茶寄生中茶多酚含量的分析

侯冬岩，刁全平，李铁纯，回瑞华，宋美蓉

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院,辽宁 鞍山 114007)

茶寄生中茶多酚含量的分析

侯冬岩，刁全平，李铁纯，回瑞华，宋美蓉

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院,辽宁 鞍山 114007)

对茶寄生中茶多酚的含量进行分析.茶多酚是混合物，由于各种茶多酚结构相似，较难分离.没食子酸(EC)、表没食子儿茶素 (EGC)、没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)、表儿茶素没食子酸酯 (ECG)4种茶多酚是茶叶中茶多酚的主要成分.本研究采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定了EC、EGC、EGCG、ECG 4种茶多酚，4种茶多酚在15 min内达到有效分离，方法的变异系数小于0.036 0%，回收率为95.2%～104.2%.实验结果表明，茶寄生样品中只含有茶多酚中的EGC,其中云南粗茎茶寄生样品中的EGC含量略高于云南细茎茶寄生样品中EGC含量.

茶寄生；高效液相色谱法；茶多酚；测定

茶寄生即茶树枝干上的一种寄生物，因形如蟹肢而得名“螃蟹脚”.茶寄生为多年生草本植物，绿色，晒干后为棕黄色.

茶多酚又叫茶单宁、茶鞣质，是茶叶中酚类及其衍生物的总称.茶多酚具有很强的抗氧化能力，其抗氧化能力可达L-抗坏血酸的100倍.现代科学研究认为，人体衰老的原因在于人体的细胞在代谢过程中连续不断地产生具有高度活性的自由基和细胞自身的抗氧化酶及超氧化物歧化酶(SOD)不断消除作用的失衡而使自由基浓度过剩.茶多酚具有很强的清除人体自由基的作用，是极强的消除有害自由基的天然物质.茶叶中含有丰富的茶多酚，已有不少研究结果发表[1～6]，而茶寄生中茶多酚的含量的分析未见报道.本文采用高效液相色谱法，对茶寄生中茶多酚含量相对较高组分即没食子酸、表没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯进行分析，为进一步开发利用茶寄生提供科学参考.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters 1525-2996-tcm 液相色谱仪(美国Waters公司)；KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)；80-2B型台式离心机(上海安亭科学仪器厂).

甲醇(色谱纯)、乙酸乙酯(分析纯)、冰乙酸(分析纯).

标准品：EC(中国药品生物制品检定所)；EGC(天津一方科技有限公司)；EGCG(天津一方科技有限公司)；ECG(天津一方科技有限公司).

1.2 实验样品

茶寄生样品：云南粗茎茶寄生，云南细茎茶寄生，均产于云南.

将样品在中药粉碎机中粉碎，过0.425 mm孔径的筛子，装袋备用.

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液配制 准确称取0.004 1 mg的EC标准品，甲醇溶解、定容至10 mL容量瓶中，摇匀备用.准确称取0.002 6 mg的EGC标准品，甲醇溶解、定容至10 mL容量瓶中，摇匀备用.0.006 5 mg的EGCG标准品，甲醇溶解、定容至5 mL容量瓶中，摇匀备用.准确称取0.006 8 mg的ECG标准品，甲醇溶解、定容至5 mL容量瓶中，摇匀备用.

标准品混合溶液：向10 mL的容量瓶中，加入以上配制好的EC、EGC标准溶液各2 mL，EGCG、ECG的标准溶液各1 mL，用甲醇定容，摇匀，此即标准品的混合溶液[7].

1.3.2 样品前处理及样品溶液的制备 于50 mL的锥形瓶中，称取1.00 g的样品固体粉末，在10 mL的沸水浴中提取20 min，离心10 min，取上层清液用乙酸乙酯10 mL(分2次，每次5 mL)萃取，合并萃取液，用旋转蒸发仪除去萃取液中的乙酸乙酯，用2 mL甲醇溶解旋转蒸发后的溶液，此即为待测溶液.测定前经过0.45 μm的一次性有机膜过滤，得滤液备用[8].

1.3.3 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇∶乙酸∶水=25∶2∶73(V/V)；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10.0 μL；检测器：紫外检测器；扫描波长：210～400 nm；检测波长：274.8 nm.

1.3.4 测定方法 将样品分别按1.3.2处理，按1.3.3色谱条件进行测定，每个样品测定3次.

2 结果与讨论

2.1 最大吸收波长的确定和标准曲线的绘制

分别将1.3.1的标准品和1.3.2处理的样品按1.3.3色谱条件进样，在210～400 nm扫描其紫外吸收，最大吸收波长分别为272.4，272.4，274.8，278.4 nm，综合考虑，确定274.8 nm为茶多酚的紫外检测波长.

分别将1.3.1的4种标准溶液进行稀释，组成一系列不同浓度的溶液，在1.3.3的色谱条件下分别进样，进样量为10 μL，记录峰面积.以积分峰面积为横坐标，以质量浓度为纵坐标，绘制标准曲线，4种茶多酚标准品的线性方程及相关系数列在表1中.

表1 4种茶多酚标准品的标准曲线方程

由表1回归方程和相关系数可知，标准品峰面积与标准品浓度呈良好线性关系，可按标准曲线法进行定量分析.

2.2 精密度实验

分别从1.3.1的标准品储备液中精确量取1.0 mL，并制成一定质量浓度的溶液，在1.3.3的色谱条件下分别进样10 μL，相同条件下测定9次，记录峰面积，代入2.1的标准曲线中，计算出对应浓度.求得其标准偏差和变异系数，方法精密度结果如表2.

表2 精密度实验

2.3 回收率实验

对4种茶多酚分别进行加标回收率实验.向样品中分别加入不同量的标准品，在1.3.3色谱条件下进样，根据记录的峰面积计算对应的浓度，得到回收率,如表3.

表3 方法的回收率实验

2.4 最低检出限

取1.3.1中的标准储备液逐级稀释后进样，当响应值为基线噪音2倍时，测定其峰面积，所对应的浓度为该检测方法的最低检出限，EC、EGC、EGCG、ECG的最低检出限分别为0.01，0.02，0.002 ,0.001 mg/L.

2.5 样品中茶多酚含量的测定

2.5.1 茶多酚标准品和样品的色谱图 分别取1.3.1的混合标准溶液和1.3.2处理后的样品溶液，在1.3.3的条件下进样测定，得到色谱图，如图1～3.

图1 标准品混合溶液的色谱图

图2 云南细茎茶寄生的色谱图

图3 云南粗茎茶寄生的色谱图

由图1可知，在混合标准溶液中，EC的保留时间为3.484 min，EGC的保留时间为4.402 min，EGCG的保留时间为6.294 min，ECG的保留时间是11.869 min.而样品色谱图图2和图3中只检测到EGC，即茶寄生样品中只含有茶多酚中的EGC.

2.5.2 样品中茶多酚含量的测定 将样品经过1.3.2处理后，按照1.3.3色谱条件进样，茶多酚EGC在茶寄生样品中的含量如表4.

表4 茶寄生样品中EGC的含量

3 结论

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，它是混合物，由于各种茶多酚结构相似，较难分离.本研究采用HPLC法同时测定了EC、EGC、EGCG、ECG4种茶多酚,4种茶多酚在15 min内达到有效分离,且精密度和准确度较好.

据文献报道，EC、EGC、EGCG、ECG4种茶多酚是茶叶中茶多酚的主要成分.本实验结果表明，茶寄生样品中只含有茶多酚中的EGC.在云南粗茎茶寄生和云南细茎茶寄生样品中，云南粗茎茶寄生样品中的EGC含量略高于云南细茎茶寄生样品中EGC含量.

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[6] 袁华芳，侯冬岩，回瑞华.紫外光谱法比较乌龙茶和乌龙茶嫩茎中的茶多酚含量[J].鞍山师范学院学报,2007,9(4):53-55.

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(责任编辑：陈 欣)

The analysis of tea polyphenol content in tea parasitic

HOU Dongyan,DIAO Quanping,LI Tiechun，HUI Ruihua，SONG Meirong

(SchoolofChemistryandLifeScience，AnshanNormalUniversity,AnshanLiaoning114007,China)

The content of tea polyphenols in the tea parasitic are analyzed.Tea polyphenols is a mixture,for a variety of tea polyphenol structure similar,more difficult to separate.EC (gallic acid),EGC (gallic catechin),EGCG (gallic catechin gallic acid ester),ECG (epicatechin gallic acid ester) are the main four components of tea polyphenols in tea.This study adopts the method of HPLC (high performance liquid chromatography) and the determination of the EC,EGC,EGCG,ECG tea polyphenols.Four kinds of tea polyphenols achieve effective separation within 15 min.Method of variation coefficient is less than 0.036 0%,recovery rate of 95.2% to 104.2%.The experimental results show that the tea contains only parasitic samples in the tea polyphenols EGC.The parasitic crude stem tea and yunnan in yunnan fine tea stem parasitic samples,thick stems in yunnan tea parasitic EGC content in the samples is slightly higher than that of yunnan fibrous tea parasitic EGC content in the samples.

tea parasitic;HPLC;tea polyphenol;determination

2016-10-09

辽宁省教育厅科学技术基金资助课题(20331079).

侯冬岩(1962-)，男，吉林省吉林市人，鞍山师范学院化学与生命科学学院教授，主要从事天然功能食品科学研究.

O657．3

A

1008-2441(2016)06-0041-04