窄谱中波紫外线对寻常性银屑病Th1/Th2平衡偏移的影响

陈晋广，吴浩浪（.浙江省台州恩泽医疗中心（集团）台州市中心医院，台州38000；.南方医科大学附属小榄医院，中山5845）



窄谱中波紫外线对寻常性银屑病Th1/Th2平衡偏移的影响

陈晋广1，吴浩浪2
（1.浙江省台州恩泽医疗中心（集团）台州市中心医院，台州318000；2.南方医科大学附属小榄医院，中山528415）

摘要：目的研究窄谱中波紫外线（NB-UVB）治疗寻常性银屑病的临床疗效以及对患者Th1/Th2的影响，探讨NB-UVB治疗寻常性银屑病的机制。方法55例寻常性银屑病患者采用NB-UVB光疗。采用流式细胞技术分别于光疗前、光疗20次后检测患者外周血中CD4+CCR5+和CD4+CD30+细胞的表达；同时检测50例健康人作为对照组。结果治疗前银屑病组CCR5+细胞的百分比均高于对照组（P＜0.05）；CD30+细胞的百分比较对照组明显降低（P＜0.05）。患者光疗后得到明显改善（P＜0.01）。结论NB-UVB可有效调节银屑病患者Th1/Th2表达失衡，这可能是NB-UVB治疗银屑病免疫学机制之一。

关键词：窄谱中波紫外线；银屑病；T辅助性细胞1；T辅助性细胞2

银屑病是一种复发性自身免疫性疾病，大量的研究提示，CD4+T细胞即T辅助性细胞（He1per T ce11s，Th）在银屑病的发病中起着重要作用。在不同的条件下，初始CD4+T淋巴细胞可分化成不同T淋巴细胞亚群，包括Th1/Th2型、辅助性T细胞17（T he1per 17 ce11s，Th17）/调节性T细胞（Regu1atory T ce11，Treg）等，发挥不同的生物学效应。近年来随着对辅助性T淋巴细胞（Th细胞）研究的深入，发现CD4+T细胞向不同的方向极化时细胞表达不同的表面分子。其中CCR5和CD30分别被认为是Th1和Th2细胞的表面特异标志之一。许多学者认为银屑病的发病与Th1优势应答紧密相关［1］。窄谱中波紫外线（Narrow-bandu1travio1et B，NB-UVB）治疗银屑病临床疗效较好，但其作用机制仍未完全明了。本研究以Th1、Th2为观察指标，分别对银屑病患者接受NB-UVB光疗前、后Th1、Th2变化情况进行检测，探讨NB-UVB治疗银屑病的免疫学机制。

1　资料与方法

1.1病例资料55例寻常性银屑病患者均来自2013年6月—2014年10月中山市人民医院和南方医科大学附属小榄医院皮肤科门诊和住院患者。其中男31例，女24例；年龄21～45岁，平均（31.0±3.5）岁；病程1.5～10年。50例健康体检人员作为正常对照组，其中男27例，女23例；年龄19～47岁，平均（32.0±3.0）岁。2组研究对象在性别、年龄等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有研究对象对实验知情同意并签署知情同意书，实验经医学伦理委员会批准。

1.2排除标准患者近1个月内接受过系统性抗银屑病治疗或半个月内局部应用相关药物治疗者；妊娠期、哺乳期患者；伴有其他严重性系统性疾病或皮肤疾病；有紫外线照射禁忌证人群。

1.3光疗方法使用窄谱中波紫外线光疗仪（德国沃曼公司，波长为310～315nm、峰值311nm）进行治疗。首次光疗剂量为70%的最小红斑量（Minima1 erythema doses，MED），隔日1次；后续光疗剂量在前次剂量基础上按局部皮肤反应依次递增10%～20%，至光疗区皮肤出现淡红斑时则维持该剂量进行治疗。治疗过程中若出现疼痛性红斑或水泡时应停止光照，至皮损恢复后再继续照射，剂量为前次剂量的50%。20次为1个疗程。

1.4银屑病面积和严重程度指数（PASI）评定分别于光疗前、光疗20次后计算PASI评分，病情改善率（%）=［（治疗前PASI评分-治疗后PASI评分）/治疗前PASI评分］×100%。临床疗效分为治愈（病情改善率≥90%）、显效（病情改善率在60%～89%）、好转（病情改善率在25%～59%）和无效（病情改善率＜25%）4个等级。有效率=［（治愈+显效）/总治疗人数］×100%。

1.5CD4+CCR5+和CD4+CD30+的检测测定管和对照管分别加入100μL经EDTA-K2抗凝的清晨空腹静脉血。第1支测定管加人10μLPE-小鼠抗人CCR5及20μLFITC-小鼠抗人CD4，第2支测定管加入20μLPE-小鼠抗人CD30及20μLFITC-小鼠抗人CD4，非特异对照管加入FITC-小鼠IgG1/PE-小鼠IgG；对照管加人FITC-小鼠抗人CD4/PE-小鼠IgG。室温避光孵育25min，加入溶血素3mL混匀，待红细胞溶解后，离心2次，2000r/min离心5min，弃上清，加入200μLPBS重悬细胞，上机检测。应用Ce11Quest 3.1软件，以非特异对照调整电压：使FSC/SSC图像中大部分分析细胞位于中央，FL1、FL2的荧光图主峰在101内（FL1代表FITC染色，FL2代表PE染色）。分别以FITC-CD4或PE-CD30单染色调FL1～FL2的电压补偿。每次获取20000个细胞，在淋巴细胞门内分析阳性细胞的百分比以及PE-CCR5和PE-CD30的平均荧光强度（MFI）。

1.6统计学处理采用SPSS11.5统计软件包分析，各项指标以中位数和95%的可信区间表示；组间比较用Mann-Whitney检验；用Spearman秩相关建立MFI与PASI之间的关系；光疗前后比较采用t检验。

2　结果

2.1光疗前后PASI积分比较患者光疗20次后PASI（10.21±1.10）与光疗前（25.31±6.93）相比显著降低，症状明显改善，差异有统计学意义（P＜0.01）。其中治愈8例，显效35例，好转12例，无效0例，有效率为78.2%。

2.2光疗前后Th1/Th2比较光疗前银屑病患者外周血T淋巴细胞CD4+CCR5+的表达百分比明显高于对照组（P＜0.05），且CCR5+MFI与PASI呈正相关（r=0.401，P＜0.05）；CD4+CD30+细胞在银屑病患者中表达较对照组降低（P＜0.05），CD4+CD30+MFI与PASI无相关性（r=-0.237，P＞0.05）。光疗后银屑病患者CD4+CCR5+、CD4+CD30+表达与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1　银屑病患者光疗前后CD4+CCR5+、CD4+CD30+表达与对照组比较

2.3不良反应所有研究对象在治疗中未出现严重不良反应。

3　讨论

银屑病是在遗传背景下CD4+T细胞介导的自身免疫性疾病，起病涉及到感染、精神、环境等多种因素参与。趋化性细胞因子是细胞因子的一个超家族，主要通过与趋化因子的受体结合发生作用。趋化因子受体属于G蛋白偶联受体超家族，含有7个疏水性穿膜区段的链受体，其主要作用是传导信号、决定细胞定向游走和归巢，尤其是在炎症时。CCR5、CD30是趋化因子受体中两个重要的成员。CCR5是β趋化因子受体超家族，是3种趋化因子（RANTES、MIP-1a、MIP-1β）的受体，在体内的正常功能是与趋化因子结合，通过和异源三聚体G蛋白的结合来传递信息，诱导免疫细胞向趋化因子的来源部位移动，其在许多炎症区域均有表达。Th1和Th2细胞通过表达不同的趋化因子受体，使效应细胞移行于相应的炎症部位并选择性调节T细胞依赖的免疫反应。如在类风湿关节炎患者中，CCR5在外周血T细胞上的表达明显高于正常人［2］，表明CCR5的表达在Th1型自身免疫性疾病的发生中有着非常重要的作用。CD30与Th2细胞的功能及Th2反应相关的自身免疫性疾病有密切关系［3］。本研究显示，CCR5在银屑病患者外周T淋巴细胞中的表达高于正常人，CD30表达降低，提示在银屑病病人中Th1细胞活性处于优势，而Th2细胞活性处于弱势，说明银屑病患者以细胞免疫异常为主，而体液免疫受到抑制。由此推测，CD30、CCR5的表达不能平行上调是导致银屑病患者Th1/Th2失衡的机制之一，从而导致了银屑病患者Th1的优势表达。本试验还发现CCR5+、MFI与PASI呈正相关，反映CCR5的检测对银屑病病情判断和机体免疫状态有一定辅助诊断价值。

NB-UVB治疗银屑病安全性好、不良反应少、应用方便，在临床治疗中得到医生和患者的一致青睐。笔者采用NB-UVB治疗银屑病临床研究显示，NB-UVB治疗寻常性银屑病有效率达78.2%，疗效较好；治疗中未出现严重的不良反应，患者依从性好。本研究对经过NB-UVB治疗前、后的银屑病患者外周血中CCR5、CD30的水平进行了检测和分析，结果显示光疗后患者外周血中CCR5、CD30表达均得到明显改善，光疗后与对照组比较无明显差异（P＞0.05）。提示通过纠正患者外周血中CCR5、CD30表达失常是NB-UVB治疗银屑病的机制之一。笔者认为，针对银屑病发病中Th1功能的亢进，CCR5、CD30表达的异常为其免疫治疗提供了新思路。阻断CCR5的表达和结合，抑制Th1细胞向炎症区域的迁移，从而减轻过度有害的Th1型反应，在细胞分化的上游环节进行干预，以恢复Th1/Th2的平衡，很可能是治疗银屑病的一种更好的策略。相信随着对CCR5、CD30研究不断深入，不仅为银屑病免疫学发病机制的研究开辟新思路，而且也为临床治疗银屑病提供新方向。

参考文献：

［1］Hänse1 A，Günther C，Ingwersen J，et a1. Human s1an（6-su1fo LacNAc）dendritic ce11s are inf1ammatory derma1 dendritic ce11s in psoriasis and drive strong TH17/TH1 T-ce11 responses［J］. J A11ergy C1in Immuno1，2011，127：787-794.

［2］庞捷，余克强.活动期类风湿关节炎患者外周血树突状细胞CCR5和CCR7的检测及意义［J］.南方医科大学学报，2010，30（9）：2067-2069.

［3］周雄，胥志跃.淋巴细胞免疫功能的研究进展［J］.中国优生与遗传杂志［J］. 2012，20（5）：136-138.

·论著·

资助项目：广东省中医药局（20131075），广东省卫计委（A2014883）

Effects of Narrow-band Ultraviolet B Phototherapy on Th1/Th2 in Patients with Psoriasis Vulgaris

Chen Jinguang1，2，Wu Haolang3
1. Central Hospital of Taizhou Enze Medical Center in Zhejiang Province，Taizhoiu 318000，China；2.Zhongshan People＇s Hospital of Guangdong Province，Zhongshan 528403，China；3. Affiliated Xiaolan People's Hospital of South Medical University，Zhongshan 528415，China

Abstract：Objective In order to study the reba1ance of Th1/Th2 in patients with psoriasis vu1garis who received the narrow-band u1travio1et B（NB-UVB）therapy，and to exp1ore the mechanism of u1travio1et therapy in psoriasis with NB-UVB. Methods 55 patients were treated with NB-UVB radiation on1y. CD4+CCR5+and CD4+CD30+Treg were measured by f1ow cytometric ana1ysis before and after 20 times in patients who were treated with NB-UVB radiation. 50 hea1thy peop1e were enro11ed as contro1s. Results The proportion of CCR5+ce11s were significant1y increased in psoriasis（P＜0.05），compared with contro1s. The 1eve1 of CD30+in patients was siganificant1y decreased（P＜0.05）. After treated with NB-UVB，Th1/Th2 expression was changed（P＜0.01）. Conclusion Radiation of NB-UVB works we11 on Th1/Th2 in patients，and it may take effect through the ce11 immunity.

Key words：Narrow-band u1travio1et B；Psoriasis；Th1；Th2

收稿日期：（2015-01-10）

通信作者：陈晋广，E-mai1：tong1y0422@126.com

中图分类号：R758.63

文献标识码：A

文章编号：1672-0709（2016）02-0078-03