黄蜂胶和黑蜂胶合用对小鼠免疫功能的影响

张英姿

（湖南省妇幼保健院药剂科，湖南 长沙 410008）

蜂胶是蜜蜂从自然界长寿胶原植物新生幼芽或破损树皮位置采集的树脂类分泌物，混入其上颚腺、蜡腺、舌腺的分泌物，经蜜蜂生化加工而成的具有芳香气味的胶状物质，含有20大类380多种天然活性成分，其中包含30多种黄酮类物质、数十种萜烯类物质等具有生理活性的天然成分［1］。目前，我国基本上都采用食用酒精提取毛胶制得黑蜂胶的生产工艺，但产品含有部分多酚咖啡酸聚合物等黑色杂质，颜色发黑，入口麻木；且由于生产过程中需要加热浓缩回收，使蜂胶中的一些热敏性成分如萜烯类等被氧化分解，造成产品功效成分不全，不能最大程度地发挥功效。日本、巴西等国常采用超临界CO2萃取技术提取蜂胶，产品具有天然黄色、成分全面和无铅污染等诸多特点，但总黄酮含量较酒精提取蜂胶低，功效成分提取也不完全［2］。现代研究已证实，酒精提取的黑蜂胶具有增强免疫力、保肝、降血糖等功能［3-6］，但黄蜂胶和黑蜂胶合用增强免疫调节作用的研究目前尚未见报道。本研究中采用的蜂胶先用超临界CO2流体萃取得到黄蜂胶，对其提取后的蜂胶渣再用食用乙醇提取得到黑蜂胶，并研究了两者合用对小鼠免疫功能的调节作用。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试药制备

蜂原胶预处理：将蜂原胶（毛胶）-20℃冷冻8 h，粉碎，筛得蜂原胶粉。

超临界CO2萃取：HA121型超临界流体萃取装置（江苏华安超临界萃取有限公司），蜂原胶粉萃取压力为30MPa，萃取温度为55℃，萃取时间为4 h，原料与辅料的比例为3∶1，萃取流速为50 kg／h，分离温度为30℃，得黄蜂胶。超临界CO2萃取后，渣采用8倍95%食用乙醇搅拌18 h，120目过滤；-5℃冷冻，300目过滤除蜡，重复3次；在45～50℃减压回收乙醇，浓缩相对密度不低于1.2（45℃），得浸膏；浸膏于-20℃冷冻8 h，粉碎过筛，即得黑蜂胶。

黄黑蜂胶：将大豆油加热至45～50℃，分别加入全部黄蜂胶和黑蜂胶，搅拌。每人每天2 g，每天摄入黄黑蜂胶共0.56 g，大豆油 1.44 g。

1.2 试验动物与分组

SPF级昆明种雌性小鼠160只，体重18～22 g，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，生产许可证号为SCXK（湘）2009-0012，均分为4组，各40只，分别对小鼠进行NK细胞活性的影响、碳廓清试验、脏体比值测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、迟发型变态反应试验、半数溶血值（HC50）测定和抗体生成细胞数测定，刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠淋巴细胞转化试验。

1.3 试验环境与给药方法

试验环境：温度为23～24℃，相对湿度为50% ～56%，试验动物使用许可证号为SYXK（湘）2010-0010。

剂量选择及样品处理：据人体口服推荐量每天2 g，含黄黑蜂胶0.56 g，加1.44 g大豆油混合。设黄黑蜂胶低剂量组（LD组）、中剂量组 （MD 组 ）、高剂量组 （HD 组 ），分别给予 0.167，0.333，1.000 g／（kg·bw），相当于人体推荐剂量的 5，10，30 倍。分别取样品 3.34，6.66，20.00 g，加大豆油定容至 200 mL，配成所需浓度受试液，对照组（C组）予以等体积的大豆油，分别给予受试动物灌胃，每日 1 次，灌胃体积为 0.1 mL ／（10 g·bw），连续 30 d。

1.4 统计学处理

根据国家《保健食品功能学评价程序和检验方法》（2003年版）进行。试验数据采用SAS软件分析。

2 结果

经口给予小鼠不同剂量的黄黑蜂胶30 d，MD组、HD组小鼠NK细胞活性与C组比较显著提高（P＜0.05）；足跖肿胀度、淋巴细胞转化能力、抗体生成数、HC50均有增高趋势，HD组增高更显著（P＜0.05）；对小鼠免商器官／体重比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力、巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无明显影响（P＞0.05）。详见表1。

表1 黄黑蜂胶对小鼠免疫功能指标的影响（ ± s，n＝10）

表1 黄黑蜂胶对小鼠免疫功能指标的影响（ ± s，n＝10）

注：与 C 组比较，*P ＜0.05。

指标NK细胞活性（%）NK细胞活性平方根反正弦转换值脾脏指数（%）胸腺指数（%）注射后24 h足跖肿胀度（mm）淋巴细胞增殖能力（OD差值）溶血空斑数（个／106脾细胞）半数溶血值（HC50）碳廓清吞噬指数鸡红细胞率（%）C组29.2 ±16.3 32.0 ±10.4 0.519 ±0.091 0.332 ±0.044 0.23 ±0.13 0.024 ±0.017 127±38 169.7 ±20.5 4.34 ±0.67 28.3 ±6.7 LD组37.3 ±12.8 37.4 ±7.6 0.521 ±0.101 0.343 ±0.045 0.28 ±0.12 0.031 ±0.015 134±34 177.7 ±21.4 4.58 ±0.81 30.5 ±9.3 MD组50.1 ±16.4*45.1 ±9.8*0.530 ±0.123 0.348 ±0.042 0.32 ±0.16 0.040 ±0.023 157±45 196.6 ±28.5*4.84 ±0.71 33.4 ±5.3 HD组53.1 ±17.1*47.0 ±10.5*0.544 ±0.112 0.351 ±0.035 0.44 ±0.18*0.054 ±0.026*176±35*190.6 ±18.4 5.05 ±0.94 35.6 ±9.2

3 讨论

目前，日本、巴西等蜂胶强国常采用超临界CO2萃取技术提取蜂胶，这种蜂胶与前2个阶段的蜂胶相比有明显优势，具有天然黄色、成分全面和无铅污染等诸多特点。超临界蜂胶因提取时不发生化学反应，比较纯净，不产生黑色杂质，因而呈现出天然蜂胶本来的黄色。超临界CO2萃取技术属低温无氧萃取，故蜂胶中黄酮类、萜烯类等活性成分被很好地保留了下来，成分全面，功效应优于单纯醇提蜂胶制品［7-8］。同时，因CO2是中性分子，而铅的络合物为极性分子，两者不相溶，故超临界蜂胶属于无铅提取蜂胶。

乙醇提取简单、方便、易于大规模生产，在我国普遍使用，蜂胶国家标准GB／T 24283-2009中就仅规定了蜂胶乙醇提取物的质量要求。超临界CO2萃取的黄蜂胶总黄酮含量在6%以上，乙醇提取的黑蜂胶总黄酮含量一般在18%以上。故将超临界CO2萃取技术提取和乙醇提取相结合，提取的蜂胶总黄酮含量可达28%；同时还可保留不耐热的功效成分，可最大限度保全蜂胶内的活性成分，尤其是避免了单纯乙醇提取技术所造成的萜烯类物质损失问题［9-10］。

本研究结果表明，黄黑蜂胶合用具有增强免疫力的功效。经口给予小鼠 0.167，0.333，0.450 g ／（kg·bw）剂量的黄黑蜂胶 30 d，0.450 g／（kg·bw）剂量能提高小鼠迟发型变态反应（DTH）能力、ConA诱导的淋巴细胞转化能力、血清、增加抗体生成细胞数（P＜ 0.05）。0.333 g ／（kg·bw）和 0.450 g ／（kg·bw）剂量的黄黑蜂胶能提高小鼠NK细胞活性（P＜0.05）。对小鼠胸腺体重比值、脾脏体重比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力、小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力均无明显影响（P＞0.05），据《保健食品功能学评价程序和检验方法》中免疫调节作用的判定标准，认为黄黑蜂胶合用具有增强免疫力的功效。

大量研究表明，乙醇提取的黑蜂胶均有增强免疫力的功效［3-6］，超临界CO2萃取技术提取的蜂胶和紫苏子油合用具有免疫凋节作用。本研究中采用毛蜂胶，先经超临界CO2流体萃取得到黄蜂胶，其渣再用食用乙醇提取，得到黑蜂胶，此方法可最大限度地保全蜂胶内的活性成分，提高总黄酮含量，二者混合食用能提高小鼠的免疫功能。但对于合用的量效关系有待进一步研究。

参考文献：

［1］郦金龙，赵文婷，王 盼，等.蜂胶的研究应用进展［J］.中国食物与营养，2011，17（6）：20-24.

［2］卢媛媛，魏文挺，胡福良.超临界CO2流体萃取技术在蜂胶提取中的应用［J］.食品工业科技，2013，34（19）：364-368.

［3］李淑华，于晓红，于英君，等.蜂胶对免疫功能低下模型鼠细胞免疫功能的影响［J］.中医药学报，2001，29（3）：38-39.

［4］邵 艳，浦锦宝.蜂胶调节小鼠免疫功能实验研究［J］.浙江中西医结合杂志，2005，15（2）：90-92.

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［6］李 立，王 勇，王亚东，等.蜂胶胶囊对小鼠免疫功能的影响［J］.中国医药指南，2012，10（23）：9-10.

［7］马海乐，李 倩，赵杰文，等.蜂胶超临界CO2萃取物GC指纹图谱及聚类分析［J］.江苏大学学报：自然科学版，2011，32（1）：1-5.

［8］王 蓓，马海乐，赵杰文，等.国产蜂胶超临界CO2萃取物GC-MS指纹图谱与聚类分析［J］.中国食品学报，2011，11（6）：183-192.

［9］杨 琴，邵兴军.超临界CO2萃取蜂胶软胶囊中黄酮类化合物的含量测定［J］.中国蜂业，2011，62（1）：34-35.

［10］邵兴军，马海燕，毛日文.超临界CO2萃取技术在蜂胶提取加工中的应用进展［J］.中国蜂业，2010，61（10）：8-10.

［11］吴晓闻，郭伟德，吴家森.超临界CO2流体萃取的蜂胶和紫苏子油在免疫调节作用中的探索［J］.养蜂科技，2001（5）：4-6.