乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症检测方法探讨

陈爱莲，马小宏

（如皋市人民医院检验科，江苏 如皋 226500）

乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症检测方法探讨

陈爱莲，马小宏

（如皋市人民医院检验科，江苏 如皋 226500）

目的探讨乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症(EDTA-PTCP)几种检测方法的可靠性。方法对5例EDTA-PTCP患者和20位健康体检者同时用经乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)、枸橼酸钠和肝素锂三种抗凝管及末梢血稀释的方式采集标本，分别用血液分析仪在三种抗凝管采集标本后5min、30min、60min测定血小板计数，采集末梢血用显微镜手工计数血小板，对所有标本涂片染色观察血小板形态。结果5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后30min和60min血小板计数(PLT)比5min时测定结果显著偏低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。DTA-PTCP患者EDTA-K2采血后30min和60min抗凝血涂片染色均见明显的血小板聚集现象，而健康体检者EDTA-K2抗凝血涂片及未抗凝血直接涂片染色见血小板散在分布。在采血30min后测定，EDTA-K2采血管PLT明显低于枸橼酸钠、肝素锂及手工计数结果，差异均具有统计学意义(P＜0.05)；20例健康体检者在采血后5min、30min、60min时EDTA-K2采血管PLT与枸橼酸钠、肝素锂、手工计数的结果比较差异均无统计学意义(P＞0.05）。结论对疑似EDTA-PTCP患者可以用EDTA-K2采血管重新采血立即测定，或不使用抗凝剂直接抽血立即测定，也可以使用枸橼酸钠或肝素锂抗凝管初步确认，同时涂片染色并手工计数得到正确的结果。

乙二胺四乙酸；枸橼酸钠；肝素锂；假性血小板减少症；血小板计数

血小板在机体止血、凝血过程中具有重要作用，血小板计数(Platelets，PLT)是止血、凝血检查最常用的筛检试验之一。血液分析仪的广泛应用提高了检测的准确度和效率，减轻了检验工作人员的劳动强度。乙二胺四乙酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)盐对红细胞、白细胞的形态影响较小，尤其对血小板计数影响较小，最适合作为血细胞计数的抗凝剂。1993年国际血液学标准化委员会(ICSH)建议将EDTA盐作为血常规检验的抗凝剂在临床得到广泛使用。但EDTA能诱导少数患者血小板聚集，血液分析仪无法对其正确识别，从而造成检测值大大低于真实值。这种由EDTA引起的血小板假性减少的现象被称为EDTA依赖性假性血小板减少症(Ethylenediaminetetraacetic acid-dependent pseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP)[1]。如不能及时鉴别EDTA-PTCP，可能导致误诊，可发生过度治疗或者引起不必要的其他检查。

本实验对5例血小板假性减少的患者和20位健康体检者进行采血，采用不同的抗凝剂及末梢血稀释的方式采集标本，并涂片染色，分别用血液分析仪在标本采集后不同时间测定血小板，同时用显微镜人工计数、观察涂片血小板形态。以验证EDTA-PTCP的几种检测方法的可靠性，为检验工作人员提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年5～11月在本院就诊，经乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血标本血小板检测结果明显减低，但均无临床出血倾向，白细胞、血红蛋白、凝血指标均正常，经即刻采血及外周血涂片检查明确诊断为EDTA-PTCP患者5例，其中男性2例，女性3例。随机选择20例健康体检者作为本实验参照组，其中男性10例，女性10例。

1.2 仪器和试剂 美国Beckman Coulter LH750血液分析仪及配套试剂，Olympus CX31显微镜，改良牛鲍氏计数盘，草酸铵稀释液(自配，用于手工计数血小板)，BASO瑞姬氏染色液。EDTA-K2，枸橼酸钠和肝素锂三种真空采血管均使用奥地利非可替公司产品。

1.3 方法 对EDTA-PTCP患者和健康体检者，按要求用EDTA-K2、枸橼酸钠和肝素锂三种真空采血管采集静脉血，颠倒混匀8次，分别于采血后5min、30min、60min用LH750血液分析仪测定血小板计数(PLT)；采集末梢血按照全国临床检验操作规程[2]要求手工计数血小板。每个标本测定两次取平均值。将上述标本涂片染色，显微镜下观察血小板形态。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计量资料以均值或均数±标准差(±s)表示。5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后3个时间段PLT比较、三种抗凝剂采血后30min时的PLT及手工计数PLT比较采用单因素方差分析；20例健康体检者EDTA-K2采血管采血后不同时间段PLT与枸橼酸钠、肝素锂、手工计数相应观察时间段之间PLT差异采用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EDTA-K2不同时间PLT检测结果 5例EDTA-PTCP患者经EDTA-K2采血管采血后3个时间段的PLT检测结果见表1。EDTA-K2采血管采血后30min时和60min时的PLT分别与5min时PLT检测结果比较明显减少，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。

表15 例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管不同时间PLT检测结果(×109/L)

2.2 不同抗凝剂PLT及手工计数PLT比较 5例 EDTA-PTCP患者经三种采血管采血后30min的PLT及血小板手工计数结果表明：5例患者的EDTA-K2采血管PLT分别为34×109/L、37×109/L、26×109/L、32× 109/L、24×109/L，均明显低于枸橼酸钠采血管PLT(分别为203×109/L、136×109/L、107×109/L、162×109/L、131×109/L)、肝素锂采血管PLT(分别为237×109/L、143×109/L、124×109/L、191×109/L、139×109/L)及手工计数(分别为141×109/L、146×109/L、122×109/L、175× 109/L、145×109/L)的PLT结果，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见图1。

图1 三种抗凝剂30min时PLT及手工计数血小板结果(×109/L)

2.3 健康体检者3种抗凝剂PLT及手工计数比较 20例健康体检者经三种采血管采血后5min、30min和60min的PLT及相应时间的手工计数PLT结果见表2，结果表明EDTA-K2采血管采血后各观察时间段的PLT与枸橼酸钠采血管、肝素锂采血管、手工计数之间PLT差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.4 血涂片镜检结果 5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后30min和60min时抗凝血涂片染色均见明显的聚集和卫星现象；未抗凝直接涂片染色见血小板散在分布(图2)。20例健康体检者EDTA-K2抗凝血涂片及未抗凝血直接涂片染色见血小板散在分布，未见明显的聚集和卫星现象。

表2 20例健康体检者不同时间段EDTA-K2采血管PLT与枸橼酸钠、肝素锂、手工计数之间PLT比较(±s，×109)

表2 20例健康体检者不同时间段EDTA-K2采血管PLT与枸橼酸钠、肝素锂、手工计数之间PLT比较(±s，×109)

注：表中t值和P值为枸橼酸钠、肝素锂、手工计数PLT分别与EDTA-K2采血管PLT进行比较。

测定时间5min 30min 60minP值0.89 0.88 0.94例数20 20 20 EDTA-K2222±42 223±44 218±41枸橼酸钠198±47 196±45 191±47t值1.70 1.91 1.93P值0.09 0.06 0.06肝素锂211±49 206±46 209±51t值0.76 1.19 0.68P值0.45 0.24 0.49手工计数224±39 221±40 220±40t值0.13 0.15 0.08

图2 聚集卫星现象（A）和正常血小板（B）

3 讨 论

随着血液分析仪的普及和真空采血管的广泛应用，由EDTA-K2引起的假性血小板减少的报道也逐年增多[3-6]，据文献报道EDTA-PTCP发病率为0.07%～0.21%[7]。由于血液分析仪常将凝集的血小板误认为白细胞，如过度依赖血液分析仪，容易引起对EDTA-PTCP患者的误诊。在血液分析仪的散点图中，白细胞阈值线左下方出现明显的颗粒团，仪器常将一些与白细胞大小相似的血小板聚集体误认为白细胞，使得血小板结果偏低，而白细胞偏高。血液分析仪有血小板聚集(Platelet clumps)报警提示，所以当血液分析仪出现报警信息时一定要查看散点图，并根据复片规则涂片染色，观察血小板大小、形态以及有无聚集。

本研究历时7个月，观察到的EDTA依赖性假性血小板减少症患者为5例。用EDTA-K2真空采血管采集患者静脉血，分别于采血后5min，30min，60min用LH750血液分析仪测定PLT。检测结果表明，EDTA-K2采血后30min和60min的PLT与5min时的检测结果相比明显减少。而5例EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血后30min和60min抗凝血涂片染色均见明显的聚集和卫星现象；同时观察到EDTA-PTCP患者的未抗凝直接涂片染色与健康体检者EDTA-K2抗凝血涂片及健康体检者未抗凝血直接涂片染色一样，未见明显的聚集和卫星现象，血小板呈散在分布。EDTA-PTCP患者EDTA-K2采血管采血后30min时的PLT明显低于相应时间段枸橼酸钠采血管、肝素锂采血管及手工计数PLT，而健康体检者EDTA-K2采血管采血后不同时间段的PLT与相应时间段枸橼酸钠、肝素锂、手工计数PLT之间结果差异无统计学意义(P＞0.05)。因此，作者认为对疑似EDTA-PTCP患者可以用EDTA-K2采血管重新采血立即测定，或不使用抗凝剂直接抽血立即测定。也可使用枸橼酸钠或肝素锂抗凝管初步确认，但要警惕多种抗凝剂引起血小板假性减少[8-10]。在更换抗凝剂的同时涂片染色并手工计数PLT得到正确的结果。

近年来，由抗凝剂引起的血小板假性减少得到高度关注，由于这种假性血小板减少常导致给患者增加许多不必要的检查，甚至创伤性骨髓穿刺涂片、输注血小板等治疗，给患者带来身心痛苦和不必要的经济负担，甚至引起医疗纠纷。因此，建议临床医生和检验科医生都应该对EDTA-PTCP要有足够的警惕，工作中遇到首次出现血小板严重减少的患者，特别是无明显出血症状的患者要认真查找原因，及时沟通，排除检测方面的影响因素，为临床提供正确的结果，避免临床误诊误治。

[1]涂传清,吴建曾,赵 锦,等.EDTA依赖性假性血小板减少症1例[J].临床血液学杂志,2006,19(4)：46-247.

[2]叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M].3版,南京：东南大学出版社,2006：136-137.

[3]胡先泳,陈 峻.EDTA依赖性假性血小板检测[J].血栓与止血学,2013,19(5)：227-232.

[4]邵永生,郑宏伟.组合检验法在EDTA依赖性假性血小板减少症中的应用[J].国际检验医学杂志,2012,33(16)：2036-2037.

[5]马 力,张 静,韩志梅,等.EDTA依赖性假性血小板减少症检测方法的探讨[J].中国实用医药,2014,9(24)：20-21.

[6]常菁华,王剑飚.EDTA依赖性假性血小板减少的实验室解决思路[J].检验医学,2014,29(7)：733-737.

[7]Yoneyama A,Nakahara K.EDTA-dependent Pseudothrombocytopenia differentiation form true thrombocytopenia[J].Nippon Rinsho, 2003,61(4)：569-575.

[8]王 欣,张丽萍,高晓丽.抗凝剂EDTA及枸橼酸钠导致血小板假性减少现象的分析[J].中国卫生检验杂志,2008,18(12)：2650-2651.

[9]王 威.多种抗凝条件下血小板假性减少1例报道[J].国际检验医学杂志,2014,35(21)：3006-3007.

[10]何海洪,陈艳清,贾 建,等.枸橼酸钠和EDTA抗凝同时依赖的假性血小板减少症1例[J].广东医学,2013,34(23)：3546.

Investigation on the detection method for EDTA-dependent pseudothrombocytopenia.

CHEN Ai-lian,MA Xiao-hong.Department of Clinical Laboratory,Rugao People'Hospital,Rugao 226500,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the reliability of the methods for detecting EDTA-dependent pseudothrombocytopenia(EDTA-PTCP).MethodsBlood samples were collected from 5 patients of EDTA-PTCP and 20 healthy subjects by three anticoagulant tubes(EDTA-K2,sodium citrate and heparin lithium)and peripheral blood dilution.Platelets were determined by haematology analyzer 5min,30min,60min after the samples were collected by anticoagulant tubes,as well as determined manually under the microscope for peripheral blood samples collected.Smear staining was performed to observe platelet morphology.ResultsIn the five DTA-PTCP patients,the platelet count of EDTA-K2anticoagulant tube was significantly lower at 30min and 60min after sample collection than at 5min (P＜0.05).Platelet of EDTA-K2anticoagulant tube from the 5 patients showed significant aggregation during smear staining,while the platelet of EDTA-K2anticoagulant tube from the 20 healthy subjects and the peripheral blood(manual counting)showed scattered distribution.30min after blood collection,the platelet count of EDTA-K2anticoagulant tube was significantly lower than that of sodium citrate anticoagulant tube,heparin lithium anticoagulant tube, manual counting(P＜0.05).In 20 healthy subjects,no significant difference exist in the results between EDTA-K2anticoagulant tube and sodium citrate anticoagulant tube,heparin lithium anticoagulant tube,manual counting(P＞0.05).ConclusionFor suspected patients of EDTA-PTCP,blood samples can be collected by EDTA-K2anticoagulant tube or draw directly without anticoagulant for immediate platelet determination.Samples can also be collected by using sodium citrate or lithium heparin anticoagulant tube for initial identification.Smear staining and manual counting should be performed to obtain correct results.

Ethylene diamine tetraacetic acid(EDTA);Sodium citrate;Heparin lithium;Pseudothrombocytopenia;Platelet count

R558+.2

A

1003—6350（2015）21—3170—03

2015-06-29)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1153

马小宏。E-mail：1974277014@qq.com