肺炎糖浆的质量标准研究

刘 静

(海门市中医院，海门　226100)



肺炎糖浆的质量标准研究

刘 静

(海门市中医院，海门226100)

摘要：目的建立肺炎糖浆的薄层鉴别方法和含量测定方法。方法 采用薄层色谱法对处方中连翘、金银花和玄参进行定性鉴别；采用HPLC法对君药麻黄中的盐酸麻黄碱进行含量分析。结果 薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；制定了麻黄中盐酸麻黄碱含量标准。结论 该方法简便快速，结果准确可靠，可作为该制剂的质量控制标准。

关键词：肺炎糖浆；薄层色谱；高效液相色谱法

肺炎糖浆是海门市中医院中药制剂，由金银花、连翘、天竺黄、玄参和麻黄等组成，具有辛凉宣泄、清肺平喘功效，临床用于属风热痰阻之证的小儿肺炎，表现为喘逆气急、痰热壅盛风邪犯肺，临床疗效显著。原质量标准仅有简单的理化鉴别项，为提高制剂质量标准，采用薄层色谱法[1]对制剂中的连翘、金银花、玄参进行鉴别；采用高效液相色谱法对麻黄中盐酸麻黄碱进行含量测定，该方法专属性强，重复性好，结果满意。

1仪器与试药

1.1仪器CAMAG TLC VISUALIZER型薄层自动成像仪(瑞士卡玛公司)；BS110S万分之一天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；Agilent1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦)； Agilent-G1311C型四元泵(美国安捷伦公司)； Agilent-G1315D型二极管阵列检测器(美国安捷伦公司)； Agilent-G1329B型真空脱气器(美国安捷伦公司)；CHEMSTATION B.04.02版化学工作站(美国安捷伦公司)；KQ-250B型超声清洗机(昆山超声仪器有限公司)；Mettler Toledo EL2401电子天平(梅特勒-托利多公司)。

1.2试药连翘苷(批号110821-200711)，金银花对照药材(批号121060-200805)，绿原酸对照品(批号110753-200413)，玄参对照药材(批号121018-200503)，哈巴俄苷对照品(批号111730-200501)，盐酸麻黄碱对照品(批号171241-201007)，均购于中国药品生物制品检定研究院；肺炎糖浆(批号：140602，140609，140825)及阴性对照均由海门中医院制剂室生产；乙腈、甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1连翘的TLC鉴别 取本品20 mL，先用水饱和正丁醇溶液振摇并提取2次，每次为20 mL，合并正丁醇液，再用氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去氨试液，再用正丁醇饱和水洗涤2次，每次为20 mL，将正丁醇液蒸干，加入甲醇1 mL，使残渣溶解，作为供试品溶液。取连翘苷对照品适量，加甲醇制成1 mL含0.25 mg的对照品溶液[2]。取缺连翘药材的阴性对照样品，参照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。参照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)实验，分别吸取供试品2～4 μL、阴性对照品溶液2～4 μL及对照品溶液3 μL，依次点于硅胶G薄层板上，展开剂为三氯甲烷-丙酮-甲醇-甲酸(12∶2.5∶2∶0.2)，展开，取出，晾干，喷100 mL·L-1的硫酸乙醇溶液再晾干，105 ℃加热至斑点显色清晰；置于日光下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相对应的位置可显相同的斑点，阴性样品色谱在相对应位置没有干扰，见图1。

2.1.2金银花的TLC鉴别取样品5 mL，加稀盐酸0.5 mL，混匀，用乙酸乙酯振摇并提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯溶液并蒸干，加1 mL甲醇使残渣溶解，作为供试品溶液[3-5]。取缺金银花药材的阴性对照样品，参照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。取绿原酸对照品适量，加入甲醇制成1 mL含0.5 mg的对照品溶液。参照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)实验，吸取以上供试品溶液3～5 μL、阴性对照品溶液3～5 μL和对照品溶液各4 μL依次点于聚酰胺薄膜，展开剂为甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层；展开，取出，晾干，在紫外灯365 nm下进行检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相对应的位置可显相同颜色荧光斑点，阴性样品色谱在相对应的位置上没有干扰，见图2。

图1肺炎糖浆中连翘的薄层色谱图

1～3.供试品；4.缺连翘的阴性对照；5.连翘苷

Fig.1 TLC ofFructusforsythiaein Pneumonia Syrup; 1-3.test samples; 4.reference substance WithoutFructusforsythiae;5.Fructusforsythiaeglycosides

图2 肺炎糖浆中金银花的薄层色谱图

1～3. 供试品；4. 缺金银花的阴性对照；5. 绿原酸

Fig.2 TLC ofLonicerajaponicain Pneumonia Syrup

1-3.test samples 4.reference substance withoutLonicerajaponica5.chlorogenic acid

2.1.3玄参的TLC鉴别 取本品20 mL，用水饱和正丁醇溶液振摇并提取2次，每次30 mL，合并正丁醇溶液;用氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去氨试液；再用正丁醇饱和水溶液洗涤2次，每次20 mL，保留正丁醇液蒸干；残渣加5 mL水溶解，通过D101型大孔吸附树脂，先用60 mL水洗涤，弃去水液，再用400 mL·L-1乙醇50 mL洗脱，弃去洗脱液，然后用700 mL·L-1乙醇60 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液[6-8]。取缺玄参药材的阴性对照样品，参照供试品溶液的制法，制成阴性对照溶液。再取哈巴俄苷对照品，加甲醇后制成1 mL含1 mg的对照品溶液。根据薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录ⅥB)实验，分别吸取供试品、阴性对照品溶液、对照品溶液各10 μL，依次点于硅胶G薄层板上，展开剂为正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)的上层液，展开，取出，晾干，喷以50 mL·L-1的香草醛硫酸溶液，吹热至显色清晰；日光下检视。不同批次的样品均检出哈巴俄苷，且与玄参对照药材的主斑点相对应，而缺玄参的阴性对照在相同位置未检出哈巴俄苷，说明阴性对照无干扰，见图3。

图3肺炎糖浆中玄参的薄层色谱图

1～3.供试品；4.缺玄参的阴性对照品；5.哈巴俄苷对照品Fig.3 TLC ofRadixscrophulariaein Pneumonia Syrup

1-3.test samples；4.reference substance withoutRadixscrophulariae;5.khabarovRussiaglycosidereference substance

2.2含量测定

2.2.1色谱条件 色谱柱： Megres-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：乙腈1 mL·L-1磷酸溶液(含1 mL·L-1三乙胺)(5∶95)；检测波长：210 nm；进样量：10 μL；柱温：30 ℃；理论板数按照盐酸麻黄碱峰的计算不低于5 000。

2.2.2对照品溶液制备 取盐酸麻黄碱对照品，精密称定，加0.1 mol·L-1的盐酸溶液制成质量浓度为20 μg·mL-1的盐酸麻黄碱溶液[9-10]。

2.2.3供试品溶液制备 将提取方式进行优化，参考《中国药典》2010年版一部“小儿清肺化痰口服液”含量测定项下方法，建立肺炎糖浆含量测定方法：精密量取本品20 mL，加水10 mL及浓氨试液1 mL，用乙醚振摇提取5次，分别为30，30，30，20和20 mL，合并乙醚提取溶液，加盐酸乙醇溶液(1→20)2 mL，混匀，低温回收溶剂至干；残渣用乙醇5 mL溶解并转移至25 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取10 μL，注入液相色谱仪。

2.2.4阴性对照溶液制备 按照处方，取除麻黄外的其余药材，按照制备工艺要求，制成不含麻黄的肺炎糖浆(由海门中医院提供)，按照供试品溶液制备项下的方法，制成阴性对照溶液，在上述色谱条件下进行测定。

结果显示，在供试品溶液色谱峰中，与盐酸麻黄碱对照品相对应的保留时间有明显的吸收峰，阴性对照在与盐酸麻黄碱对照品相同的保留时间处，无色谱峰干扰。见图4。

图4 肺炎糖浆的 HPLC图

A.盐酸麻黄碱对照品溶液；B. 肺炎糖浆供试品溶液；C.阴性对照溶液

Fig.4 HPLC chromatograms of Pneumonia SyrupA.reference substance solution of ephedrine hydrochloride；B.product solution of Pneumonia Syrup；C.negative control solution

2.2.5标准曲线的制备与线性范围考察 精密吸取质量浓度为20.90 μg·mL-1的盐酸麻黄碱对照品溶液0.5，1，2，4，8和10 μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定，纵坐标为峰面积的积分值，而盐酸麻黄碱的进样量(μg)为横坐标，绘制其标准曲线，求得回归方程：Y=1 917.263 1X+3.553 6，r=0.999 7，结果显示，线性关系良好。

2.2.6精密度实验 精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液10 μL，连续进样6次，显示峰面积测定值的RSD为0.80%，说明仪器的精密度良好。2.2.7重复性实验 取相同批号(140825)的肺炎糖浆6份，按照本文含量测定项下的方法测定供试品中盐酸麻黄碱[11]的含量，计算平均含量和RSD。

2.2.8稳定性实验 取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，每隔一定的时间测定1次峰面积，直至16 h。结果表明，盐酸麻黄碱在16 h内基本稳定。

2.2.9加样回收实验 精密量取已知含量的样品6份(批号140825，质量浓度为13.15 μg·mL-1)，每份取10 mL，分别精密加入盐酸麻黄碱对照品适量，按照正文供试品溶液制法制成加样回收供试品溶液，按照实验含量测定项下的色谱条件，分别进样10 μL，计算回收率和RSD。结果见表1。结果表明，本方法的加样回收率实验良好。

表1 回收率实验结果

Tab.1 Results of recovery test

实验号取样量/mL样品中量/mg加入量/mg测得总量/mg·mL-1回收率/%平均回收率/%RSD/%1100.13150.16720.2995100.47102.392.792100.13150.16720.3044103.423100.13150.16720.3077105.394100.13150.16720.3024102.245100.13150.16720.295197.866100.13150.16720.3070104.94

2.2.10样品测定及含量限度的确定 按照本实验含量测定项下的方法，测得5批(批号：140116，140602，140609，140813和140825)不同样品中的盐酸麻黄碱含量分别为10.13，10.90，7.48，13.08和13.28 μg·mL-1。

根据上述5批样品的含量测定结果，在其平均含量的基础上再下浮30%，因此暂订为本品1 mL含麻黄以盐酸麻黄碱(C23H23O11)计，不得少于7 μg。

3讨论

肺炎糖浆是由多味中药饮片经现代工艺加工制成，根据江苏省食品药品监督管理局有关医院制剂要求，需要提高制剂质量标准。

本制剂中连翘的定性鉴别曾参照2010年版《中国药典》“连翘”药材项下连翘苷鉴别，结果斑点分离不清晰，后经过反复实验，调整展开剂的比例，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-甲酸(12∶2.5∶2∶0.2)为展开剂，结果斑点分离完全、清晰，表明此方法专属性强，重复性好，且阴性无干扰。

本制剂中金银花的定性鉴别中，曾参照2010年版《中国药典》“金银花”药材项下绿原酸的鉴别，结果斑点分离不清晰，阴性有干扰，后经过反复实验，改变样品的前处理，薄层板应用聚酰胺薄膜，展开剂调整为甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上层液；在紫外灯365 nm下检视，结果斑点分离完全，表明此方法专属性强，重复性好，且阴性无干扰。

玄参的定性鉴别曾参照2010年版《中国药典》“玄参”药材项下哈巴俄苷鉴别，结果斑点分离不清晰，阴性有干扰，后经过反复实验，改变样品的前处理，用水饱和正丁醇振摇提取，用氨试液洗涤，再用正丁醇饱和水溶液洗涤，通过D101型大孔吸附树脂，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)的上层液为展开剂，结果表明，此方法专属性强，重复性好。

本品是由生麻黄、连翘、金银花等10味中药组成的复方制剂，麻黄作为君药，其主要化学成分为盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱等，肺炎糖浆样品中几乎未检出盐酸伪麻黄碱的色谱峰，因此建议暂不测定盐酸伪麻黄碱的含量，仅测定样品中盐酸麻黄碱的含量。将提取方式进行优化，参考《中国药典》2010年版一部“小儿清肺化痰口服液”含量测定项下的方法，建立了肺炎糖浆的含量测定方法，以盐酸麻黄碱为对照品，根据含量测定结果，在其平均含量的基础上再下浮30%，鉴于麻黄的特殊性，其上限将在以后的实验中进行进一步研究，因此暂订为本品1 mL含麻黄以盐酸麻黄碱(C23H23O11)计，下限为不低于7 μg。

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doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.011

中图分类号：R284

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2016)04-0364-04

(收稿日期：2015-09-13)

Study on the quality standard of Pneumonia Syrup

LIU Jing

(Haimen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Haimen 226100，China)

Abstract:ObjectiveIn order to establish a TLC identification method and content determination method for Pneumonia Syrup.Method Fractus forsythiae, Lonicera japonica and Radix scrophulariae were identified by TLC. High performance liquid chromatography was adopted to analyze the content of ephedrine hydrochloride in the medicine. ResultsTLC spots were clear without negative interference.Standards for ephedrine hydrochloride were set up.Conclusion The method is easy, fast， and reliable, and could be used to control the quality of Pneumonia Syrup.

Key words:Pneumonia Syrup; TLC;HPLC