新雪片对急性咽炎大鼠模型细胞因子及病理学影响的实验研究

新雪片对急性咽炎大鼠模型细胞因子及病理学影响的实验研究

李婷婷1，李伟妮1，李莲华3，高雁1，王平2

(1.烟台东诚大洋制药有限公司，山东 烟台 265500；2.山东省中医药研究院，山东 济南 250014；

3.烟台业达医院，山东 烟台 264006)

摘要：目的考察新雪片对急性咽炎大鼠模型细胞因子白细胞介素-6、前列腺素E2、肿瘤坏死因子-α的影响，观察模型动物病理形态学改善的情况，评价治疗咽炎的效果。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、新雪片高、中、低剂量组以及阳性对照组。观察给药后急性咽炎模型大鼠血清白细胞介素-6、前列腺素E2、肿瘤坏死因子-α含量的变化，进行咽喉部组织的病理观察。结果与模型组比较，新雪片高、中剂量组大鼠白细胞介素-6、前列腺素E2、肿瘤坏死因子-α含量显著降低(P<0.05)，新雪片高剂量组大鼠白细胞介素-6、前列腺素E2的含量低于阳性对照组，无统计学差异；病理形态学显示，经新雪片治疗后，模型大鼠的黏膜上皮组织增生及炎细胞浸润程度积分显著低于模型对照组(P<0.05)。结论新雪片对急性咽炎模型大鼠具有显著的抗炎作用。

关键词：急性咽炎；大鼠；白细胞介素-6；前列腺素E2；肿瘤坏死因子-α；病理形态学

作者简介：李婷婷，女，研究方向：中药学，E-mail:litingtinglt@163.com

通讯作者：王平，女，副研究员，研究方向：中药药理，Tel:0531-82949847，E-mail:wangpingjinan@163.com

中图分类号：R285.5文献标识码：A

Experimental study of Xinxue Tablets on the effect of cytokines and pathomorphism

in treating acute pharyngitis of rat

LITing-ting1,LIWei-ni1，LILian-hua3,GAOYan1,WANGPing2

(1.YantaiDongchengDayangPharmaceuticalCo.,Ltd.,Yantai265500,China；2.ShandongInstituteof

TraditionalChineseMedicine,Jinan250014,China；3.YedaHospitalofYantai,Yantai264006,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of IL-6，PGE2，TNF-α by Xinxue Tablets in treating acute pharyngitis of rat，and observe improvement of pathomorphism,then to evaluate the threatment effect.Methods60 SD rats were randomly divided into normal control group,model group，Xinxue Tablets high dosage group，Xinxue Tablets middle dosage group,Xinxue Tablets small dosage group,and positive control group.To observe the change of the contents of IL-6，PGE2，TNF-α by treating with Xinxue Tablets,and to observe pathomorphism of pharyngeal mucosa tissue.ResultsCompared with model group,the contents of IL-6，PGE2，TNF-α were significantly decreased in Xinxue Tablets high dosage group and middle dosage group(P<0.05),and the contents of IL-6，PGE2 were decreased in Xinxue Tablets high dosage group compared with positive control group,but not significantly;Pathological morphology reflected that comparing with model group，the degree of pharyngeal mucosa epithelial tissue hyperplasia and integral of inflammatory cells infiltration were significantly decreased in Xinxue Tablets high dosage group and middle dosage group(P<0.05).ConclusionXinxue Tablets had the significant effect on acute pharyngitis rat models.

Key words:Acute pharyngitis;Rat;IL-6;PGE2;TNF-α;Pathomorphism

急性咽炎是耳鼻喉科临床常见病、多发病，是一种咽部黏膜、黏膜下组织及淋巴组织的急性炎症。其发病率占耳鼻喉科疾病的2%～6%，且仍有上升趋势[1]，给患者的生活带来一定的影响。目前临床上多采用抗生素治疗，但是抗生素长时间服用会产生耐药性，容易转变为慢性咽炎，迁延难愈。而中药复方辨证施治，治疗急性咽炎疗效独特且无毒副作用，亟待进行新产品的开发。本文对新雪片进行了药物的药效学研究，从分子学角度考察了药物的治疗机理，为临床用药提供数据支持。

1试验材料

1.1试验动物SD大鼠60只，体重180～220 g，雌雄各半，分笼饲养，由湖北医药学院动物实验中心提供[SCXK(鄂)2011-0008]。常规适应性饲养5天后开始试验。

1.2试验药物新雪片(批号：110501，烟台东诚大洋制药有限公司)；金嗓子喉片(批号：09111601，广西金嗓子有限责任公司)。

1.3试验试剂氨水(500 mL，浓度25%～75%，郑州市化学试剂厂)；白细胞介素-6(IL-6)试剂盒(上海邦奕生物科技有限公司)；前列腺素E2(PGE2)试剂盒(上海凯博生化试剂有限公司)；肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒(上海富众生物科技发展有限公司)。

1.4试验仪器喉头喷雾器(上海市嘉定区医疗设备厂)；水浴锅(上海光地仪器设备有限公司)；TDL-5台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；BIO-RAD680酶标仪(美国BIO-RAO公司)；奥利巴斯BX51万能型研究级正置显微镜(上海西努光学科技有限公司)；BI-2000图像分析系统(成都泰盟软件有限公司)。

2试验方法

2.1动物造模与给药选用SD大鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别设为正常对照组、模型对照组、新雪片高剂量组(0.3 g·kg-1)、新雪片中剂量组(0.15 g·kg-1)、新雪片低剂量组(0.075 g·kg-1)与阳性对照组(金嗓子喉片1.08 g·kg-1)。除正常对照组以外，其余5组使用喉头喷雾器给动物咽部喷15%的氨水，每次喷雾3下，每天上午、下午各1次，连续3 d，造成大鼠急性咽炎模型[2,3]。造模后第4天，新雪片高剂量组(0.3 g·kg-1)、新雪片中剂量组(0.15 g·kg-1)、新雪片低剂量组(0.075 g·kg-1)与阳性对照组(金嗓子喉片1.08 g·kg-1)分别灌胃给予相对应的药液，正常对照组与模型对照组分别灌胃给予等体积的蒸馏水，各组均连续给药5 d。末次给药1 h后，麻醉各组动物，腹主动脉采血5 mL，分装3管，离心，取血清，做各项炎症因子的检测，之后处死动物，摘取各组动物咽部黏膜及其下组织用10%的甲醛溶液固定、切片、染色，做病理切片。

2.2检测指标每日观察记录各组动物外观形态，咽部黏膜的形态、色泽等；动物处死前取血用相应的试剂盒检测血清IL-6、PGE2、TNF-α水平。

参考文献2.3病理组织记录[4]，取咽部黏膜及其下组织做病理切片，评分标准见表1。

表1　病理组织评分标准

3结果

3.1新雪片对大鼠一般状态的影响造模3天后模型组大鼠出现搔抓口部，观察大鼠咽部，出现充血、肿胀，饮水增多，食量下降，自发性活动减少等现象；各给药组大鼠食量相对模型组减轻，咽部红肿减轻，动物搔抓情况也减轻。

3.2新雪片对IL-6、PGE2、TNF-α炎症因子的影响试验结果显示，新雪片高、中、低剂量组均能够显著降低造模大鼠血液中IL-6、PGE2、TNF-α的含量。其中，与模型组相比较，新雪片高剂量组IL-6、PGE2 具有非常显著性差异(P<0.01)，中剂量组具有显著性差异(P<0.05)；此外，新雪片高剂量组IL-6、PGE2 的含量低于阳性对照组，但是不存在显著性差异，结果见表2。

表2　新雪片对急性咽炎模型大鼠IL-6、PGE2、TNF-α的影响

注：与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型对照组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01

3.3新雪片对咽部黏膜组织病理形态学的影响肉眼观察可见：正常对照组大鼠咽部组织淡红色、表面光滑，未见充血、肿胀等现象；模型对照组大鼠咽部呈充血状态，暗红色，光泽度欠佳，黏液性分泌物增多，部分咽后壁颗粒状隆起，黏液腺肥大，分泌功能亢进；新雪片组大鼠比模型对照组充血状态减轻，光泽度增加；阳性对照组(金嗓子喉片组)比模型对照组充血状态减轻。肉眼观察新雪片能有效减轻咽炎充血状态。

病理切片观察可见：正常对照组大鼠咽部组织上皮完整，黏膜为鳞状上皮覆盖，黏膜下层为疏松的结缔组织，毛囊腺体下面为肌组织；模型组大鼠咽部组织的黏膜上皮层显著增生，黏膜下层变薄，固有层内血管扩张、充血、水肿，固有膜区域与黏液腺间有大量炎性细胞(以淋巴细胞和单核细胞为主)浸润；与模型组比较，新雪片各组大鼠黏膜上皮层增生程度减轻，固有层内血管扩张、充血、水肿减轻，固有膜区域与黏液腺间有少量炎性细胞浸润；阳性对照组(金嗓子喉片组)比模型对照组增生程度、炎性细胞浸润和充血均减轻,结果见表3。

表3　新雪片对各组大鼠咽部组织病理形态学的影响( n=10)

注：与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型对照组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表3的数据显示，新雪片高、中剂量组大鼠炎性细胞浸润方面存在显著差异(P<0.05)，充血情况存在非常显著性差异(P<0.01)。因此，病理学观察表明新雪片对咽部组织具有良好的保护作用。

4结论

急性咽炎是一种常见的耳鼻喉科疾病，病变部位为咽黏膜，并波及黏膜下及淋巴组织的急性炎症，常继发于急性鼻炎或急性扁桃体之后。如果治疗不及时，或反复发作，可转为慢性咽炎，若感染向上蔓延，波及耳、鼻器官，可导致急性鼻炎、鼻窦炎、急性中耳炎，给患者的身体带来严重危害。

中医认为急性咽炎多属于实证、热证，其病因病机为外邪侵袭，上犯肺脏，攻及咽喉所致[5]。新血片具有清热解毒、消肿利咽的功效，治疗急性咽炎疗效显著。

目前，国内对急性咽炎疗效的评价多集中在炎症指标上，对于直接反映“治本”效果的细胞因子的研究非常少。本研究采用高浓度的氨水在咽部喷雾，迅速使局部的血管扩张、充血，形成急性咽炎动物模型[6]。采用新雪片治疗后，考察相应的细胞因子IL-6、PGE2、TNF-α的含量，从而提高了炎症评价的水平。其中，IL-6主要由T、B细胞和单核巨噬细胞分泌的细胞因子，反映了炎症时组织受损的程度；PGE2是一种炎症介质，具有扩张血管、促进组织水肿等作用；TNF-α主要由活化的巨噬细胞、NK细胞及T淋巴细胞产生，可诱发机体发生恶病质[7～9]。给予新雪片的大鼠血清IL-6、PGE2、TNF-α的含量

较模型组显著降低，反映新雪片可以有效降低炎性细胞因子水平，减轻炎性症状、重新使体内被破坏的免疫系统趋于平衡。此外，研究发现新雪片治疗大鼠咽部组织的黏膜上皮增生程度积分及炎细胞浸润程度较模型组显著降低，从病理组织学角度验证了药物的治疗效果。我们将进一步考察新雪片的临床疗效，为开创创新型新药打下试验基础。

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