产地对连翘叶中木脂素和黄酮类成分含量的影响

王　金，王　芳，王小平，白吉庆，胡锦苹，黎　丹，王亚恒

(陕西中医药大学，咸阳　712046)



产地对连翘叶中木脂素和黄酮类成分含量的影响

王金，王芳，王小平*，白吉庆，胡锦苹，黎丹，王亚恒

(陕西中医药大学，咸阳712046)

摘要：目的比较产地对连翘叶中木脂素类成分和黄酮类成分含量的影响。方法采用高效液相色谱法测定不同产地连翘叶中芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的含量，以4 mL·L-1冰醋酸-乙腈为流动相，梯度洗脱，检测波长为277 nm，柱温为25 ℃，流速为1.0 mL·min-1。结果不同产地连翘叶中芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的含量差异较大。黄酮类成分，以湖北和陕西产的连翘叶中芦丁含量较高，高达1.1% 以上；木脂素类成分，以湖北、陕西和河南产的连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷含量较高，分别高达3.0%和1.0%以上。而江西产的连翘叶中芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的含量普遍较低。结论产地对连翘叶中木脂素类成分和黄酮类成分的含量影响显著。

关键词：连翘叶；芦丁；连翘酯苷A；连翘苷；产地

连翘叶为木犀科植物连翘Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的干燥叶;夏、秋季采收，鲜用或晒干;具有清热解毒之功效[1];与连翘的化学成分基本相同[2-3]。连翘叶资源丰富，在我国陕西、河南、河北和山西等地常用连翘嫩叶制成保健茶饮用，具有良好的保健价值。现代药理研究表明，连翘叶具有保肝、抑菌、降血糖、抗氧化、抗衰老和抑制癌细胞增殖等多种生物活性[4-11]，具有广阔的开发前景。本实验以芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的含量为指标，对不同产地连翘叶中木脂素和黄酮类成分的含量进行比较，为连翘叶的进一步开发利用提供依据。

1仪器与试药

1.1仪器101-2型电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器设备有限公司)；赛多利斯BT125D型双量程电子分析天平(赛多利斯股份有限公司)；戴安UltiMate 3000 全自动高效液相色谱仪(赛默飞世尔科技有限公司)。

1.2试药连翘苷(批号110821-200711)、芦丁(批号080-9705)、连翘酯苷A(批号111810-201103)均由中国药品生物制品检定研究院提供；连翘叶分别在同一时期采集于山西、江西、河南、湖北和陕西等地，经陕西中医药大学白吉庆副教授鉴定为木犀科植物连翘Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的叶；液相用乙腈为色谱纯；水为纯化水；冰醋酸等试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1药材处理将采摘的连翘叶在60 ℃干燥至水分低于10.0%，取出，备用。

2.2对照品溶液的制备分别精密称取连翘苷对照品2.00 mg、芦丁对照品 2.70 mg和连翘酯苷A对照品4.75 mg，置于25 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备取连翘叶粉末(过四号筛)0.3 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15 mL，称定质量，超声提取40 min，冷却至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.4连翘叶中连翘苷、芦丁和连翘酯苷A的分析色谱条件：采用HPLC法。色谱柱为Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);4 mL· L-1冰醋酸-乙腈为流动相。梯度洗脱(0～8 min，10%～15%乙腈；8～18 min，15%～22%乙腈；18～25 min，22%～40%乙腈；25～30 min，40%～95%乙腈；30～35 min，95%～95%乙腈)。流速为1.0 mL·min-1，检测波长为277 nm，柱温为25 ℃。理论塔板数按照连翘酯苷A计算应不低于5 000。分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液适量，在上述色谱条件下进样，色谱图见图1。

图1对照品和样品的HPLC图

A.对照品；B.样品；1.芦丁；2.连翘酯苷A； 3.连翘苷

Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances and samples

A.reference substances； B.sample；1.rutin；2.forsythiaside A； 3.phillyrin

分别精密吸取上述对照品溶液1，2，4，5，7，8和10 μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件分析测定，每个体积进样2 次，记录各对照品的峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)，以对照品质量(μg)为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程：Y芦丁=11.462X-0.196 2，r=0.999 9；Y连翘酯苷A=8.199 2X-0.018 9，r=0.999 9；Y连翘苷=6.914 3X+0.037，r=0.999 9。结果表明，芦丁在0.108～1.08 μg、连翘酯苷A在0.19～1.90 μg、连翘苷在0.08～0.80 μg 范围内线性关系良好。

2.5方法学考察

2.5.1精密度实验精密吸取上述对照品溶液5 μL，连续进样6次，记录峰面积，结果芦丁、连翘酯苷A和连翘苷峰面积的RSD分别为1.08%，1.13%和1.09%，表明仪器精密度良好。

2.5.2稳定性实验精密吸取同一供试品溶液(陕西省铜川市)，在0，2，5，8，10，12，15和20 h 分别进样3 μL，测得芦丁、连翘酯苷A和连翘苷峰面积的RSD分别为0.99%，0.82%和0.56%，表明供试品溶液中各待测成分在20 h 内基本稳定。

2.5.3重复性实验取同一连翘叶粉末(陕西省铜川市，过四号筛)0.3 g，5份，精密称定，按照2.3项下方法制备供试品溶液，分别进样3 μL，结果芦丁、连翘酯苷A和连翘苷含量的RSD分别为1.04%，1.27%和1.51%。表明重复性良好。

2.5.4加样回收率实验称取6份已知含量的同一连翘叶粉末(陕西省铜川市，过四号筛)0.15 g，精密称定，分别加入适量的芦丁对照品、连翘酯苷A对照品和连翘苷对照品。按照2.3项下方法制备供试品溶液，测定，结果见表1。

表1连翘叶中芦丁、连翘酯苷A、连翘苷加样回收实验

Tab.1 Recovery test of rutin，forsythiaside A and phillyrin inForsythiasuspensaleaves

分析成分取样量/g样品中含量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%芦丁0.150101.761.613.3397.750.150041.761.613.3196.550.150151.761.613.3095.850.150211.761.613.3598.920.149981.751.613.2995.360.150011.761.613.3297.2096.941.34连翘酯苷A0.1501013.5212.0225.5299.800.1500413.5212.0225.4999.580.1501513.5312.0225.4699.250.1502113.5312.0225.5399.830.1499813.5112.0225.2797.840.1500113.5212.0225.56100.1799.410.83连翘苷0.150104.894.239.0999.290.150044.894.239.0899.050.150154.894.239.0498.110.150214.904.238.9996.690.149984.894.239.0598.350.150014.894.239.1199.7698.541.11

2.6结果精密吸取上述供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定，结果见表2。

表2不同产地连翘叶中主要成分含量测定结果

Tab.2 The contents of lignan and flavonoid constituents ofForsythiasuspensaleaves from different origins

(n=3)

3讨论

本实验采用不同的提取溶剂和提取方法，对供试品溶液的制备方法进行考察，结果显示，采用甲醇超声提取40 min，芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的提取率较高。故本实验采用甲醇超声提取40 min。通过对流动相的选择，比较了甲醇-水、甲醇-4 mL·L-1冰醋酸溶液、4 mL·L-1冰醋酸-乙腈和乙腈-水的不同体系的等度和梯度洗脱，结果以4 mL·L-1冰醋酸-乙腈作为流动相，梯度洗脱时，所得色谱图基线平直，各待测成分的色谱峰分离度良好。

课题组研究发现，连翘叶中的木脂素类成分和黄酮类成分的含量和连翘叶的外观颜色密切相关，当连翘叶的颜色鲜绿时，上述成分的含量较高，当连翘叶因没有及时干燥而褐变时，上述成分的含量降低，且含量降低的程度与连翘叶的褐变程度呈正相关。这可能与连翘叶中存在的某种酶有关，有待进一步研究。

测定结果表明，不同产地连翘叶中芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的含量差异较大。湖北和陕西产的连翘叶中芦丁、连翘酯苷A和连翘苷的含量较高，分别高达1.0%，4.0%和1.0%以上，约为江西和山西产的连翘叶10倍以上。为了确保连翘叶的质量，必须建立连翘种植基地，而本研究为种植基地的选择提供了依据。

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基金项目：科技部项目(编号：11C26216103652)；工业和信息化部项目(编号：[2012]369号)； 陕西省科技厅项目(编号：2014K14-01-01)

作者简介：王金，女，硕士研究生

*通信作者：王小平，女，博士后，教授，硕士研究生导师

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.002

中图分类号：R927.2

文献标志码：A

文章编号：1004-2407(2016)04-0334-03

(收稿日期：2015-12-11)

Effect of the origin on the content of lignan and flavonoid constituents of Forsythia suspensa leaves

WANG Jin，WANG Fang，WANG Xiaoping*，BAI Jiqing，HU Jinping，LI Dan，WANG Yaheng

(Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China)

Abstract:Objective To compare the contents of lignan and flavonoid constituents of Forsythia suspensa leaves from different origins.Methods HPLC was used to determine the contents of rutin，forsythiaside A and phillyrin of Forsythia suspensa leaves from different origins.The mobile phase was 4 mL·L-1glacial acetic acid-acetonitrile，the detection wavelength was 277 nm，the column temperature was 25 ℃,and the flow rate was 1.0 mL·min-1．Results The contents of rutin，forsythiaside A and phillyrin were significantly different in Forsythia suspensa leaves from different origins.As for the contents of flavonoids，the contents of rutin in Forsythia suspensa leaves from Hubei and Shaanxi were more than 1.1%.As for the contents of lignan，the contents of forsythiaside A and phillyrin in Forsythia suspensa leaves from Hubei，Shaanxi and Henan were as high as 3.0% and 1.0%.The contents of rutin，forsythiaside A and phillyrin were generally low from Jiangxi.Conclusion The origin has a significant impact on the contents of lignan and flavonoid constituents of Forsythia suspensa leaves.

Key words：Forsythia suspensa leaves；rutin；forsythiaside A；phillyrin；origin