs5068位点的基因型频率和等位基因频率在高血压组和正常血压组之间差异均无统计学意义(P>0.05);NPPB基因的rs198389位点的基因型频率和等位基因频率在高血压组和正常血压组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。在汉族人群，NPPA基因的rs5068位点的基因型频率和等位基因频率在高血压组和正常血压组之间差异均无统计学意义(P>0.05);NPPB基因的rs198389位点的基因型频率和等位基因频率在高血压组和正常血压组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1　两组临床相关指标比较±s)

表2　基因型和等位基因分布频率〔n(%)〕

3讨论

高血压属于多基因遗传病，到目前为止，已发现的遗传变异仅仅能解释1%～2%人口的血压变异。这表明，还有较多的高血压遗传变异未被发现。最近，高血压全基因组基因表达Meta分析发现NPPA、NPPB和高血压发生相关〔3〕，NPPA基因位于1p36.2，与NPPB基因结构很相似，NPPA与NPPB都包含3个外显子和2个内含子。在转基因小鼠的实验研究中发现NPPA低表达会导致血压增高〔4〕，相反，NPPA或者NPPB过表达会导致血压降低〔5〕。在妇女的基因组研究以及Meta分析中，发现NPPA基因多态性与高血压的发生相关〔6，7〕。Kotoko等〔8〕在日本人群的研究中，发现NPPB基因多态性和日本女性高血压相关，是日本女性高血压的遗传标记，但是之后在日本人群的高血压全基因组关联研究中，发现NPPB基因多态性与血压无明显相关性〔9〕。

研究发现hANP基因C-664G、T1766C、T2238C 均与哈萨克族原发性高血压无相关性〔10～12〕。Liu等〔13〕在汉族人群的研究中发现 NPRC 基因的多态性位点以及单倍型和高血压相关。本研究前期研究发现hANP基因C-664G 变异与蒙古族原发性高血压无明显相关性〔14〕。本研究未发现NPPA基因rs5063和蒙古族、汉族原发性高血压相关，也未发现NPPB基因rs198389和蒙古族、汉族原发性高血压相关。预证实NPPA、NPPB基因在原发性高血压发生发展中的作用，还需要增加样本量在其他的种族人群中进行进一步的验证。

4参考文献

1Lewington S，Clarke R，Qizilbash N，etal.Prospective Studies Collaboration.Prospective Studies Collaboration.Age-specific relevance of usual blood pressure to vascular mortality：a meta-analysis of individual data for one million adults in 61 prospective studies〔J〕.Lancet，2002;360(9349)：1903-13.

2Kishimoto I，Tokudome T，Nakao K，etal.Natriuretic peptide system：an overview of studies using genetically engineered animal models〔J〕.FEBS J,2011;278(11)：1830-41.

3Francine ZM，Anna EC，Yee HJ，etal.Meta-analysis of genome-wide gene expression differences in onset and maintenance phases of genetic hypertension〔J〕.Hypertension，2010;56(2)：319-24.

4John SW，Krege JH，Oliver PM，etal.Genetic decreases in atrial natriuretic peptide and salt-sensitive hypertension〔J〕.Science，1995;267(5198)：679-81.

5Cataliotti A，Tonne JM，Bellavia D，etal.Long-term cardiac pro-B-type natriuretic peptide gene delivery prevents the development of hypertensive heart disease in spontaneously hypertensive rats〔J〕.Circulation，2011;123(12)：1297-305.

6David Conen，Suzanne Cheng，Lori LSteiner，etal.Association of 77 polymorphisms in 52 candidate genes with blood pressure progression and incident hypertension：The Women′s Genome Health Study〔J〕.J Hypertens，2009;27(3)：476-83.

7Niu W.The relationship between natriuretic peptide precursor a gene T2238C polymorphism and hypertension：a meta-analysis〔J〕.Int J Hypertens,2011;653698-706.

8Kotoko Kosuge，Masayoshi Soma，Tomohiro Nakayama，etal.A novel variable number of tandem repeat of the natriuretic peptide precursor B gene′s 5′-flanking region is associated with essential hypertension among Japanese females〔J〕.Int J Med Sci，2007;4(3)：146-52.

9Yumiko Hiura，Yasuharu Tabara，Yoshihiro Kokubo，etal.A genome-wide association study of hypertension-related phenotypes in a Japanese population〔J〕.Circ J，2010;74(11)：2353- 9.

10常桂娟，李南方，李涛，等.新疆哈萨克族心钠素基因C-664G 变异与原发性高血压的相关性〔J〕.临床心血管病杂志，2006;22(10)：590-3.

11何玲玲，徐新娟，梁晓慧，等.新疆哈萨克族ANP基因T1766C多态性与原发性高血压的关联性〔J〕.新疆医科大学学报，2007;29(9)：967-9.

12李南方，张艳敏，李涛，等.新疆哈萨克族原发性高血压与心钠素基因T2238C多态性的关系〔J〕.临床心血管病杂志，2005;21(9)：513-5.

13Liu Y，Li S，Chen X，etal.Association of natriuretic peptide receptor-C gene with ischemic stroke and hypertension in Chinese Han population〔J〕.Clin Exp Hypertens,2012;34(7)：504-9.

14赵平，张永平，赵美.内蒙古地区蒙古族原发性高血压与人类心钠素基因的相关性〔J〕.中国老年学杂志，2011;31(19)：3681-3.

〔2014-09-15修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

基金项目：中国科学院“西部之光”人才培养计划项目(2012)；内蒙古自治区科技计划资助项目(2013)

通讯作者：赵平(1973-)，男，副主任医师，硕士，主要从事高血压、冠心病发病机制的研究。

〔中图分类号〕R394.5

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)12-2882-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.025

1内蒙古自治区人民医院心内科

2内蒙古医科大学病理生理学教研室

第一作者：常培叶(1975-)，女，博士，副教授，主要从事内蒙古地区少数民族生活习惯和易感基因的研究。