子宫内膜异位组织中VEGF、c-fos表达及意义

潘虹，刁静，汤蕴琦，潘颖琳，李佳蕊，张萍(上海交通大学医学院附属新华医院，上海200092)



子宫内膜异位组织中VEGF、c-fos表达及意义

潘虹，刁静，汤蕴琦，潘颖琳，李佳蕊，张萍(上海交通大学医学院附属新华医院，上海200092)

摘要：目的探讨子宫内膜异位组织中血管内皮生长因子(VEGF)、c-fos表达及意义。方法选择23例子宫内膜异位症(EMs)患者异位内膜组织23例份(异位内膜组)及在位内膜组织20例份(在位内膜组)，正常子宫内膜组织21例份(对照组)。采用免疫组化SP法检测各组VEGF表达，蛋白免疫印迹法检测各组c-fos表达，并分析内膜组织VEGF与c-fos蛋白表达的关系。结果异位内膜组和在位内膜组VEGF、c-fos表达均高于对照组，P均<0.05；异位内膜组和在位内膜组VEGF、c-fos表达比较，P均>0.05。子宫内膜组织中VEGF与c-fos表达呈正相关(r=0.425，P<0.05)。结论EMs患者在位及异位内膜组织中VEGF与c-fos表达均升高；c-fos可能通过上调VEGF表达，促进子宫内膜组织血管生成，继而引起EMs的发生。

关键词：子宫内膜异位症；血管内皮生长因子；c-fos

子宫内膜异位症(EMs)是指具有生长功能的子宫内膜组织，如腺体和间质，出现在子宫腔被覆内膜及宫体肌层以外的其他部位。育龄期妇女EMs的发病率为10%～15%[1],不孕症患者发病率高达40%[2]。EMs是一种良性疾病，但具有转移、侵袭等恶性生物学行为。研究发现，血管形成与EMs的发生密切相关[3,4]。c-fos、血管内皮生长因子(VEGF)是调节血管形成的重要因子，但其与EMs发病的关系鲜见报道。为此，我们进行了如下研究。

1资料与方法

1.1临床资料选取2010年6月～2012年6月在我院行腹腔镜和开腹手术的EMs患者23例，年龄24～47岁、平均35.6岁，均为卵巢子宫内膜异位囊肿，无其他合并症；既往月经规律，术前6个月未服用任何激素类药物，术后病理检查确诊为EMs；参照1985年美国生育学会修订的EMs分期标准(r-AFS)，均为Ⅱ、Ⅲ期。术后取其异位内膜组织23例份(异位内膜组)，其中增生期12例份、分泌期11例份，HE染色后均可见子宫内膜腺体；取其在位内膜组织20例份(在位内膜组)，其中增生期11例份、分泌期9例份。选取正常子宫内膜组织21例份(对照组)，均由其他良性疾病行子宫切除或宫腔镜检查刮宫所得，病理检查证实均无子宫内膜病变，其中增生期11例份、分泌期10例份。患者年龄26～48岁，平均36.3岁。

1.2VEGF表达检测各组标本分为两份，一份立即浸泡在10%甲醛中固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。采用免疫组化SP法检测VEGF表达，操作步骤严格按试剂盒说明书进行。采用Image-Pro Plus6.0软件分析显微镜下放大400倍的VEGF免疫组化图像。分析前先对阳性目标彩色分割、编辑，获得满意图形、图像，选取相应区域，测量其积分光密度(IOD)及面积，以IOD值除以测量面积得到平均光密度。每张切片在高倍镜下选取10个视野，计算10次平均光密度，取平均值。

1.3c-fos表达检测将另一份标本立即放入液氮中，置于-80 ℃超低温冰箱保存，采用蛋白免疫印迹法检测c-fos表达。加入组织裂解液后提取蛋白，测定蛋白浓度，裂解组织以每孔30 μg上样，行聚丙烯酰胺凝胶电泳。电转移至硝酸纤维素膜，封闭后依次加入兔抗人c-fos多克隆抗体、兔抗人actin多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG，最后经化学荧光发光法显影试剂盒显影，操作过程按说明书进行。采用数字凝胶成像系统对结果进行灰度扫描分析，相对表达量以c-fos灰度面积积分与内参照肌动蛋白actin的比值表示。

2结果

异位内膜组和在位内膜组VEGF、c-fos表达均高于对照组，P均<0.05；异位内膜组和在位内膜组VEGF、c-fos表达比较，P均>0.05。见表1。直线相关分析显示，子宫内膜组织VEGF与c-fos表达呈正相关(r=0.425，P<0.05)。

表1　各组VEGF、c-fos表达比较

注：与对照组比较，*P<0.05。

3讨论

EMs是雌激素依赖性良性病变，但具有一些类似恶性肿瘤的生物学行为，特别是组织侵袭和血管形成能力。目前EMs发病机制尚未明确，以Sampson的经血逆流种植学说为主。但经血逆流至盆腔是普遍的生理现象,其中发生EMs者只占10%～15%[5]，提示经血逆流可能只是诱因。因此，探讨子宫内膜在腹腔内种植生长的机制才是阐明EMs发病的关键。目前认为，黏附、侵袭、血管形成是内膜异位种植的病理生理过程[6]，其中黏附和侵袭的过程很短暂，而异位种植病灶的发生和发展依赖于充足的血液供应，故认为血管异常增生是EMs发病的重要原因[7]。

VEGF具有多种生物学效应，被认为是调节血管生长作用最强的因子[8，9]。原癌基因c-fos是受雌激素作用的靶基因之一，人类和小鼠c-fos基因启动子区域存在功能性雌激素反应元件，雌激素作用后c-fos表达显著上升，并与Jun蛋白形成转录因子AP-1，调节细胞侵袭、生长及血管形成等相关靶基因的表达。因此，c-fos被认为是雌激素早期应答基因，可作为雌激素作用的早期感受分子[10，11]。“在位内膜决定论”认为， EMs患者在位内膜组织VEGF表达明显高于非EMs[6]。本研究异位内膜组和在位内膜组VEGF、c-fos表达均显著高于对照组，而异位内膜组与在位内膜组VEGF、c-fos表达比较无统计学差异，与史淑红等[12]研究结论一致，均支持“在位内膜决定论”，提示EMs患者在位内膜组织血管生成能力较正常子宫内膜组织增强，一旦逆流进入腹腔，很容易产生新生血管，并进一步侵袭、发展，促使异位内膜的成功种植和发展。Rein等[13]研究显示，异位内膜组织VEGF表达高于在位内膜组织，本研究结果与其不同。可能与本研究采集异位内膜标本不同有关，新形成的异位内膜组织VEGF表达可能偏高，而陈旧性异位内膜组织VEGF表达可能下降。

研究显示，雌二醇通过c-fos上调乳腺癌组织VEGF表达，从而促进乳腺癌组织的血管形成[14]。Catar等[15]研究发现，TGF-β1可诱导腹膜间皮细胞表达VEGF,电泳迁移率试验显示TNF-α或IL-1β与TGF-β1共同作用后，通过c-fos激活VEGF基因启动子区域，而小干扰RNA抑制c-fos表达或c-fos抑制剂则降低VEGF基因启动子活性，并下调VEGF表达水平；提示c-fos是介导TNF-α、IL-1β与TGF-β1促进腹膜间皮细胞表达VEGF的重要分子。本研究结果显示，子宫内膜组织中VEGF与c-fos表达呈正相关，说明c-fos可能通过上调VEGF表达而促进异位子宫内膜组织血管生成，继而导致EMs的发生。本研究为探讨EMs的发病机制提供了新思路，有望为EMs临床治疗提供新靶点。

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中图分类号：R711.71

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2016)08-0063-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.025

通信作者：张萍(E-mail： shxinhuazp@163.com)

基金项目：国家自然科学基金青年科学基金资助项目(81100410)；上海市自然科学基金资助项目(10ZR1420200)。