嗜酸性粒细胞增多性皮炎患者皮损中蛋白酶活化受体2的表达及意义

任国华（山东省菏泽市立医院，菏泽274000）



嗜酸性粒细胞增多性皮炎患者皮损中蛋白酶活化受体2的表达及意义

任国华
（山东省菏泽市立医院，菏泽274000）

摘要：目的观察蛋白酶活化受体2（PAR-2）在嗜酸性粒细胞增多性皮炎（HED）患者皮肤中的表达情况。方法采用免疫组化方法比较20例HED患者皮损及15例正常对照中PAR-2的表达情况。结果PAR-2在皮肤的表皮全层尤其是颗粒层以及毛囊、汗腺、血管内皮细胞、神经纤维样结构中均表达。HED患者皮损真皮血管内皮细胞中PAR-2的明显表达高于正常对照（t=3.83，P＜0.001）。结论PAR-2在HED患者血管内皮细胞内的表达增加，推测与其发病有一定关系。

关键词：嗜酸性粒细胞增多性皮炎；蛋白酶活化受体-2；血管内皮细胞

嗜酸性粒细胞增多性皮炎（HED）是一种剧烈瘙痒的疾病，病因不明，可能与超敏反应和自身免疫反应有关［1］。HED是嗜酸性粒细胞增多综合征（HES）的轻型或此疾病谱的良性端，是一种特发性嗜酸性粒细胞增多引起的皮肤病，由于外周血和组织中嗜酸性粒细胞增生并在靶组织中集聚而引起。既往研究发现，蛋白酶活化受体2（PAR-2）在特应性皮炎（AD）及银屑病皮损内的表达显著增加，且在AD皮损内注射PAR-2激动剂会增强和延长患者的痒感［2-3］。推测活化的PAR-2也可能是介导HED瘙痒和炎症反应的一条重要途径。本研究以免疫组化方法检测嗜酸性粒细胞增多性皮炎患者皮损中PAR-2的表达情况。

1　资料与方法

1.1一般资料

1.1.1对象入选者为2012年2月—2014年2月来我科就诊，符合Chusid［4］于1975年制定的HES的标准，且只有皮肤损害而没有明显内脏损害的患者，共20例，患者皆行血尿便常规及血生化、骨髓穿刺、病理活检检查。入选标准：2周内未外用糖皮质激素、免疫抑制剂类药物，4周内未接受系统糖皮质激素、免疫抑制剂治疗或光疗。本研究通过本院伦理委员会批准，受试者均签署知情同意书。

正常对照15例，取自非炎症性皮肤病外科手术切口边缘正常皮肤，性别、年龄及取材部位与患者基本匹配。

1.1.2主要试剂PAR-2鼠抗人单克隆抗体（PAR-2msIgG）购自美国Santa Cruz公司。

1.2方法

1.2.1皮肤标本制备4mm环钻切取患者躯干或四肢皮损，正常对照15例，取自非炎症性皮肤病（色素痣等）外科手术切口边缘正常皮肤。切取的皮肤组织浸入4%甲醛固定，石蜡包埋。

1.2.2免疫组化组织切片常规脱蜡，浸入0.01mo1/L柠檬酸盐缓冲液（PH6.0）进行抗原热修复；3%H2O2室温孵育10min，以阻断内源性过氧化酶；滴加Ⅰ抗PAR-2msIgG，4℃孵育过夜，PBS冲洗；滴加免疫组化二步法的试剂1（聚合酶辅助剂），室温孵育20min，PBS冲洗；滴加免疫组化二步法的试剂2（过氧化物酶标记的抗鼠/兔IgG多聚体），室温孵育30min，PBS冲洗；DAB显色；自来水充分冲洗；苏木精复染，脱水，中性树胶封片。Leica数字摄像系统采集图像，专业图像分析软件Image-Pro P1us6进行图像分析，测量PAR-2染色的平均吸光度值。每个标本随机取5个独立高倍视野（×400）测量，结果取平均值。

1.3统计学分析

采用SPSS16.0统计分析软件，检验水准α=0.05。患者皮损与非皮损部位及正常对照的比较采用配对样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1HED患者临床特点共20例，其中男14例，女6例，年龄45～75岁，平均（65.5±12.7）岁。病程从5个月～20年不等，发病年龄均在40岁以上，其中3例有异位性疾病病史，10例患者均为家族史。皮疹分布以躯干、四肢为主，皮疹形态为红色、暗红色及褐色，弥漫性浸润性红斑、丘疹、斑疹及色素沉着为主要皮损表现。患者均述瘙痒剧烈，部分患者睡眠受影响。全身见抓痕、结痂，6例患者四肢皮肤明显粗糙、增厚、苔藓化。

2.2实验室检查血常规：白细胞总数（4.6～19.5）×109/ L，嗜酸性粒细胞（1.6～10.5）×109/L。尿、便常规阴性。生化检查：1例患者乳酸脱氢酶升高，2例血肌酸激酶增高。3例三酰甘油升高，2例血糖增高。2例行骨髓穿刺示骨髓中嗜酸性粒细胞增生活跃。

其余化验未见明显异常。组织病理示真皮浅中层血管扩张，血管周围大量炎性细胞浸润，以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主，部分血管壁可见内皮细胞增生，管腔闭塞，真皮深层及脂膜层大量嗜酸性粒细胞浸润。

2.3HED患者皮损PAR-2表达情况PAR-2在正常皮肤及HED患者皮肤的表皮全层表达，此外，在毛囊、汗腺、血管内皮细胞、神经纤维样结构均有阳性表达。阳性细胞胞膜及胞质呈棕黄色细颗粒状分布，见图1。

2.4HED皮损与正常对照PAR-2表达对比HED患者皮损内真皮血管内皮细胞PAR-2吸光度值明显高于正常对照（P＜0.001），见表1。

图1　HED患者（A）和正常对照（B）皮肤PAR-2表达对照（DAB染色×400）

表1　HED皮损与正常对照PAR-2蛋白表达对比

3　讨论

PAR-2属于G蛋白偶联受体家族，介导跨膜信号转导，可以被丝氨酸蛋白酶激活。PAR-2在包括皮肤在内的不同组织细胞均有表达，具有广泛的生物学活性。其主要效应细胞为角质形成细胞和真皮血管内皮细胞。既往研究表明，在炎症性皮肤病如AD和银屑病皮损中，角质形成细胞、血管内皮细胞和肥大细胞［5］表达PAR-2均显著增加。皮肤真皮内皮细胞的PAR-2激活后可引起各种细胞因子如PGE2［6］、IL-8和趋化因子ICAM-16的分泌和释放，调节皮肤的免疫应答和炎症反应。本研究证实，PAR-2在HED患者皮肤的表皮全层尤其是颗粒层以及毛囊、汗腺、血管内皮细胞、神经纤维样结构均呈阳性表达。HED患者皮损真皮血管内皮细胞PAR-2明显表达高于正常对照。正常对照组微弱表达PAR-2，而HED组PAR-2表达水平均明显增高，说明HED发生与发展与PAR-2正相关。嗜酸性粒细胞通过与内皮细胞相互作用和趋化作用来进行其运输，从而实现其在靶器官的集聚。嗜酸性粒细胞一旦集聚于组织中，则通过多种细胞因子的作用而活化，并随即引起促炎症效应，随后引起病原体或者组织的破坏。表明HED患者发病可能与局部表达增高的PAR-2引起细胞因子和趋化因子分泌增高，从而导致嗜酸性粒细胞积聚有关。AD和银屑病皮损中有PAR-2的相关研究，但在HED中尚属首次报道，具体通过何种机制引起HED患者PAR-2增高还需进一步研究。

参考文献：

［1］赵辨.中国临床皮肤病学［M］. 4版.南京：江苏科学技术出版社，2010：751-761.

［2］倪春雅，刘玲玲，朱学骏，等.特应性皮炎患者瘙痒性皮损中神经形态变化及蛋白酶活化受体2的表达［J］.中华皮肤科杂志，2008，41（12）：818-820.

［3］于长平，周盛基.嗜酸性粒细胞增多性皮炎研究进展［J］.中国皮肤性病学杂志，2012，26（5）：449-451.

［4］Chusid MJ，Da1e DC，West BC，et a1. The hypereosinophi1ic syndrome：ana1ysis of fourteen cases with review of the 1iterature［J］. Medicine（Ba1timore），1975，54：1-27.

［5］Carva1ho RF，Ni1sson G，Harvima IT. Increased mast ce11 expression of PAR-2 in skin inf1ammatory diseases and re1ease of IL-8 upon PAR-2 activation［J］. Exp Dermato1，2010，19：117-122.

［6］Zhu Y，Wang XR，Peng C，et a1. Induction of 1eukotriene B（4）and prostag1andin E（2）re1ease from keratinocytes by protease-activated receptor-2-activating peptide in ICR mice［J］. Int Immunopharmaco1，2009，9：1332-1336.

·论著·

Expression of Protease-activated Receptor 2 in the Lesions of Hypereosinophilic Dermatitis Patients

Ren Guohua
Heze Municipal Hospital，Shandong 274000，China

Abstract：Objective In order to observe the expression of protease -activated receptor 2（PAR -2）in patients with hypereosinophi1ic dermatitis（HED）. Methods Immunohistochemica1 method was used to compare the expression 1eve1s of PAR-2 between the 1esions of 20 HED patients and 15 norma1 contro1s. Results PAR-2 were detected in epiderma1 1ayer，especia11y the granu1ar 1ayer and hair fo11ic1es，sweat g1ands，vascu1ar endothe1ia1 ce11s and nerve fibers-1ike structures. Moreover，the expression of PAR-2 in 1esiona1 vascu1ar endothe1ia1 ce11s in HED patients was significant1y higher than in hea1thy contro1s（t = 3.83，P＜0.001）. Conclusion The expression of PAR-2 was induced in endothe1ia1 ce11s of patients with HED，which maybe re1ated to the onset of HED.

Key words：Hypereosinophi1ic dermatitis；Protease-activated receptor-2；Vascu1ar endothe1ia1 ce11

收稿日期：（2015-12-06）

中图分类号：R758.63

文献标识码：A

文章编号：1672-0709（2016）02-0081-03