食管鳞癌组织中VEGF-C和HGF蛋白的表达及相关性分析

刘宽浩　王艺卓

食管鳞癌组织中VEGF-C和HGF蛋白的表达及相关性分析

刘宽浩王艺卓

【摘要】目的观察血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和肝细胞生长因子(HGF)蛋白在食管鳞癌组织中的表达，并探讨其相关性和临床意义。方法应用免疫组化检测VEGF-C和HGF蛋白在食管癌组织中的表达情况。结果VEGF-C蛋白在不同浸润深度、分化程度及TNM分期的食管癌组织中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05)，有淋巴结转移者的阳性率高于无淋巴结转移者，差异有统计学意义(P＜0.05) ; HGF蛋白在食管鳞癌中的表达高于癌旁正常组织，且与肿瘤直径、浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关; VEGF-C与HGF蛋白在食管癌组织中表达呈正相关。结论VEGF-C及HGF蛋白表达与食管癌的侵袭、转移关系密切，两者可能具有协同作用。

【关键词】食管癌;血管内皮生长因子-C;肝细胞生长因子;免疫组化

项目来源:黄河科技学院自然科学资助项目(编号: KYZR201107)

作者单位: 450063郑州市，黄河科技学院医学院(刘宽浩) ;河南省肿瘤医院放疗科(王艺卓)

食管癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，我国每年死于食管癌的患者超过15万。手术是目前治疗食管癌最主要的方法。然而早期食管癌患者，术后仍然有20%～30%的复发率，这提示食管癌患者的预后在很大程度上取决于其内在的生物学行为［1］。本研究通过检测食管鳞癌组织中血管内皮生长因子-C (VEGF-C)和肝细胞生长因子(HGF)蛋白表达水平，探讨两者在食管癌发生中的作用。

1　资料与方法

1.1一般资料收集河南省肿瘤医院2006年2月至2012年10月经病理或细胞学证实后行食管癌根治术者75例。其中男46例，女29例;年龄48～85岁，中位年龄65岁;术前未行局部放疗或全身化疗，既往无肿瘤病史。病理类型均为鳞状上皮癌。30例正常对照组织取自手术切除标本肿瘤近端5 cm以外的食管组织。

1.2试剂兔抗人VEGF-C及HGF多克隆抗体购自美国Santa公司，免疫组化二步法试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.3方法75例食管鳞癌组织和30例正常组织均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片2张。免疫组化两步法严格按试剂盒说明书操作。以已知阳性片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4结果判断VEGF-C蛋白结果判定［2］: VEGF-C蛋白以细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性表达，胞浆透明或无色为阴性;每例标本均在400倍镜下随机观察10个视野，计数每个视野100个肿瘤细胞的阳性细胞百分率，取其平均值;染色强度评分中，无色0分、浅黄色1分、棕黄色2分、棕褐色3分;阳性细胞百分率评分中，肿瘤细胞阳性细胞≤10%为1分、10%～50%为2分、＞50%为3分;两者乘积≥3分为免疫组化反应阳性。由两位病理科主任医师采用双盲法独立观察每张切片，将胞膜或胞质中出现棕黄色着色的细胞判定为HGF阳性显色细胞。参照文献方法，根据阳性细胞染色程度及染色细胞百分率进行评分［3］。在高倍镜下随机观察5个视野，以阳性细胞百分率和染色强度进行半定量判定。阳性细胞百分比:无细胞染色为0分，阳性细胞数占1%～35%为1分，36%～75%为2分，＞75%为3分;染色强度:不显色或显色不清为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两项得分乘积作为最后判断结果: 0分为阴性(－)，1～2分为弱阳性(+)，3～4分为中度阳性(++)，6～9分为强阳性(+++)，(－)者为阴性组，(+)～(+++)者为阳性组。

1.5统计学分析应用SPSS 17.0统计软件，计数资料采用χ2检验，相关性检验采用Spearman相关系数表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1VEGF-C蛋白在食管鳞癌的表达及与临床病理参数的关系VEGF-C蛋白在食管癌组织中的阳性率为68.0%。VEGF-C蛋白在不同浸润深度、分化程度及TNM分期的食管癌组织中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05) ;有淋巴结转移者的阳性率为78.3%，高于无淋巴结转移者的51.7%，差异有统计学意义(P＜0.01)。见图1、2，表1。

图1　VEGF-C在食管癌组织中的表达(HE×400)

图2　VEGF-C在食管鳞状上皮组织中的表达(HE×400)

表1　VEGF-C蛋白、HGF蛋白表达及与食管癌临床病理参数的关系

2.2食管鳞癌组织中HGF蛋白的表达及与临床病理参数的关系HGF蛋白在食管癌组织中的阳性率为76.1%，HGF蛋白在不同浸润深度、分化程度及TNM分期的食管癌组织中的表达差异均有统计学意义(P＜0.05) ;有淋巴结转移者的阳性率为89.1%，高于无淋巴结转移者的55.2%，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.3VEGF-C及HGF蛋白在食管癌组织中表达的相关性VEGF-C及HGF蛋白在食管癌组织中的表达呈正相关关系(r=0.75，P=0.036)。见表2。

表2　VEGF-C及HGF蛋白表达的相关性例

3　讨论

肿瘤的发生、发展、侵袭及转移是一个复杂的过程，许多细胞因子起着重要的作用［4］。近年来，在肿瘤侵袭和转移这一研究领域中VEGF-C和HGF蛋白倍受关注。VEGF-C是一种淋巴管生长因子，与肿瘤中淋巴管生成和淋巴结转移显著相关［5］;其生理作用可能与促进血管发育和促进组织修复有关，VEGF还可直接作用于血管内皮细胞并刺激有丝分裂，从而促进新生血管的生长，还通过增加血管通透性为血管内皮细胞的迁移及肿瘤细胞的转移提供基质［6］。本文结果显示VEGF-C蛋白在食管癌组织中的表达与TNM分期、浸润深度及淋巴结转移有关，与相关报道［7］一致。

HGF因对肝细胞具有较强的有丝分裂原作用而被命名为肝细胞生长因子。HGF是一种多肽生长因子，具有诱导血管生成及上皮细胞迁移、侵袭等作用［8］。本研究发现，HGF在食管鳞癌组织中高表达，在癌旁正常组织中低表达，提示HGF表达上调与食管鳞癌的恶性行为相关。HGF的表达与食管鳞癌的肿瘤直径、淋巴转移情况和侵袭深度有关，提示HGF在食管鳞癌发生、发展中具有一定的作用。HGF的表达与还与食管鳞癌的分化程度有关，分化程度低的癌组织HGF表达阳性率高，说明HGF还可能与调控食管鳞癌的形成过程中细胞表型的表达，但HGF在食管鳞癌发展和演进中的机制尚不明确。

本研究发现，VEGF-C蛋白在不同浸润深度、分化程度及TNM分期的食管癌组织中的表达差异均有统计学意义，有淋巴结转移者的VEGF-C蛋白阳性率高于无淋巴结转移者，这与Amioka等［2］的报道一致;这也与先前的研究结果［9］一致。HGF蛋白在不同浸润深度、分化程度及TNM分期的食管癌组织中的表达差异均有统计学意义，有淋巴结转移者的HGF蛋白阳性率高于无淋巴结转移者。本研究还对VEGF-C及HGF蛋白在食管癌组织中表达的相关性进行研究，结果呈正相关(r=0.758，P=0.036)。

综上所述，VEGF-C和HGF蛋白的表达与食管鳞癌的局部侵袭和转移密切相关，两者具有协同作用，呈正相关性，对指导食管鳞癌的预后有一定意义。

参考文献

1Enziger PC，Mayer RJ.Medical progress Esophageal Cancer.N Eng J Med，2012，349: 2241-2252.

2Amioka T，Kitadai Y，Tanaka S，et al.Vascular endothelial growth factor-C expression predicts lymph node metastasis of human gastric carcinomas invading the submucosa.Eur J Cancer，2011，38: 1413-1419.

3胡春燕，周建华，邓征浩，等.ADAM23、ανβ在非小细胞肺癌中的表达及临床意义.临床与实验病理学杂志，2010，26: 433-441.

4高振远，孙惠娟，秦凤展，等.IGF-Ⅱ和VEGF在食管鳞癌中的表达及相关性研究.临床肿瘤学杂志，2011，14: 514-519.

5Mobius C，Frieire J，Becker I，et al.VEGF-C expression in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the esophagus.World J Surg，2007，31: 1768-1772.

6单保恩，潘立峰，李巧霞，等.血管内皮生长因子在食管癌组织中的表达及其临床意义研究.肿瘤防治研究，2010，32: 644-647.

7Kimura Y，Watanabe M，Ohga T，et al.Vascular endothelial growth factor-C expression correlates with lymphatic involvement and poor prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma.Oncol Rep，2013，10: 1747-1751.

8Bussolino F，Direnzo MF，Ziche M，et al.Hypatocyte growth factor is a potent angiogenlc factor which stimulate endothelial cell motility and growth.J Cell Biol，2009，11: 629-641.

9刘宽浩，王丽华，王艺卓.血管内皮生长因子和肝细胞生长因子在食管鳞癌患者血清中的表达及意义研究.广东医学，2013，34: 2474-2475.

Analysis for the expression of VEGF-C and HGF protein in esophageal squamous cell carcinoma and their correlation with esophageal cancer

LIU Kuanhao*，WANG Yizhuo.*
Medical College of Huanghe Science and Technology College， Henan，Zhengzhou 450063，China

【Abstract】ObjectiveTo observe the expression of VEGF-C and HGF protein in esophageal squamous cell carcinoma，and to explore their clinical significance and correlation with esophageal cancer.Methods The expression levels of VEGF-C and HGF protein in esophageal carcinoma tissue were detected by immunohistochemistry.ResultsThere were significant differences in the expression levels of VEGF-C protein in different depth of invasion，differentiation and TNM staging of esophageal carcinoma (P＜0.05)，and the expression positive rates of VEGF-C in the patients with lymph node metastasis were significantly higher than those of patients without lymph node metastasis (P＜0.05).The expression levels of HGF protein in esophageal squamous cell carcinoma were higher than those of normal tissues beside cancer，moreover，which were correlated to the diameter of tumor，depth of invasion，differentiation and lymph node metastasis.The expression of VEGF-C was positively related with that of HGF protein in esophageal cancer tissue.ConclusionThe expressions of VEGF-C and HGF protein are closely related to the invasion and metastasis of esophageal carcinoma，furthermore，VEGF-C and HGF may have synergetic effects.

【Key words】esophageal carcinoma; vascular endothelial growth factor-C; human growth factor; immunohistochmeistry

(收稿日期:2014－10－09)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.08.006

【文章编号】1002－7386(2015) 08－1141－03

【文献标识码】A

【中图分类号】R 735.1