2014年昆明某三甲医院手足口病病原及流行特征分析*

王　杨，李　铮，曹向红，付晓野，高　辉，赵思涵

(昆明市延安医院检验科，云南昆明 650051)



·论著·

2014年昆明某三甲医院手足口病病原及流行特征分析*

王杨，李铮，曹向红，付晓野，高辉△，赵思涵

(昆明市延安医院检验科，云南昆明 650051)

摘要:目的对2014年昆明市延安医院就诊的手足口病(HFMD)病例进行回顾性分析总结，了解其病原分布及流行病学特点。方法应用实时荧光定量PCR对130例手足口病临床诊断病例的粪便标本进行病毒核酸检测，并对其年龄分布特点、季节分布情况进行分析。结果非重复性的130例临床诊断病例中，病原阳性检出79例，总阳性率为62.2%，其中EV71占检出病原的5.1%(4/79)，CA16占检出病原的17.7%(14/79),其他型占77.2%(61/79)。4个年龄组中，1～3岁组和3～6岁组高于0～1岁、>6岁组，4年龄组间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。5～7月为HFMD发病高峰期，在全年发病例数及全年阳性检出例数的构成比中均为最高，8月开始发病例数有减少趋势，但12月又有所增加。结论手足口病5～7月为发病高峰期，以6月为最高；发病率以幼儿及学龄前儿童(2～6岁)为最高。

关键词:手足口病；肠道病毒71 型；柯萨奇病毒A16 型

手足口病(hand-foot-and-mouth disease，HFMD) 是由多种肠道病毒(enteroviruses，EV) 引起的一种常见传染病，病毒类型有20 多种，其中肠道病毒71 型(EV71)和柯萨奇病毒A16 型(CoxA16) 为最主要的病原体[1]。手足口病严重威胁儿童健康，近年来，其发病例数更是高居丙类传染病之首。本文采用实时荧光定量聚合酶链反应法(real time quantitative PCR，RT-PCR)对送检标本进行病毒核酸分型检测，并将病原构成、年龄分布情况及季节流行特点等资料进行汇总分析，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料非重复的HFMD临床诊断病例130例，男75例，女55例，最小的5月龄，最大11岁。来源于2014年1月至2014年12月期间于昆明市延安医院就诊的门诊及住院患者。诊断标准参考《手足口病预防控制指南(2010年版)》。

1.2仪器与试剂仪器：ABI StepOne实时荧光定量PCR仪；试剂：中山大学达安基因有限公司提供的肠道病毒通用型(EV)、EV71型和CoxA16型RT-PCR检测试剂盒。

1.3 方法

1.3.1标本采集与保存采集患者发病3日内的粪便样本(5～8 g/份)，采集后立即放入无菌采集管内。标本可立即用于测试，也可保存于-20 ℃待测。

1.3.2样本处理与RNA提取水样粪便样本混匀后备用；较干粪便样本加入适量生理盐水充分混匀后备用。在1.5 mL的无菌离心管内加入50 μL的蛋白酶K；取200 μL样品加入离心管中；再加入200 μL裂解工作液，盖紧管盖，漩涡振荡15 s，高速离心10 s，72 ℃ 10 min，然后加入250 μL乙醇，盖紧管盖，漩涡振荡15 s；将混合液全部吸至离心柱，室温下12 000×g离心1 min，将离心柱装至新的收集管；将500 μL抑制物去除液加入离心柱，室温下12 000×g离心1 min，将离心柱装至新的收集管；再次将500 μL抑制物去除液加入离心柱，室温下12 000×g离心1 min，将离心柱装至新的收集管；将离心柱-收集管于室温下14 000 g离心3 min；将离心柱取出，放置于新1.5 mL离心管，打开离心柱盖子，72 ℃放置2 min以除去残余的乙醇；在离心柱膜的正上方加入72 ℃预热的洗脱液50 μL，盖紧管盖，室温静置1 min，14 000×g离心1 min，离心管内即为核酸溶液，可用于检测。

1.3.3PCR扩增取N个(N=阴性质控品+待测样本+阳性质控品)PCR反应管，每管分别加入RT-PCR反应液15 μL、逆转录酶系2 μL、Taq酶系3 μL，于上述PCR管中分别加入处理后的阴性质控品、待测样本核酸溶液、阳性质控品5 μL，3 000 r/min离心30 s，放入PCR扩增仪。热循环参数为40 ℃ 25 min，1个循环；94 ℃ 3 min，1个循环；93 ℃ 15 s，55 ℃ 45 s，40个循环。

1.3.4结果判断每次实验均检测阴性质控品和阳性质控品，质控品结果满足质量控制要求时方进行检测结果的判定。阳性结果判定标准：扩增曲线呈典型S型扩增曲线，且Ct值小于或等于34.8。阴性结果判定标准：无典型S型扩增曲线或Ct值大于34.8。

1.4统计学处理本研究数据用SPSS 17.0软件统计，组间阳性率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1HFMD肠道病原及年龄分布情况2014年130例非重复性临床诊断病例中，检出EV阳性79例，其中EV71 4例，CA16 14例，其他型61例，阳性率分别为3.1%、10.8%、46.9%。0～1岁组阳性率为41.4%；1～3岁组、3～6岁组阳性率分别为69.1%、67.5%；>6岁组阳性率为33.3%。4个年龄组中，1～3岁组和3～6岁组高于0～1岁、>6岁组，4年龄组间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。各年龄组病原感染阳性率见表1。

表1　　各年龄组病原检测阳性构成情况[n(%)]

χ2=8.826，P=0.03。

2.2HFMD的流行季节分布特点2014年本院非重复性手足口病临床诊断病例130例中，5月、6月和7月发病例数最多，在全年发病例数构成比中分别占16.9%、26.9%和20.0%，8月起发病例数有减少趋势，但12月又出现升高。另从EV检测的阳性例数来看，5～7月的阳性例数在全年阳性检出总数中也是最多，分别占12.7%、32.9%和20.2%。8月开始阳性检出例数减少，12月又有所增加。各月份发病例数及EV阳性检出例数在全年中的构成情况见表2。

表2　　各月份发病例数及阳性检出例数的构成情况[n(%)]

3讨论

HFMD是由多种肠道病毒感染引起的丙类传染病，其中EV71与CA16为其主要病原体，不同地区的病原流行情况有一定的差异。山东济南的研究者发现，138例重症HFMD病例中，阳性检出率为95.65%，其中EV71占86.36%；CA16占6.52%，其他型占6.52%[2]。武汉阳逻地区研究表明，2008至2011年EV71型的比例逐年增加，至2011年达高峰[3]。昆明地区2010～2012年研究报告，病原体以EV7l型(44.0%)和CA16型(41.0%)为主[4]。浙江宁波报道2008～2013年EV71阳性率呈现下降趋势，其他肠道病毒阳性率呈增长趋势[5]。

本院于2014年收治的HFMD临床诊断病例130例中，肠道病毒阳性检出79例，阳性率为(62.2%)，其中EV71占检出病原的5.1%(4/79)，CA16占检出病原的17.7%(14/79),其他型占77.2%(61/79)。基于以上病例进行的流行病学调查结果显示，其他型肠道病毒才是HFMD的主要病原，而CA16及EV71所占比例不高。此结果与上述山东、武汉、昆明的报道存在较大差异，而与浙江宁波报道的HFMD病原变化趋势有相似之处。原因可能是以下3点：(1)地区差异；(2)本组数据只统计了2014年度本院的HEMD临床诊断病例及检测情况，标本量较少，代表性有限；(3)或许是近年病原构成发生了变化。为此，将继续跟进研究以验证病原构成情况。

国内同行前期研究成果表明，HFMD有一定的季节性流行特点，其发病数与温度及湿度呈正相关。如郑州地区HFMD流行集中于3～7月份，4～5月份达到高峰[7]。浙江苍南县发病高峰3月份开始，至7月份下降[6]。在北京，高温多雨的夏季是HFMD的高发季节[8]。

但在本研究中却得出了与上述地区有所不同的结果。此次研究显示，5～7月为HFMD的发病高峰期，发病例数及阳性例数在全年构成比中均最高，尤以6月份为最。8月开始病例数有减少趋势，但到12月又有所增加，1～3月发病率降至全年最低。昆明地区的HFMD在夏、冬两季出现2次流行，这主要是和昆明的地理及气候因素有关。昆明位于云贵高原，海拔近2 000米，所处纬度较低，属于典型的亚热带低纬高原山地季风气候。夏季盛行湿润的海洋季风，冬季盛行干燥的大陆季风。夏无酷暑，冬无严寒，气候呈现四季如春的鲜明特色，其温暖湿润的环境正好适合肠道病毒的生存与传播。

同时，HFMD有显著的年龄分布特点。北京地区的患者主要集中在10岁以下儿童，其中5岁以下发病最多，其次为5～9岁年龄段[9]。浙江丽水的患者以学龄前为主，主要集中在0～5岁，以1岁组发病最高[10]。贵州毕节的HFMD病例中，0～6岁患儿占92.94%，而3岁及以下的幼儿占66.37%[11]。昆明的HFMD患者39.46%为婴幼儿，7岁以下儿童占97.90%[12]。

本组资料分析显示，在该病流行期间，2～3岁组及4～6岁组的发病例数和阳性检出率都较高，阳性率分别为69.1%、67.5%，反映出幼儿与学龄前儿童更易感染该病。这与本地区手足口病流行病学的相关文献报道相符[12-13]。造成手足口病易感年龄分布这一特点的原因可能是：一方面，幼儿的抵抗力相对较弱；另一方面，这两个年龄段的儿童多集中于幼儿园，容易发生相互交叉传染。

近年来，手足口病的发病率呈现上升趋势，应密切监控其病原及流行情况的进展变化。为了儿童的健康，相关机构要积极开展健康宣传教育与防治，改善环境卫生状况，及时发现疫情并隔离；家长要在HFMD流行季节，尽量避免带幼儿到人群密集、空气不流通的公共场所活动。

参考文献

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Analysis on etiology and epidemiological characteristics of hand-foot-mouth disease

in a class 3A hospital in Kunming during 2014*

WangYang,LiZheng,CaoXianghong,FuXiaoye,GaoHui△,ZhaoSihan

(DepartmentofClinicalLaboratory,KunmingYananHospital,Kunming,Yunnan650051,China)

Abstract:ObjectiveTo retrospectively analyze and summarize the children cases of hand，foot and mouth disease(HFMD) in our hospital during 2014 for understanding its etiological distribution and epidemiological characteristics.MethodsThe stool samples in children cases of clinically diagnosed HFMD were collected and performed the viral nucleic acid detection.The age distribution characteristics,season distribution situation were analyzed.ResultsAmong 130 cases of non-repetitively clinically diagnosed HFMD,the pathogen positive detection was in 79 cases with the total positive rate of 62.2%,in which EV71 accounted for 5.1%(4/79) of detected pathogens,CA16 accounted for 17.7%(14/79) and the other types accounted for 77.2%(61/79).In 4 age groups,the positive detection rate in the 1-3 years old group and the 3-6 years old group was higher than that in the 0-1 years old group and the >6 years old group,the positive detection rate had statistical difference among 4 age groups(P<0.05).May to July was the peak period of HFMD onset,its constituent ratio to the full year onset cases and full year positive detection cases was highest.The onset cases number of HFMD began to reduce in August,but it increased again in December.ConclusionMay to July is the peak period of HFMD onset,especially in June.The incidence rate of HFMD is highest in infants and preschool children (2-6 years old).

Key words:hand-foot-mouth disease;enterovirus type 71;Coxsackie virus A16

(收稿日期：2015-07-18)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.004

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)01-0008-03

*基金项目：云南省应用基础研究项目(2014FB080)

作者简介：王杨，女，副主任医师，主要从事分子生物学检验研究。△通讯作者，E-mail：kathy7227@sina.com。