三阴性乳腺癌中COX-2、NF-κB及VEGF表达的临床研究*



·论著·

三阴性乳腺癌中COX-2、NF-κB及VEGF表达的临床研究*

马玲娣，董燕芬，刘乾，范静，蒋丽佳，陈亚红

(南京医科大学附属常州市第二人民医院检验科，江苏常州 213000)

摘要:目的研究环氧酶(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义。方法选取2010年1月至2014年12月于该院进行乳腺癌治疗的100例患者为研究对象，其中三阴性乳腺癌50例，非三阴性乳腺癌50例，采用免疫组织化学法检测100例患者乳腺癌组织中COX-2、NF-κB及VEGF的表达，并应用D2-40标记检测淋巴管浸润和淋巴管密度，对相关的临床病理资料进行统计分析。结果COX-2在三阴性与非三阴性乳腺癌中的表达分别为76%、70%，差异无统计学意义(P>0．05)，VEGF在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为60%和36%，差异有统计意义(P<0.05)。NF-κB在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为66%和32%，差异有统计意义(P<0.05)。三阴性乳腺癌组织中乳腺癌中NF-κB与VEGF，COX-2与VEGF表达呈正相关。结论放化疗是三阴性乳腺癌术后治疗的主要手段，而抑制NF-κB、VEGF和COX-2的表达有望成为治疗三阴性乳腺癌的新靶点，值得研究探索。

关键词:三阴性乳腺癌；环氧酶；血管内皮生长因子

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，成为威胁女性健康的主要病因[1]。三阴性乳腺癌是指雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体均呈现阴性的一种特殊类型的乳腺癌[2]，多发生于绝经前年轻女性，约占所有乳腺癌的15%，具有较强的肿瘤侵袭能力，易于远处转移，内脏转移和脑转移发生率较高，3年之内为转移高峰。预后较其他类型乳腺癌差，有较高的死亡风险[3]。三阴性乳腺癌和基底细胞样型乳腺癌之间存在某些基因表达谱和免疫表型上的差异，对此，本文选取2010年1月至2014年12月于本院进行乳腺癌治疗的100例患者为研究对象，采用免疫组织化学法检测100例乳腺癌组织中环氧酶(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达，并应用D2-40标记检测淋巴管浸润和淋巴管密度，对相关的临床病理资料进行统计分析，取得十分满意的疗效，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取2010年1月至2014年12月于本院进行乳腺癌治疗的100例患者为研究对象，患者均为女性,其中三阴性乳腺癌50例，年龄为18～64岁；非三阴性乳腺癌50例，患者均为女性,年龄18～65岁，术前均未行放、化疗及免疫治疗，术后均经病理组织学证实为乳腺癌。ER、PR、HER-2均为阴性的患者诊断为三阴性乳腺癌。纳入标准：明确诊断为乳腺癌，符合三阴性乳腺癌证候标准，试验前1个月未接受其他肿瘤药物治疗，预计生存期在6个月以上，患者精神、体力尚好，年龄18～65岁。

1.2试验方法检测NF-κBp65来表示NF-κB，因为NF-κBp65是NF-κB的主要组成因子,兔抗人NF-κBp65抗体、SABC试剂盒均购自武汉博士德公司。鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人COX-2单克隆抗体均购自Santa Cruz公司，采用SABC法，操作按试剂盒说明书进行。主要包括山羊血清封闭,分别依次滴加抗NF-κBp65、COX-2、VEGF抗体过夜(工作浓度1∶2 000),生物素化二抗及ABC复合物,DAB显色,苏木精复染后封片。用PBS代替一抗作阴性对照,用已知乳腺癌阳性片做阳性对照。全部新鲜标本24 h内经4%甲醛固定,常规石蜡包埋，厚4 μm连续切片，均作HE和免疫组织化学染色。

1.3疗效评价每张切片分别随机取共5个区域的细胞计数，每个区计数200个肿瘤细胞，共计数1 000个细胞，计算染色细胞所占比例，NF-κB阳性染色呈浅棕色或深棕色，定位于细胞核。阳性染色细胞数小于10%为表达阴性(-);≥10%为表达阳性(+)。COX-2和VEGF阳性染色阳性细胞呈棕黄或棕褐色颗粒，主要定位于细胞浆。

1.4统计学处理采用统计学软件SPSS15.0，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，检验水准为α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌COX-2、NF-κB和VEGF表达率比较COX-2和VEGF阳性染色阳性细胞呈棕黄或棕褐色颗粒，主要定位于细胞浆。COX-2在三阴性乳腺癌的阳性表达率为76%，高于非三阴性乳腺癌的70%，但差异无统计学意义(P>0.05)。然而，VEGF在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为60%和36%，差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κB在三阴性乳腺癌病变和非三阴性乳腺癌病变中阳性表达率分别为66%和32%，差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表1(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。

2.2三阴性乳腺癌组织中NF-κB与VEGF表达的关系在33例NF-κB阳性标本中,有28例同时存在VEGF阳性表达；而在20例VEGF阴性标本中,有15例伴NF-κB表达缺失,相关分析证实,三阴性乳腺癌组织中NF-κB与VEGF表达呈显著正相关(P<0.05)，结果见表2。

表2　　三阴性乳腺癌组织中NF-κB与VEGF

表3　　三阴性乳腺癌组织中COX-2与VEGF

2.3三阴性乳腺癌组织中COX-2与VEGF表达的关系在38例COX-2阳性标本中,有29例同时存在VEGF阳性表达；而在20例VEGF阴性标本中,有11例伴COX-2表达缺失,相关分析证实,三阴性乳腺癌组织中COX-2与VEGF表达显著正相关(P<0.05)。结果见表3。

3讨论

NF-κB是一类重要的核转录因子，一般情况下，NF-κB以非活性形式存在于胞质，当NF-κB被激活后，NF-κB从胞质转位于胞核，调节多种细胞激酶、趋化因子、生长因子、细胞黏附因子及早期反应的蛋白质分子基因的转录[4]。然而其异常激活将导致细胞不能正常转导信号，促进细胞癌变。参与细胞增殖、细胞凋亡、炎症反应和免疫反应[5-6]，近年来研究表明NF-κB异常活化与许多人类疾病，例如乳腺肿瘤、卵巢肿瘤、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等多种实体肿瘤发生、发展和转移密切相关[7-9]。在本研究中，三阴性乳腺癌病变中 NF-κB 阳性表达率为66%,非三阴性乳腺癌病变中 NF-κB 阳性表达率为32%，显示在三阴性乳腺癌组织中 NF-κB表达显著高于非三阴性乳腺癌组织。

COX-2 是一种膜结合蛋白酶，参与新生血管生成、肿瘤细胞增殖，并且抑制凋亡，从而有利于肿瘤的发生、发展。在通常情况下，在乳腺癌患者中具有较高的表达，且与预后密切相关[10]。因此，COX-2在肿瘤转移中发挥着重要作用[11]。然而，大多数乳房恶性肿瘤的高病死率与肿瘤转移密切相关[12]。本研究表明COX-2 在三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌中分别为76% 和 70%，差异无统计学意义(P>0.05)，其主要原因可能在于COX-2 是大多数肿瘤比较普遍的基因表达产物，并且参与乳腺癌发生、发展的多个方面。

VEGF 是一种能够特异性促使血管内皮细胞增殖，参与内皮细胞活化、迁移、入侵和生存的蛋白，在多种实体恶性肿瘤中具有较高的表达[13]。研究表明，乳腺肿瘤的生长和转移依赖血管的生成，即从现有的血管形成新的血管网络。然而，这一过程的主要调节者是VEGF[14]。在本研究中，三阴性乳腺癌病变中 VEGF阳性表达率为60%,非三阴性乳腺癌病变中VEGF阳性表达率为36%，可见在三阴性乳腺癌组织中 VEGF表达显著高于非三阴性乳腺癌组织。综上所述，三阴性乳腺癌病变中，COX-2、NF-κB及VEGF均呈现高表达,与非三阴性乳腺癌病变组织相比，NF-κB及VEGF表达差异有统计学意义(P<0.05)。

除此之外，本研究发现NF-κB与VEGF，COX-2与VEGF表达存在明显正相关。放化疗是三阴性乳腺癌术后治疗的主要手段，近年来，分子靶向治疗成为了研究的焦点，但目前尚无标准的治疗方法[15]。COX-2、NF-κB和VEGF 在三阴性乳腺癌中高表达，且NF-κB与VEGF，COX-2与VEGF表达存在明显正相关。因此，抑制NF-κB、VEGF和COX-2的表达有望成为治疗三阴性乳腺癌的新靶点。

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Clinical research on COX-2,NF-κB and VEGF expression in triple negative breast cancer*

MaLingdi,DongYanfen,LiuQian,FanJing,JiangLijia,ChenYahong

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChangzhouSecondPeople′sHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Changzhou,Jiangsu213000,China)

Abstract:ObjectiveTo study the cyclooxygenase (COX-2),nuclear factor-κB (NF-κB) and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression and clinical significance in triple negative breast cancer.MethodsFrom January 2010 to December 2014,breast cancer treatment in our hospital 100 patients for the study,50 patients with triple negative breast cancer,50 cases of non-triple negative breast cancer was detected by immunohistochemistry，100 cases of breast cancer were detected by immunohistochemistry in organizations COX-2,NF-κB and VEGF expression of lymphatic vessel invasion and lymph vessel density and D2-40 mark detection,statistical analysis of relevant clinical and pathological information.ResultsCOX-2 in triple negative and non-triple negative breast cancer were 76%,70%,the difference was not statistically significant (P>0.05),VEGF triple negative breast cancer and non-triple negative breast lesions in cancerous lesions positive expression rates of 60% and 36%,respectively,which had significant difference (P<0.05).NF-κB in triple negative breast cancer lesions and non-triple negative breast lesions positive expression rate was 66% and 32%,respectively,which had significant difference (P<0.05).Triple negative breast cancer NF-κB and VEGF,COX-2 and VEGF expression was significantly positively related to breast cancer.ConclusionRadiation and chemotherapy is a major means of triple negative breast cancer postoperative treatment,while inhibiting the NF-κB,the expression of VEGF and COX-2 is expected to become the new target for treatment of triple negative breast cancer,is worth exploring.

Key words:triple negative breast cancer; cyclooxygenase;vascular endothelial growth factor

(收稿日期：2015-11-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.002

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)04-0436-03

基金项目：国家自然科学基金资助项目(81101647)。

作者简介：马玲娣，女，副主任技师，主要从事肿瘤免疫及中药抗肿瘤研究。