β—catenin和VEGF在基底细胞癌中的表达及其相关性

黄洪欣　杜兴莉　姜长青

【摘要】 目的 探讨β-连环素（β-catenin）和血管内皮生长因子（VEGF）在皮肤基底细胞癌（BCC）组织中的表达相关性及其意义。方法 应用免疫组化Polymer方法检测42例皮肤BCC和27例皮肤组织慢性炎的β-catenin和VEGF的表达情况。结果 β-catenin在BCC和皮肤组织慢性炎阳性表达率分别为95.2%和11.1%， 比较差异具有统计学意义（P<0.01）；VEGF在皮肤组织慢性炎和BCC中阳性表达率分别为22.2%和90.5%， 比较差异具有统计学意义（P<0.01）。β-catenin和VEGR均呈阳性表达38例， 2例是β-catenin阳性， 而VEGF阴性2例， 两者均为阴性2例， 皮肤BCC中β-catenin与VEGF呈正相关（r=0.567， P<0.01）。结论 BCC中β-catenin异位表达可能是VEGF高表达的重要原因， 其在BCC发生中可能起重要作用。

【关键词】 基底细胞癌；β-连环素；血管内皮生长因子

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.29.022

皮肤BCC癌可能起源于不分化的多能表皮干细胞， 发病机制中β-catenin在Wnt信号途径中异常活化起到了关键作用。VEGF是强效且特异的促肿瘤血管生长因子， 近年来β-catenin的致肿瘤作用及促血管生成作用已成为研究热点[1]， 但两者在BCC中的作用还需更进一步的深入研究， 为此， 作者应用免疫组化Polymer法检测皮肤BCC中β-catenin和VEGF的表达， 初步探讨两者在皮肤BCC发生中的关联。

1 材料与方法

1. 1 材料来源 收集2012～2016年青岛市立医院手术切除的42例皮肤BCC和27例皮肤组织慢性炎标本， 患者年龄45～86岁， 一抗β-catenin和VEGF及二抗试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司， 工作浓度1∶100。

1. 2 方法

1. 2. 1 免疫组化染色 切片依次脱蜡水化， 加3%的双氧水15 min后蒸馏水洗片3次， 修复抗原后用磷酸缓冲盐溶液（PBS）洗3次， 加一抗4℃冰箱过夜， PBS洗3次后加二抗孵育20 min， DAB显色、苏木素液复染、梯度脱水、二甲苯透明、中性树胶封片、光镜观察。

1. 2. 2 结果判定 β-catenin染色结果依据Maruyama等[2]的方法：细胞膜阳性表达率>70%为正常表达， 不足判定为表达减弱或缺失， 胞浆或胞核阳性表达率>10%判定为异位表达。VEGF染色结果依据许良中等[3]的方法：染色强度无着色0分， 淡黄色1分， 棕黄色2分， 棕褐色3分， 着色细胞占计数细胞百分比率为0者记0分， <10%为1分， 10%～50%为2分， 51%～75%为3分， >75%为4分。染色强度与阳性细胞百分比相乘， <3分者为阴性， ≥3分者为阳性。

1. 3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验；两种蛋白相关性分析采用 Spearman 等级相关检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 β-catenin和VEGF的表达 β-catenin在BCC和皮肤组织慢性炎阳性表达率分别为95.2%（40/42）和11.1%（3/27）， 比较差异具有统计学意义（P<0.01）；VEGF在皮肤组织慢性炎和BCC中阳性表达率分别为22.2%（6/27）和90.5%（38/42）， 比较差异具有统计学意义（P<0.01）。

2. 2 皮肤BCC中β-catenin与VEGF关联性分析 β-catenin和VEGR均呈阳性表达38例， 2例是β-catenin阳性， 而VEGF阴性2例， 两者均为阴性2例， 皮肤BCC中β-catenin与VEGF呈正相关（r=0.567， P<0.01）。

3 讨论

β-catenin信号通路已成为近年来肿瘤生物学研究的热门课题， 当Wnt通路的某一环节出现异常， 就会使得β-catenin异常积聚入细胞核， 激活核内相关因子， 发挥其致癌与病理作用[4]。在皮肤肿瘤如黑素瘤、鲍恩病、BCC、鳞状细胞癌中均存在膜表达减少， 胞浆及胞核表达增强[5]。本研究结果表明β-catenin在皮肤BCC中呈现阳性表达率高达95.2%， 与其在皮肤组织慢性炎11.1%的低阳性表达率比较， 差异具有统计学意义（P<0.01）， 提示β-catenin的异位表达与皮肤BCC的发生关系密切。VEGF作为作用最强、特异性最高的促血管生长因子之一， 有研究发现VEGF在肺癌、肾癌、胃癌、食管鳞状细胞癌等多种肿瘤中呈高表达[6]。本研究结果显示， 在皮肤BCC中VEGF蛋白的阳性表达率明显高于皮肤组织慢性炎的表达率， 差异具有统计学意义（P<0.01）， 这与Bowden等[7]研究结果相似， 说明VEGF的高表达与皮肤BCC的发生也有密切关系。

近年研究表明， VEGF含有β-catenin道路的下游靶基因β-catenin /Tcf-4复合体的结合位点[6]， 因此突变的β-catenin 与 Tcf-4 位点结合， 启动下游靶基因 VEGF的表达上调。本研究结果显示， BCC中β-catenin和VEGR都呈高表达且有显著关联性， 也说明在皮肤BCC发生病变过程中， Wnt通路出现异常， 突变的β-catenin增多导致VEGF 表达增高。

本实验初步探讨β-catenin和VEGF在皮肤BCC中的表达及其关联性， 然而需明确二者在皮肤BCC中的作用机制， 仍需应用多方法深入且细致研究， 并应与临床皮肤BCC的治疗紧密结合。

参考文献

[1] Klaus A， Birchmeier W. Wnt signalling and its impact on development and cancer. Nat Rev Cancer， 2008（8）：387-398.

[2] Maruyama K， Ochiai A， Akimoto S， et al. Cytoplasmic beta-catenin accumulation as a predictor of hematogenous metastasis in human colorectal cancer. Oncology， 2000（59）：302-309.

[3] 许良中， 杨文涛. 免疫组织化学反应结果的判断标准. 中国癌症杂志， 1996（6）：229-231.

[4] Jamieson C， Sharma M， Henderson BR. Targeting the β-catenin nuclear transport pathway in cancer. Semin Cancer Biol， 2014（27）：

20-29.

[5] Nelson WJ， NusseR. Convergence of Wnt， bete-catenin， and cadherinpathways. Science， 2004， 303（5663）：1483-1487.

[6] 刘宣， 王炎， 殷佩浩， 等. Wnt /β-catenin 信号通路对人肠癌细胞VEGF 表达的调控作用. 中国癌症杂志， 2012， 22（12）：881-885.

[7] Bowden J， Brennan PA， Umar T， et al. Expression of vascular endothelial growth factor in basal cell carcinoma and cutaneous squamous cell carcinoma of the head and neck. J Cutan Pathol， 2002， 29 （10）：585-589.

[收稿日期：2016-09-26]