HPLC法测定克霉唑阴道片含量的方法研究

HPLC法测定克霉唑阴道片含量的方法研究

历娜,于红燕,姜爱霞

(山东药品食品职业学院，山东 威海 264210)

摘要：目的建立克霉唑阴道片含量的高效液相色谱测定方法。方法采用大连依利C18色谱柱，流动相为甲醇-磷酸缓冲液(取磷酸5 mL，加50%甲醇溶液稀释至1 000 mL，用三乙胺调节pH值至3.8)(40∶60)，流速：1.0 mL·min-1，检测波长230 nm，进样量为10 μL。结果在该色谱条件下，克霉唑在浓度为0.025～0.2 mg·mL-1范围内线性关系良好，回归方程为：A=30 397C-3.353 83，r=0.999 9，重复性试验RSD为1.35%，平均回收率为96.67%(RSD=1.33%)。结论本法灵敏、简便、准确、重复性好，能有效控制克霉唑阴道片的含量。

关键词：克霉唑阴道片；高效液相色谱法；含量

作者简介：历娜，女，研究方向：药品质量控制，E-mail:wjlinan@126.com

中图分类号：R927.2文献标识码：A

StudyondeterminationofClotrimazoleVaginalTabletsbyHPLC

LI Na,YU Hong-yan,JIANG Ai-xia

(Shandong Drug and Food Vocational College,Weihai 264210,China)

Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Clotrimazole Vaginal Tablets.MethodsDalian C18 chromatographic column was adopted with methanol-phosphate buffer (phosphate from 5 mL and 50% methanol solution was diluted to 1 000 mL，with three procedures for adjusting the pH value to 3.8)(40∶60) as mobile phase，and the flow rate was 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was 230 nm，the injection volume was 10 μL.ResultsUnder the chromatographic conditions,the linear range of clotrimazole was 0.025～ 0.2 mg·mL-1，the regression equation was A=30 397C-3.353 83，r=0.999 9.The RSD of repeatability test was 1.35%，the average recovery rate was 96.67%(RSD=1.33%).ConclusionThis method was sensitive，simple，accurate，reproducible，and can effectively control the content of Clotrimazole Vaginal Tablets.

Keywords:ClotrimazoleVaginalTablets;HPLCmethod;Content

女性妇科炎症发病率很高，且容易反复感染，因此妇科药品市场的发展前景广阔[1]。据卫生部调查统计显示，妇科病发病率高达75%，2010年我国妇科药销售额已突破100亿元人民币，预计今后将继续呈增长态势[2]。克霉唑是一种广谱抗菌药，对于多种真菌尤其是白色念珠菌具有较好抗菌作用，克霉唑阴道片最早是在1971年在德国首次上市，由德国的拜耳公司生产，目前国内有19家企业获得该药品的批准文号[3]。本课题主要研究采用高效液相色谱法对克霉唑阴道片进行含量控制[4]。

1仪器与试药

高效液相色谱仪；超声波清洗器；MettlerAE240电子天平；甲醇为色谱纯；水为纯化水；其他试剂为分析纯。

2溶液配制

2.1对照液的配制精取克霉唑对照品约10mg，将其放置在100mL的量瓶中，再向量瓶中加入约30mL的甲醇，放在超声波清洗器中超声大约10min使对照液溶解后，再向量瓶中加流动相定容至刻度，摇匀[5，6]。

2.2供试液的配制取20片，精密称定重量后，放在研钵中研细，再精称细粉适量(约相当于克霉唑50mg)，按”2.1”项下方法制成100mL溶液，滤过后再精量续滤液2mL用流动相稀释至10mL，摇匀。

3方法学考察

3.1色谱条件固定相：C18柱，流动相：甲醇-磷酸缓冲液(40∶60)，流速：1.0mL·min-1，检测波长230nm，进样量为10μL[7]。

3.2线性关系试验精取对照品25mg，放置于50mL容量瓶中，加入约30mL的甲醇，放在超声波清洗器中超声使其溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液制得不同浓度的线性溶液进行测定，求得回归方程为：A=30 397C-3.353 83(n=5，r=0.999 9)。结论：克霉唑在浓度为0.025～0.2mg·mL-1范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

3.3精密度试验精取线性中间浓度的溶液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积结果RSD=0.96%。结论：连续进行6次测定，测得峰面积计算RSD值为0.96%。表明仪器精密度良好。

3.4溶液的稳定性取分别供试液各10μL，注入色谱仪，测定峰面积，结果RSD=1.72%。结论：以室温8h内测得峰面积计算RSD值为1.72%。表明溶液稳定性良好。

3.5加样回收率试验精密称取克霉唑对照品约10、12.5、15mg各3份，分别置25mL量瓶中，按处方比例分别加入辅料适量后，加甲醇适量，超声使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。照“3.1”项下条件测定，测定结果见表1。

表1　加样回收率试验结果

结论：采用本法测定含量，方法准确可靠，回收率良好。

3.6重复性试验取本品30片，按“2.2”项下操作，各级取10 μL注入液相色谱仪，测定克霉唑含量，结果克霉唑平均含量为97.44%,RSD=1.35%。结论：结果表明试验操作重复性良好，该方法对本品进行含量测定是可行的。

3.7检测限[8，9]精密量取对照品溶液1 mL，至100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，再依次逐级稀释，各10 μL注入液相色谱仪，当其信噪比(S/N)为3∶1→5∶1时，克霉唑的最低检测深度为0.07 ng·μL-1，即：最小检出量为1.4 ng。

3.8含量测定分别精取对照品溶液和供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)。测定结果见表2。

图1　供试品色谱图

批号上市样品样1样2样3含量(%)100.699.8100.1100.4

结论：结果表明本公司试制的3批克霉唑阴道片样品含克霉唑均为标示量的93.0%～107.0%，与上市样品一致。

4讨论

4.1采用本研究得到的配方，试制的药品与上市样品的含量一致，结果稳定可靠，产品质量合格。表明该配方可行，能生产出质量符合要求的产品。

4.2采用C18色谱柱，甲醇-磷酸缓冲液(40∶60)为流动相，试验结果表明本法建立的色谱条件系统适用性良好，可以快速简便的检测克霉唑阴道片的含量，方法准确灵敏，简便易行，能很好地控制本品的质量，同时也适用于本品中有关物质的测定。

参考文献：

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