鼻咽癌组织中XIAP的表达与放疗预后的相关性

项振飞，方建晨，林丽，陆妙珍，许权

（1.宁波市医疗中心李惠利医院　放疗科，浙江　宁波　315040；2.宁波市医疗中心李惠利医院　病理科，浙江　宁波　315040；3.宁波市鄞州区人民医院 血液科，浙江　宁波　315040）



鼻咽癌组织中XIAP的表达与放疗预后的相关性

项振飞1，方建晨2，林丽3，陆妙珍1，许权1

（1.宁波市医疗中心李惠利医院放疗科，浙江宁波315040；2.宁波市医疗中心李惠利医院病理科，浙江宁波315040；3.宁波市鄞州区人民医院 血液科，浙江宁波315040）

［摘 要］目的：观察放疗后鼻咽癌（NPC）组织中X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（XIAP）的表达，评估XIAP 在NPC患者放疗预后的诊断价值。方法：回顾性分析2010年1月至2012年12月收治的94例NPC患者的临床及病理资料，所有患者均接受放疗。采用免疫组织化学法检测患者鼻咽部病理标本中XIAP蛋白表达，临床随访并分析其与放疗预后关系。结果：XIAP在NPC组织中总的阳性表达率为69.15%（65/94）。XIAP阳性表达率与p-TNM分期和肿瘤分化呈负相关（均P＜0.05）。单因素生存分析表明，XIAP高表达、高p-TNM分期以及肿瘤低分化程度均与NPC患者存活率下降明显相关（均P＜0.05）。多因素Cox回归分析显示XIAP表达、p-TNM分期以及肿瘤分化程度是影响NPC患者放疗生存的独立危险因素。结论：XIAP在放疗的NPC组织中高表达，XIAP表达、p-TNM分期以及肿瘤分化程度是影响NPC患者放疗生存的独立危险因素。

［关键词］X染色体连锁的凋亡抑制蛋白；鼻咽癌；放疗；蛋白表达；预后；免疫组织化学

鼻咽癌（nasopharyngeal cancer，NPC）是一种发生在头颈区域的癌症，主要位于鼻咽表面的鳞片状表皮细胞，以及咽腔部分的细胞组织［1］。NPC在中国的发病率和死亡率分别为3.16/10万和1.53/10万［2］。因疾病早期缺乏典型的临床表现，且病变位置隐蔽，早期肿瘤较难发现，NPC患者的5年生存率仅有47.96%［3］。对于NPC的治疗，传统的放疗治疗法是较为常见的。然而放疗也容易产生不良反应，需要对其放射强度等细节进行控制才能达到较好的肿瘤治疗效果［4］。因此，确定一些与NPC相关的因子作为判断NPC放疗预后效果的诊断指标，将能够更主动且有效地治疗NPC。

近年来，有研究报道［5-7］显示，下调X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apop-tosis protein，XIAP）表达，能够调节癌症细胞的增殖、迁移和侵袭。因此，XIAP与癌细胞的增殖情况具有相关性，推测XIAP可能可以作为评估NPC患者放疗预后的效果的重要诊断依据［8］。然而，到目前为止，并没有直接证据证明此观点，因此，本研究通过检测NPC患者γ射线照射后XIAP的表达水平，来探讨XIAP与NPC临床病理特征关系以及疗效评价中的作用，以期为临床决策及预后判断提供参考依据。

1　资料和方法

1.1一般资料 研究对象为宁波市医疗中心李惠利医院2010年1月至2012年12月接受放射治疗的NPC患者94例。入选标准：①均经病理组织学确诊为局部晚期NPC，病理类型均为非分化型非角化性NPC，并可获取病理组织标本进行XIAP表达检测；②活检前均未进行放化疗；③体能状态评分（ECOG PS）≤1分，预计生存期≥3个月；④至少有1个可经CT或MRI测量的肿瘤病灶；⑤无明显的主要器官功能损害；⑥无其他恶性肿瘤病史。排除标准：①治疗前即有远处转移；②合并严重内科疾病；③双重癌；④曾接受放化疗。NPC分期按UICC（2003年）和AJCC联合制定的TNM分期分类进行［9］；NPC肿瘤病理分类参考WHO（1991年）的肿瘤组织学分类法［10］进行。

1.2放疗方法 所有患者均采用模拟定位机定位，面罩固定头颈肩部，均进行常规分割剂量的放疗，每次2 Gy，每周5次。第1段采用面颈联合左右对穿野和下颈前切线野，照射DT 36 Gy；第2段避脊髓，照射DT 50 Gy；第3段避脑干，照射DT 66 Gy；第4段照射至根治量，鼻咽部剂量70～76 Gy，阳性淋巴结剂量66 Gy，复查有残留再加量至70 Gy。

1.3免疫组织化学检测 兔抗人多克隆抗体XIAP IgG由美国Upstake公司生产。采用EnVision法进行免疫组织化学染色，EnVisionTM检测试剂盒由丹麦DAKO公司生产。石蜡标本先做成3 μm厚的组织切片，常规脱蜡水化。滴加过氧化物酶阻断液，室温下孵育10 min。蒸馏水漂洗，置于PBS中10 min。组织抗原微波修复。滴加非免疫动物血清，室温下孵育10 min。滴加XIAP一抗（工作浓度为1︰200），湿盒中37 ℃孵育60 min，PBS漂洗10 min。EnVisionTM孵育10 min，PBS漂洗10 min。色源底物溶液孵育10 min，蒸馏水漂洗。DAB显色，苏木精复染，中性

1.6统计学处理分析 采用SPSS19.0统计软件进行数据分析。计量资料采用±s表示并进行正态性检验。2组间比较采用t检验。计数资料以Fisher’s精确检验。对可能影响预后的因素进行Kaplan-Meier法及log-rank检验，并通过Cox比例风险回归模型将NPC患者的临床病理因素纳入进行多因素分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1XIAP在NPC组织的表达及与临床病理指标的相关性 XIAP染色阳性表达主要定位于细胞质内，阳性表达细胞内可见棕黄色颗粒弥漫分布于整个细胞质，见图1。XIAP在NPC组织中总的阳性表达率为69.15%（65/94）。Spearman相关性分析提示XIAP阳性表达率与p-TNM分期和肿瘤分化程度呈负相关（r=-0.235，r=-0.337；均P＜0.05），而与性别、年龄、双侧颈部淋巴结转移、肿瘤大小、T-分期和N-分期无明显相关性（均P＞0.05），见表1。

2.2NPC患者放疗预后及其影响因素的单因素与多树胶封片。用PBS代替一抗作阴性对照。

1.4免疫组织化学结果判定 在光学显微镜下观察，XIAP在NPC组织中免疫组织化学染色以细胞质呈现棕黄色颗粒者为阳性，结果评分用双盲法，在高倍镜下计数500个癌细胞，结合阳性细胞百分率及阳性细胞染色强度2个方面计算XIAP免疫组织化学染色评分：①阳性细胞百分率：无阳性细胞为0分；阳性细胞0%～24%为1分；阳性细胞25%～49%为2分；阳性细胞50%～74%为3分；阳性细胞75%～100%为4分。②阳性细胞染色强弱：无色为0分；淡黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分。2项的乘积为该患者的免疫组织化学评分：乘积0～1分为阴性（-）；乘积≥2分为阳性，2～4分为弱阳性（+），5～7分为中等阳性（++），≥8～12分为强阳性（+++）。

1.5随访 采用门诊记录、电话随访或信访的方法进行随诊，每3个月复查1次，复查内容包括间接或直接鼻咽镜、鼻咽和上颈CT或MRI检查，以及胸片、B超、全身骨扫描等。取得有效数据，预测NPC放疗预后的价值。总生存期（overall survival，OS）定义为从放疗开始至死亡或最后随访的时间，随访截止时间为2015年1月，随访时间5～60个月，中位随访时间为45个月，失访3人，随访率为96.81%。死亡40例，病死率为43.96%。存活51例，生存率为56.04%。因素生存分析 Kaplan-Meier分析计算临床病理特征和XIAP表达对NPC患者生存情况的影响，见表2和图2。单因素生存分析表明，XIAP高表达、高p-TNM分期以及肿瘤低分化程度均与NPC患者存活率下降明显相关（均P＜0.05），而其他临床病理变量均无统计学意义（均P＞0.05）。多因素Cox回归分析显示XIAP表达、p-TNM分期以及肿瘤分化程度是影响NPC患者放疗生存的独立危险因素（P＜0.05），见表3。

图1　XIAP在NPC组织中的免疫组织化学特征

表1　XIAP表达与临床特征的关系

表2　NPC患者放疗预后及其影响因素的单因素分析（±s）

表2　NPC患者放疗预后及其影响因素的单因素分析（±s）

变量　n　OS　P XIAP低表达　29　54.75±2.12　＜0.003高表达　65　40.10±2.75性别男61　45.62±2.64　＜0.247 女33　42.79±3.58年龄（岁）＜60　56　45.74±2.67　＜0.817 ≥60　38　42.93±3.49双侧颈部淋巴结转移N0+单侧转移　61　48.60±2.35　＜0.082双侧转移　33　37.17±3.92肿瘤大小（cm）＜5　49　48.22±2.64　＜0.182 ≥5　45　40.73±3.29 T-分期T3　55　43.44±257　＜0.307 T1-2　39　47.28±3.75 N-分期N0　37　48.86±3.25　＜0.054 N1　57　41.87±2.74 p-TNM分期I-II　39　54.21±2.20　＜0.001 III　55　37.77±2.96肿瘤分化程度良好/中等　36　50.79±2.95　＜0.022 低58　40.64±2.13

图2　Kaplan-Meier生存分析

3　讨论

目前研究表明XIAP具有较强的抑制凋亡能力，特别在癌细胞中高表达，其可能是癌细胞恶性转化的重要原因之一［11-13］。本研究通过观察NPC患者放疗后XIAP的蛋白表达水平变化，旨在探讨XIAP与鼻咽癌临床病理特征关系以及放疗疗效评价中的作用。

表3　NPC患者放疗预后影响因素的Cox回归分析

本研究结果显示，XIAP在放疗的NPC组织中高表达，在NPC组织中总的阳性表达率为69.15%，且XIAP的阳性表达率与NPC患者的p-TNM分期和肿瘤分化程度呈负相关。此外，单因素生存分析表明，XIAP高表达、高p-TNM分期以及肿瘤低分化程度与NPC患者存活率下降明显相关，且多因素Cox回归分析结果表明XIAP表达、p-TNM分期以及肿瘤分化程度是影响NPC患者放疗生存的独立危险因素。作为抗凋亡蛋白家族的重要成员，XIAP通过抑制Caspases酶原的激活以及成熟Caspases的催化活性，从而抑制细胞的凋亡［14-15］。研究［16］表明，在癌细胞接受放射治疗后，XIAP的表达量都有较为明显的增加，与本研究结果相一致。我们推测可能是由于细胞内的XAF1（XIAP associated factor 1）以及DIABLO （direct inhibitor of apoptosis-binding protein with low pl）的表达量减少所导致的［17-18］。此外，XAF1及DIABLO均可对XIAP的表达及其功能产生抑制作用，是调节细胞正常凋亡代谢的重要因子［19-20］。当细胞发生癌变的情况下，XAF1及DIABLO的表达量都会相应的减少［11，21］，其主要原因可能是癌变影响了这些因子的转录与翻译过程。其中，XAF1在肿瘤细胞中，常因为其启动子区域甲基化导致了转录水平的减少［19，21］。XIAP的表达水平增加，会抑制癌细胞凋亡，最终导致NPC的发生发展。此外，有研究［20］表明XIAP能够通过促进NF-kB的表达而增强炎症因子的产生，促进了癌细胞的增殖以及侵袭等过程，从而影响患者预后。同时，XIAP的表达量往往与高p-TNM分期与肿瘤低分化程度成负相关。因而，XIAP高表达可能与NPC患者的预后相关。对此，XIAP的蛋白表达水平是影响NPC患者预后的重要因素，对患者的预后判断有一定的指导意义。

综上所述，XIAP在放疗的NPC组织中高表达，且XIAP的蛋白表达水平与NPC患者的p-TNM分期和肿瘤分化程度呈负相关，表明XIAP的高表达与NPC患者放疗预后相关。同时，XIAP表达、p-TNM分期以及肿瘤分化程度是影响NPC患者放疗生存的独立危险因素。

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（本文编辑：吴昔昔）

Relationship between XIAP expression and radiotherapy prognosis in nasopharyngeal carcinoma

XIANG Zhenfei1， FANG Jianchen2， LIN Li3， LU Miaozhen1， XU Quan1. 1.Department of Radiotherapy，Ningbo Medical Treatment Center Lihuili Hospital， Ningbo， 315040； 2.Department of Pathology， Ningbo Medical Treatment Center Lihuili Hospital， Ningbo， 315040； 3.Department of Hematology， Ningbo Yinzhou People’s Hospital， Ningbo， 315040

Abstract：Objective： To investigate the relationship between X-linked inhibitor of apoptosis protein （XIAP） expression and prognosis of patients with nasopharyngeal cancer （NPC） that received radiotherapy. Methods： A retrospective analysis was performed with the data of 94 NPC patients from January 2010 to December 2012. The expression of XIAP in NPC tissues was detected with immunohistochemistry （IHC）， and analyzed the prognosis relevance after radiotherapy. Results： The overall XIAP positive expression rate in NPC tissues was 69.15% （65/94） and the XIAP positive expression rate was negatively correlated with the p-TNM staging and the tumor differentiation （all P＜0.05）. Kaplan-Meier analysis showed that the high XIAP expression， high p-TNM staging and poorly differentiated were signifi cantly correlated with decreased survival rate of NPC patients （all P＜0.05）. Multivariate Cox regression analysis showed that XIAP expression， p-TNM staging and degrees of differentiation were independent risk factors for the survival of NPC patients after radiotherapy. Conclusion： The high XIAP expression， p-TNM staging and degree of differentiation are independent risk factors for the survival of NPC patients after radiotherapy.

Key words：X-linked inhibitor of apoptosis protein； nasopharyngeal cancer； radiotherapy； protein expression；prognosis； immunohistochemistry

［中图分类号］R762

［文献标志码］A

DOI：10.3969/j.issn.2095-9400.2016.04.007

收稿日期：2015-11-20

作者简介：项振飞（1981-），男，浙江宁波人，主治医师。