右旋雷贝拉唑钠对大鼠反流性食管炎模型的作用研究

右旋雷贝拉唑钠对大鼠反流性食管炎模型的作用研究

冯巧巧，刘军田

(山东省食品药品监督管理局审评认证中心，山东 济南 250013)

摘要：目的考察右旋雷贝拉唑钠对大鼠反流性食管炎的改善作用。方法采用幽门结扎致大鼠单纯反流性食管炎模型为实验对象，以食管炎指数和抑制率、胃酸总分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率、胃液胃蛋白酶活力等为指标，全面考察右旋雷贝拉唑钠对大鼠反流性食管炎的改善作用。结果右旋雷贝拉唑钠(4、2、1 mg·kg-1，iv)，能明显降低反流性食管炎模型大鼠食管炎指数，增加胃液pH，减少胃酸总分泌量和降低胃蛋白酶活性。结论右旋雷贝拉唑钠对反流性食管炎模型大鼠有明显的改善作用。

关键词：右旋雷贝拉唑钠；反流性食管炎；食管炎指数

作者简介：冯巧巧，女，主管药师，研究方向：药品审评，E-mail:fengqiaoqiao@sdfda.gov.cn

中图分类号：R965文献标识码：A

The effects of dexrabeprazole sodium on reflux esophagitis model of rats

FENGQiao-qiao，LIUJun-tian

(CenterforDrugEvaluationandCertificationofShandongFoodandDrugAdministration，Jinan250013,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of dexrabeprazole sodium on reflux esophagitis model of rats.MethodsReflux esophagitis induced by pylorus ligation was treated with dexrabeprazole sodium for injection by intravenous injection for one time.The esophagitis index and suppression rate，volume of gastric juice and activity of pepsin were determined.ResultsThe esophagitis index,volume of gastric juice and activity of pepsin in rats pretreated with dexrabeprazole sodium (4,2,1 mg·kg-1，iv) were significantly lower than those of the control group.ConclusionDexrabeprazole sodium had a remarkable protective on reflux esophagitis model of rats.

Key words:Dexrabeprazole sodium;Reflux esophagitis;Esophagitis index

雷贝拉唑钠是苯并咪唑衍生物，可通过抑制胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性而降低胃酸分泌，从而治疗由于胃酸分泌过多引起的如胃和十二指肠溃疡、反流性食管炎等疾病，属于质子泵抑制剂的胃肠用药[1，2]。雷贝拉唑钠为消旋物，其化学结构上含有手性基团，目前临床上市应用的质子泵抑制剂类药物(奥美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑等)多为消旋物，而单一的光学异构体左旋奥美拉唑和左旋泮托拉唑均已上市销售，而右旋雷贝拉唑钠国内未见上市销售，本文采用大鼠反流性食管炎模型考察了右旋雷贝拉唑钠作用，并与消旋体和左旋雷贝拉唑钠进行比较，以探讨消旋体中的主要活性成分和作用强度，为右旋雷贝拉唑钠的研究开发提供试验数据支持。

1材料

1.1动物SD大鼠[合格证号：SCXK(京)2012-0001]，雌雄各半，体重180～220 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

1.2药品与试剂右旋雷贝拉唑钠、雷贝拉唑钠、左旋雷贝拉唑钠(山东省药学科学院，批号：20120125)；胃蛋白酶测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20130102)。

1.3仪器YP3001N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；SC-3012低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)；UV2201紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；FE20型pH计[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]。

2方法

2.1大鼠单纯酸性反流性食管炎模型的建立[3，4]取健康SD大鼠70只，禁食不禁水24 h后，随机分为右旋雷贝拉唑钠1、2、4 mg·kg-1组，左旋雷贝拉唑钠2 mg·kg-1组，雷贝拉唑钠4 mg·kg-1组，模型对照组和正常对照组，每组10只。大鼠用1%戊巴比妥钠麻醉后，仰卧固定于木板上，腹部手术区常规消毒。于腹部剑突下正中作切口，暴露胃及幽门，用细线缝扎幽门。同时于食管-胃交界处纵行切开贲门肌约1 cm，分离至黏膜层完全暴露于视野中，以加强胃反流。正常对照组行假手术，进腹后将食管下段分离出神经和血管，1 min后关腹，常规消毒。手术完成后，各组大鼠立即经尾静脉注射相应剂量的药物溶液1次，给药容积0.5 mL·(100 g)-1，模型对照组和正常对照组给予等容积的生理盐水。给药后24 h用1%戊巴比妥钠麻醉处死动物，沿贲门向上钝性分离并剪取食管约3～4 cm，肉眼观察食管大体表现并评分，摘取全胃，收集胃液，3 000 rpm离心20 min，取全部上清液，量其体积，测定总酸度、胃酸总分泌量、pH值及胃蛋白酶活力。

2.2食管炎指数和抑制率测定[5，6]沿贲门向上取食管约3～4 cm，沿纵轴将食管剪开，生理盐水冲洗干净，铺平，肉眼观察病变程度并评分，按照表1中分级和评分标准，计算食管炎指数。通过食管炎指数计算损伤抑制率。

食管炎抑制率=(模型对照组食管炎指数-给药组食管炎指数)/模型对照组食管炎指数×100%。

2.3胃酸总分泌量、pH值、胃酸分泌抑制率及胃蛋白酶活力测定胃液采用pH计测定pH值。取胃液1 mL，用双蒸水稀释1倍后，再加入0.5%二甲黄和0.5%酚酞指示剂各一滴，用0.1 mol·L-1NaOH溶液滴定至红色消失，出现橘黄色，继续滴定溶液变黄色再变红至红色不再变深，即为总酸滴定终点。记录NaOH的用量，计算胃酸总分泌量、胃酸分泌抑制率及pH值。胃液总酸度(mmol·L-1)=NaOH用量(mL)×0.1×1 000；胃酸总分泌量(mmol)=胃液总酸度×胃液量(mL)×0.001；胃酸分泌抑制率=(模型组胃酸总分泌量-给药组胃酸总分泌量)/模型组胃酸总分泌量×100%。取剩余部分上清胃液，按照胃蛋白酶测定试剂盒说明书方法测定胃蛋白酶活力。

3结果

3.1肉眼观察结果正常对照组大鼠食管黏膜红润，表面光滑，未见出血及糜烂；模型对照组全部大鼠均出现食管黏膜糜烂。与模型对照组比较，右旋雷贝拉唑钠4、2、1 mg·kg-13个剂量组食管损伤程度显著减轻，且呈明显的剂量依赖性。雷贝拉唑钠4 mg·kg-1食管损伤亦明显减轻，而左旋雷贝拉唑钠2 mg·kg-1组大鼠食管黏膜病变程度与模型对照组基本一致，未见明显改善。

1.2.2 菌株分离及纯化 用无菌剪刀将植株分为花、茎、叶、根瘤、根表皮和根中柱，将种子及以上组织分别置于50 mL无菌三角瓶，用0.45%～0.55%(w/v)碘伏灭菌3 min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干表面明水后研磨至匀浆；制备根际土壤和田间土壤悬浮液；采用稀释涂抹法分别分离组织研磨匀浆中的内生细菌和土壤悬浮液中的非内生细菌。每个处理4个重复。分离和纯化后的菌株于YMA培养基4℃保存。操作参考Miao[23]的方法。

3.2对食管炎指数及食管炎抑制率的影响右旋雷贝拉唑钠4、2 mg·kg-1剂量组和雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量组大鼠食管炎指数明显减小，抑制率明显较高，与模型组比较有显著性差异(均P<0.05或P<0.01)。雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量与右旋雷贝拉唑钠2 mg·kg-1剂量抑制效果基本一致，而弱于右旋雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量组。左旋雷贝拉唑钠组食管炎指数与模型组基本一致，抑制率较低，基本无抑制作用，结果见表2。

表2　对反流性食管炎大鼠食管炎指数和抑制率的

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

3.3对大鼠胃酸总分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率的影响右旋雷贝拉唑钠4、2 mg·kg-1剂量组和雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量组大鼠胃酸总分泌量明显减少，pH和胃酸分泌抑制率明显升高，与模型组比较有显著性差异(均P<0.05或P<0.01)。雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量与右旋雷贝拉唑钠2 mg·kg-1剂量抑制效果基本一致，而明显弱于右旋雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量组(P<0.05)。左旋雷贝拉唑钠组3个指标均与模型组基本一致，基本无明显作用，结果见表3。

3.4对胃蛋白酶活力及胃蛋白酶抑制率的影响右旋雷贝拉唑钠4、2 mg·kg-1剂量组和雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量组大鼠胃蛋白酶活力明显降低，胃蛋白酶抑制率明显较高，与模型组比较有显著性差异(均P<0.05或P<0.01)。雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量与右旋雷贝拉唑钠2 mg·kg-1剂量抑制效果基本一致，而明显弱于右旋雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量组(P<0.05)。左旋雷贝拉唑钠组胃蛋白酶活力与模型组基本一致，胃蛋白酶抑制率较低，基本无抑制作用，结果见表4。

表3　对反流性食管炎大鼠胃酸分泌的影响 ± s， n=10)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与雷贝拉唑钠组比较，#P<0.05

表4　对反流性食管炎大鼠胃蛋白酶活力的影响 ± s， n=10)

注：与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与雷贝拉唑钠组比较，#P<0.05

4讨论

反流性食管炎系指由于胃和(或)十二指肠内容物反流入食管而引起食管炎症或溃疡的一种疾病，病理性胃食管反流若不能及时清除酸性消化性胃液以及胃蛋白酶、胆汁、胰液，就会引起食管黏膜的炎症、糜烂、溃疡和纤维化等病变，若长期存在，甚至会发生癌变[7]。临床上拉唑类药物对反流性食管炎具有一定的作用，通过抑制胃壁细胞质子泵即H+-K+-ATP酶，阻断胃酸分泌的最后步骤，从而发挥抑制胃酸分泌的作用[8]。在胃食管反流病患者中，质子泵抑制剂被大剂量长期使用。国内外学者过去认为质子泵抑制剂是一种安全、毒副作用小的药物。但随着此类药物的长期广泛应用，越来越多的国内外学者发现，长期应用可能会导致高胃泌素血症、维生素B12吸收障碍、骨质疏松等[9]。雷贝拉唑是第三代质子泵抑制剂，为消旋体，左右旋比例为1∶1，但左旋和右旋的活性不同，毒性基本一致，故拆分其活性成分，降低药物用量，从而减少不良反应发生几率具有重要意义。本研究结果中，右旋雷贝拉唑钠2 mg·kg-1剂量下对大鼠反流性食管炎的治疗作用与雷贝拉唑钠4 mg·kg-1剂量基本一致，而相同剂量下，右旋雷贝拉唑钠的药效作用明显强于雷贝拉唑钠，同时，左旋雷贝拉唑钠基本未显示药效作用。试验结果充分证明，右旋体是雷贝拉唑钠中的主要活性成分，而左旋体基本没有活性，故可拆分出右旋体用于临床，可显著降低用药量和减少不良反应的发生。

参考文献：

[1]Prakash A,Faulds D.Rabeprazole[J].Drugs,1998,55(2):261-267.

[2]张海艇，齐霞.右旋雷贝拉唑钠对动物体内染色体损伤的影响实验研究[J].药学研究，2014，33(7)：384-385.

[3]向绍杰，乔敏，孟莉，等.泮托拉唑钠临床常用剂量对大鼠急性反流性食管炎动物模型的影响[J].实验动物科学，2009，26(2):23-24.

[4]郑朝旭，林伟斌，余峻峰，等.反流性食管炎大鼠模型的制备:不同管径内支架支撑幽门及前胃结扎[J].中国组织工程研究与临床康复，2010，14(20):3705-3708.

[5]陆星华,张泰昌.反流性食管炎诊断及治疗指南(2003年)[J].中华消化内镜杂志，2004，21(4):221-222.

[6]李春婷，沈水杰，杜斌，等.健脾疏肝方对反流性食管炎大鼠模型食管组织病理及PCNA的影响[J].世界华人消化杂志，2007，15(7):733-736.

[7]吴铁镛.胃食管反流病与反流性食管炎[J].北京医学，1996，18(1):32-33.

[8]遇苏宁，张三奇，杨春娥.质量泵抑制剂的研究进展[J].中国新药与临床杂志，2002，21(11)：680-682.

[9]Ito T，Jensen RT.Association of long-term proton pump inhibitor therapy with bone fractures and effects on absorption of calcium，vitamin B12，iron，and magnesium[J].Curr Gastroenterol Rep，2010，12(6):448-457.